一种溶藻弧菌噬菌体GRNRZ-P25及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种溶藻弧菌噬菌体GRNRZ

【技术实现步骤摘要】
一种溶藻弧菌噬菌体GRNRZ
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P25及其应用


[0001]本专利技术涉及水产养殖业微生物技术应用领域，具体为一种溶藻弧菌噬菌体GRNRZ
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P25及其应用。

技术介绍

[0002]溶藻弧菌是海洋鱼类、甲壳类动物和软体动物重要的致病菌之一，已成为水产养殖业的严重威胁。在水产养殖过程中，细菌群落的动态平衡对鱼类或甲壳类幼体的生存、发育和性能方面发挥着至关重要的作用。许多消毒剂和抗生素被用于抑制病原菌和治疗水产养殖疾病，但在应用传统措施后很快就出现了抗生素耐药性和药物残留，抗生素耐药性是当今人类健康、粮食安全和经济发展面临的最大威胁之一。控制病原体和维持菌群动态平衡的另一种方法是使用噬菌体。噬菌体疗法在水产养殖设施中预防和控制病原体感染方面备受关注
[0003]噬菌体是地球上数量最多的生物，它们与细菌有着特异性的相互作用，并在细菌裂解后释放后代。噬菌体分为烈性噬菌体和温和噬菌体，烈性噬菌体可以感染和裂解宿主细菌，具有特异性强、自我增殖快的特点。然而，大量溶藻弧菌噬菌体仍然缺乏详细的基因组信息。因此，需要进一步详细了解溶藻弧菌噬菌体的生物学和基因组特征，以更好地了解和评估它们对细菌病原体的功能，为此，本专利技术提出一种溶藻弧菌噬菌体GRNRZ
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P25，为溶藻弧菌的生物控制提供新的方法。

