一种霍氏肠杆菌酶制剂、制备方法及其在烟丝处理中的应用技术

本发明专利技术公开了一种霍氏肠杆菌酶制剂、制备方法及其在烟丝处理中的应用。该霍氏肠杆菌酶制剂包括霍氏肠杆菌，霍氏肠杆菌为(Enterobacter hormaechei)F34，于2022年4月29日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC No.24827。本发明专利技术的霍氏肠杆菌酶制剂，可以在4h内明显提升低次烟丝吸食品质。处理时间短，避免了长时间发酵，而且通过处理后的低次烟丝快速高效的提高了香气质和香气量、降低刺激，能改善低次烟丝的口感，同时还增加了甜度。该霍氏肠杆菌酶制剂的应用，为烟丝尤其是低次烟丝的处理找到了新的出路，大大降低了低次烟丝的库存。大大降低了低次烟丝的库存。大大降低了低次烟丝的库存。

【技术实现步骤摘要】
一种霍氏肠杆菌酶制剂、制备方法及其在烟丝处理中的应用


[0001]本专利技术涉及烟草
，特别涉及一种霍氏肠杆菌酶制剂、制备方法及其在烟丝处理中的应用。

技术介绍

[0002]霍氏肠杆菌是一种直杆菌，革兰氏阴性，周生鞭毛运动，兼性厌氧。容易在普通培养基上生长，发酵葡萄糖，产酸产气，VP实验阳性，MR实验阴性，一般可利用柠檬酸盐和丙二酸盐作为唯一的C源和能源，不从硫代硫酸盐产生H2S。多数菌株可将明胶缓慢液化，不产生脱氧核糖核酸酶。
[0003]科学研究发现，在化学应用方面，已知的霍氏肠杆菌群具有生产2，3
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丁二醇、青霉素，降解胡萝卜素、多糖、还原糖等多种功能，还有一部分菌产生可以产生降解β
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胡萝卜素为β
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紫罗兰酮的生物酶。在生物方面，已有研究表明一株霍氏肠杆菌可通过加速促胸腺激素的分泌来发挥促生长作用，同时可以促进果蝇肠道细胞的增殖，可明显地促进果蝇的生长。而在减害方面，目前已有报导称筛选出一株可用于聚乙烯降解的霍氏肠杆菌。由此可知，霍氏肠杆菌群可在多个方面对科学研究提供帮助，具有巨大工业应用潜力。
[0004]目前烟草行业普遍存在低次烟叶库存量大的问题，为了降低其库存，只能进一步提升其在卷烟配方中的占比，但这也会导致其吸食品质降低，为了避免这一情况出现，行业内需要寻求一种可快速稳定提高低次烟叶内在品质的方法。
[0005]生物酶因其作用条件温和、操作简便以及安全有效等优点，已被广泛应用于食品、农业和医药等诸多行业。而烟叶在调制和醇化过程中很多物质的降解都需要酶的参与，所以酶对烟叶品质和风味的形成十分关键。并且由于酶是同一种类物质的催化剂，主要催化的是同一类反应，具有底物的专一性，催化反应效率高以及其作用条件温和等突出的特性，所以在烟草调制方面应用前景广阔，利用生物酶催化转化可有效调节烟叶中化学成分、降解大分子物质、增加香味成分，是一种提高烟叶品质的有效手段。另外，酶制剂与烟草添加剂、酶制剂与香料植物、酶制剂与微生物协同添加到烟草及烟草薄片中的相关研究也正在大力进行中。将不同种类的酶配合添加到烟草中进行催化转化，可以更好地将大分子的化合物质降解为小分子的香气物质，同时还可以加大单一酶的作用效率。因此，近年来应用生物酶改善烟叶内在化学成分是烟草行业的热点之一。

技术实现思路

[0006]本专利技术所要解决的技术问题是提供一种霍氏肠杆菌酶制剂、制备方法及其在烟丝处理中的应用，其克服了现有技术的上述缺陷。
[0007]本专利技术所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：
[0008]一种霍氏肠杆菌酶制剂，所述霍氏肠杆菌酶制剂包括霍氏肠杆菌，所述霍氏肠杆菌为(Enterobacter hormaechei)F34，于2022年4月29日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCCNo.24827，保藏地址：中国北京。
[0009]优选地，上述技术方案中，所述霍氏肠杆菌菌体的获得方法包括以下步骤：
[0010]1)培养基的配方：NaCl 10g/L，胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L；
[0011]2)菌株活化：将霍氏肠杆菌活化培养，得到霍氏肠杆菌活化液；
[0012]3)处理：将步骤2)中所得的活化菌液按体积比1％接种到上述步骤1)中的培养基中形成处理液，接种后的处理培养条件与活化培养条件相同，培养时间为6
‑
12小时；
[0013]4)将步骤3)中所得的处理液用超低温高速离心机4℃、8000r/min离心10min，所得到的沉淀物即为菌体，菌体
‑
30℃低温储存待用。
[0014]优选地，上述技术方案中，步骤2)中菌株活化条件为：25～35℃、pH5～7条件下，100～150r/min震荡培养12
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24小时。
[0015]霍氏肠杆菌酶制剂的制备方法，包括以下步骤：
[0016]1)菌体的破碎：称取适量菌按m：v＝1:15(g/ml)的比例溶于0.015M的PBS缓冲液中，用超声波细胞破碎仪进行破碎，每次破碎时长为10min，共破碎两次，细胞破碎后于4℃、10000r/min离心15min，离心后取上清；
[0017]2)酶蛋白盐析：向所得上清液中以PBS：(NH4)2SO4＝1:2的比例加入饱和硫酸铵溶液，低温静置3h，后经4℃、10000r/min离心15min，离心后倒出上清液，所得沉淀物暂放于
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30℃冰箱中；
[0018]3)盐离子透析：使用15mmol/L PBS溶液按照15倍体积将沉淀溶解，放入透析袋中，随后将透析袋放入装满50mmol/L PBS溶液的1000ml烧杯中低温搅拌，每2h换一次水，换三次，共计8h，得霍氏肠杆菌酶制剂。
[0019]一种抽吸时同时具有香气和口感的烟草制品。
[0020]一种霍氏肠杆菌酶制剂在烟丝处理中的应用。
[0021]优选地，上述技术方案中，包括以下步骤：按照100mg/g的加酶量向烟丝中喷施霍氏肠杆菌酶制剂，并使得喷施后的烟丝增加12％的水分，放入37℃恒温箱中处理4h，随后将其水分烘1min，卷制成烟。
[0022]优选地，上述技术方案中，所述烟丝为低次烟丝。
[0023]本专利技术上述技术方案，具有如下有益效果：
[0024]本专利技术的霍氏肠杆菌酶制剂，可以在4h内明显提升低次烟丝吸食品质。处理时间短，避免了长时间发酵，而且通过处理后的低次烟丝快速高效的提高了香气质和香气量、降低刺激，能改善低次烟丝的口感，同时还增加了甜度。该霍氏肠杆菌酶制剂的应用，为烟丝尤其是低次烟丝的处理找到了新的出路，大大降低了低次烟丝的库存。
附图说明
[0025]被结合在说明书中并构成说明书的一部分的附图示出了本专利技术的实施例，并且连同其说明一起用于解释本专利技术的原理。
[0026]图1为霍氏肠杆菌的平板图。
[0027]图2为霍氏肠杆菌的电镜图。
[0028]图3为霍氏肠杆菌系统进化树分析图。
[0029]图4为霍氏肠杆菌酶制剂胶图。
[0030]图5为霍氏肠杆菌酶制剂处理烟丝的主要成分的GC
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MS图。
具体实施方式
[0031]现在将参照附图来详细描述本专利技术的各种示例性实施例。应注意到：除非另外具体说明，否则在这些实施例中阐述的部件和步骤的相对布置、数字表达式和数值不限制本专利技术的范围。
[0032]实施例1霍氏肠杆菌
[0033]霍氏肠杆菌酶制剂，该霍氏肠杆菌酶制剂包括霍氏肠杆菌，霍氏肠杆菌为(Enterobacter hormaechei)F34，于2022年4月29日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC No.24827。
[0034]上述的霍氏肠杆菌菌株为革兰氏阴性菌，在平板上为黄色圆斑状(如图1所示)。
[0035]实验准备：...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种霍氏肠杆菌酶制剂，其特征在于，所述霍氏肠杆菌酶制剂包括霍氏肠杆菌，所述霍氏肠杆菌为(Enterobacter hormaechei)F34，于2022年4月29日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC No.24827。2.根据权利要求1所述的霍氏肠杆菌酶制剂，其特征在于，霍氏肠杆菌菌体的获得方法包括以下步骤：1)培养基的配方：NaCl 10g/L，胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L；2)菌株活化：将霍氏肠杆菌活化培养，得到霍氏肠杆菌活化液；3)处理：将步骤2)中所得的活化菌液按体积比1％接种到上述步骤1)中的培养基中形成处理液，接种后的处理培养条件与活化培养条件相同，培养时间为6
‑
12小时；4)将步骤3)中所得的处理液用超低温高速离心机4℃、8000r/min离心10min，所得到的沉淀物即为菌体，菌体
‑
30℃低温储存待用。3.根据权利要求2所述的霍氏肠杆菌酶制剂，其特征在于，步骤2)中菌株活化条件为：25～35℃、pH 5～7条件下，100～150r/min震荡培养12
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24小时。4.根据权利要求1
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3任一所述的霍氏肠杆菌酶制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)菌体的破碎：称取适量菌按m：v＝1:15(g/ml)的比例溶于0.015M的PBS缓冲液中，用超声波细胞破碎仪进行破碎，每次破碎时长为10mi...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘强，赵声辰，张俊岭，刘博，陈孟起，何文婕，陈芝飞，孙志涛，黄申，芦尧，
申请(专利权)人：河南中烟工业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：