技术实现思路

[0004]为应对溶藻弧菌的耐药性及对养殖产业的经济损失问题，本专利技术目的是提供一种溶藻弧菌噬菌体GRNRZ
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P25及其应用，创造了一种优势、高效、绿色、安全和可工业应用的溶藻弧菌生物控制新方法。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术是通过如下的技术方案来实现：申请人在广西北海某水产养殖水塘，分离出一株溶藻弧菌噬菌体GRNRZ
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P25，所述噬菌体在2022年12月保藏至中国典型培养物保藏中心，地址中国武汉武汉大学；保藏编号为CCTCCNO：CCTCCM20222040，分类命名：溶藻弧菌噬菌体GRNRZ
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P25。
[0006]进一步的，所述噬菌体GRNRZ
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P25具有高发酵率，在最佳感染复数MOI＝0.001时，发酵6h，效价可达8.0
×
10
10
PFU/mL，对工业发酵提供了理论基础。
[0007]进一步的，所述噬菌体GRNRZ
‑
P25裂解谱广，对429株溶藻弧菌中410株具有裂解效果，裂解率达95.6％，对138株副溶血弧菌中63株具有裂解效果，裂解率达45.7％，对59株哈维氏弧菌中36株具有裂解效果，裂解率达61.0％，对水产中占比大的弧菌均有效果。
[0008]本专利技术的有益效果：。
[0009]1.该溶藻弧菌噬菌体GRNRZ
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P25应用于溶藻弧菌的生物控制过程中，具有裂解谱广、杀菌效率高的优势，对水产中占比大的弧菌均有效果。
[0010]2.该溶藻弧菌噬菌体GRNRZ
‑
P25在水产养殖中溶藻弧菌的预防和杀灭具有巨大应
用潜力，具有优秀的杀菌效率和抑菌表现，抑菌作用长达24小时。
附图说明
[0011]图1为本专利技术一种溶藻弧菌噬菌体GRNRZ
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P25的噬菌斑图；
[0012]图2为本专利技术反应溶藻弧菌噬菌体GRNRZ
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P25的pH值稳定性；
[0013]图3为本专利技术一种溶藻弧菌噬菌体GRNRZ
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P25于不同温度的稳定性图。
具体实施方式
[0014]为使本专利技术实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施方式，进一步阐述本专利技术。
[0015]实施例1：溶藻弧菌噬菌体GRNRZ
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P25的分离纯化
[0016]在广西北海某水产养殖水塘采集水样6份，每份50mL，6000rpm/min离心10min，取上清，并用0.22μm滤器除菌，取5mL处理后上清液与0.5mL溶藻弧菌(浓度为5
×
108CFU/mL左右)混合均匀，静止吸附15min后，放置于28℃培养箱中150rpm/min振荡发酵培养过夜；取发酵后液体6000rpm/min离心10min，取上清，并用0.22μm滤器除菌，得种子滤液，取滤液100μL与300μL溶藻弧菌(浓度为5
×
108CFU/mL左右)混合均匀，静止吸附15min后，将混合物与2％氯化钠TSB半固体(含0.65％琼脂)混合均匀，浇筑在2％氯化钠TSA底板上，待凝固后，将培养皿放置于37℃培养箱中培养过夜。记录培养皿噬菌体的效价，在培养皿上挑取噬菌斑透而亮的斑点，于1mLSM液中振荡解吸附后过0.22μm的微孔滤膜除菌得噬菌体滤液，将其接种于5mL2％氯化钠TSB液体培养基中，加入100uL相应的宿主溶藻弧菌菌液并混匀，静止吸附15min，37℃下150rpm/min过夜培养，5000rpm/min离心10min取上清后以细菌滤膜过滤，采用双层平板法观察噬菌斑形态。重复操作3
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5次后，即可得形状和大小一致的噬菌斑。所分得溶藻弧菌噬菌体GRNRZ
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P25与宿主菌形成的噬菌斑透亮、圆形、直径为1mm。该噬菌体GRNRZ
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P25已于2022年12月送至中国典型培养物保藏中心保藏，分类命名：溶藻弧菌噬菌体(Vibrioalginolyticusphage)GRNRZ
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P25，地址：中国武汉武汉大学，保藏编号：CCTCCM20222040.
[0017]实施例2：溶藻弧菌噬菌体GRNRZ
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P25对溶藻弧菌裂解范围实验
[0018]采用双层点滴法来测定噬菌体的裂解谱。准备好足量的盛有3mL的2％氯化钠TSB的EP管，429株溶藻弧菌、138株副溶血弧菌和59株哈维氏弧菌接种于该培养基中，37℃恒温200rpm/min振荡7h，得到弧菌菌液；准备好足量的TSA底板，将0.9ml弧菌菌液与50℃左右6ml的2％氯化钠TSB半固体培养基(含0.65％琼脂)混合均匀，缓慢平铺于TSA底板之上；平板培养基凝固至常温后，取溶藻弧菌噬菌体GRNRZ
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P25溶液(效价1
×
109PFU/ml)7μL滴于双层板中心，等溶液自然风干后，放置于37℃恒温生化培养箱中培养7h左右，观察结果。每组实验重复3次。
[0019]结果如表所示，溶藻弧菌噬菌体GRNRZ
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P25具有高裂解率，对429株溶藻弧菌中410株具有裂解效果，裂解率达95.6％，对138株副溶血弧菌中63株具有裂解效果，裂解率达45.7％，对59株哈维氏弧菌中36株具有裂解效果，裂解率达61.0％，说明溶藻弧菌噬菌体GRNRZ
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P25裂解谱较宽，在水产养殖中溶藻弧菌的预防和杀灭具有巨大应用潜力。
[本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种溶藻弧菌噬菌体GRNRZ
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P25，其特征在于：包括溶藻弧菌噬菌体GRNRZ
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P25，申请人在广西北海某水产养殖水塘，分离出一株溶藻弧菌噬菌体GRNRZ
‑
P25，所述噬菌体在2022年12月保藏至中国典型培养物保藏中心，...

【专利技术属性】
技术研发人员：王喜亮，张秀玲，黄金梅，吕佩琳，李越，
申请(专利权)人：‑，
类型：发明
国别省市：