一种GhSAP6编码基因、棉花抗病模块miR530-SAP6及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种GhSAP6编码基因、棉花抗病模块miR530

【技术实现步骤摘要】
一种GhSAP6编码基因、棉花抗病模块miR530
‑
SAP6及应用


[0001]本专利技术涉及生物技术工程领域，特别是一种GhSAP6编码基因、棉花抗病模块miR530
‑
SAP6及应用。

技术介绍

[0002]棉花属于锦葵科棉属植物，其栽培种目前有4种，包括陆地棉、海岛棉、草棉和亚洲棉，其中陆地棉为主栽品种。棉花是一种重要的经济作物，棉花纤维是纺织工业的重要原料，棉籽油是食品和化工用油的主要来源之一，棉籽粕是牛羊等反刍动物饲料的蛋白添加成分。棉花的产量和品质易受到各种生物胁迫和非生物胁迫的影响，其中棉花黄萎病严重制约着棉花的生产。棉花黄萎病是一种土传性的维管束病害，其病原菌主要为大丽轮枝菌，该真菌属于半知菌亚门轮枝菌属。病原菌从棉花根部入侵，引起植株病变，严重影响着棉花的纤维产量和品质。由于棉花黄萎病分布范围广，危害严重，传播途径多和生存时间长等特点，为解决当前这个棘手的问题，培育抗病品种是最经济有效的方法。然而，棉花抗病品种培育的难点在于抗病种质资源的获得。目前，由于缺乏抗病免疫的种质资源，所以利用常规育种方法很难有效地培育抗病品种。因此，利用基因工程技术挖掘抗病相关基因，创制抗病新品种，成为当前解决棉花黄萎病危害的重要研究方向。总之，提高棉花的抗病性对于棉花的安全生产及人民美好生活具有重要意义。
[0003]microRNAs(miRNAs)是长度约为19
‑
24个核苷酸的非编码蛋白的小RNA家族，在转录后调控靶标基因表达。miRNA在植物纤维发育、信号传导、逆境响应、激素合成、形态建成等方面发挥着重要作用。
[0004]植物抗病基因的挖掘主要涉及一些调控基因表达的调控因子，主要包括调控蛋白和转录因子。其中转录因子又称反式作用因子，特异结合到真核基因启动子区域顺式作用元件上，并激活或抑制下游基因的转录。这些转录因子主要包括SAP、MYB、bZIP、WRKY和NAC等，他们在植物生长发育和防卫反应中发挥着重要的作用。本专利技术涉及的SAP转录因子是植物转录因子家族中重要的一类转录因子家族，参与植物生长发育和防卫反应等过程。
[0005]近年来，一些文献报道miRNA和SAP转录因子参与植物抗病反应，然而，参与棉花抗黄萎病反应的miRNA
‑
SAP转录因子的研究较少，尤其深入评析这些基因的抗病性研究很少。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是要解决现有技术中存在的不足，提供一种GhSAP6编码基因、棉花抗病模块miR530
‑
SAP6及应用，从而为棉花抗黄萎病育种提供依据。
[0007]为达到上述目的，本专利技术是按照以下技术方案实施的：
[0008]本专利技术的第一个目的是要提供一种棉花GhSAP6编码基因，所述棉花GhSAP6编码基因为：
[0009]SEQ ID NO.2所示的蛋白质；
[0010]或将SEQ ID NO.2所示的蛋白质通过一个或多个氨基酸的替换、缺失或/和插入而
衍生得到的仍具有GhSAP6转录因子功能或活性的蛋白变体；
[0011]或SEQ ID N0.3所示的碱基序列；
[0012]或在SEQ ID N0.3所示的碱基序列基础上进行一个或多个碱基的替换、缺失或/和插入的碱基序列变体，且该碱基序列变体所编码的蛋白仍具有GhSAP6转录因子的功能或活性。
[0013]进一步地，所述SEQ ID N0.2所示氨基酸序列组成的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接有如下标签：
[0014]标签残基序列Poly
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Arg5
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6个RRRRRPoly
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His2
‑
10个HHHHHHFLAG8个DYKDDDDKStrep
‑
tag II8个WSHPQFEKc
‑
myc10个EQKLISEEDL。
[0015]本专利技术的第二个目的是要提供一种棉花GhSAP6编码基因在培育抗黄萎病棉花中的应用。
[0016]本专利技术的第三个目的是要提供一种棉花抗病模块miR530
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SAP6，包括GhSAP6编码基因和ghr
‑
miR530编码基因，所述ghr
‑
miR530编码基因为：
[0017]SEQ ID NO.1所示的核苷酸。
[0018]本专利技术的第四个目的是要提供一种棉花抗病模块miR530
‑
SAP6在培育抗黄萎病棉花中的应用。
[0019]与现有技术相比，本专利技术提供的GhSAP6基因提高棉株抗病性，而提供的棉花抗病模块miR530
‑
SAP6通过使ghr
‑
miR530沉默后的棉株可以增强棉株抗病性，ghr
‑
miR530和GhSAP6作为一个抗病模块负向调控抗病，可以作为棉花抗黄萎病育种的候选基因。
附图说明
[0020]图1为棉花GhSAP6与拟南芥SAPs系统发育树分析对比图。
[0021]图2为大丽轮枝菌侵染棉花后ghr
‑
miR530和GhSAP6在不同时间点的表达谱分析示意图。
[0022]图3为ghr
‑
miR530和GhSAP6在烟草叶片GUS染色分析示意图。
[0023]图4为棉花ghr
‑
miR530沉默和过表达植株表达分析示意图。
[0024]图5为棉花ghr
‑
miR530沉默和过表达植株及对照植株发病情况示意图。
[0025]图6为棉花ghr
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miR530沉默和过表达植株及对照植株病值统计示意图
[0026]图7为棉花GhSAP6基因沉默分析示意图。
[0027]图8为棉花GhSAP6基因沉默植株和对照植株发病情况示意图。
[0028]图9为棉花GhSAP6基因沉默植株和对照植株病值统计示意图。
具体实施方式
[0029]为使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进
行进一步的详细说明。此处所描述的具体实施例仅用于解释本专利技术，并不用于限定专利技术。
[0030]首先对以下实施例所用的试剂、材料等的来源作说明：
[0031]有关试剂盒使用参照所购试剂盒的应用说明；所用限制性内切酶和其它工具酶均购自TaKaRa公司。
[0032]棉花材料为中棉所35，购自山西农业科学院棉花研究所种苗公司。烟草材料、大肠杆菌
‘
DH5α
’
感受态细胞和根癌农杆菌菌株
‘
GV3101
’
由植物基因组学国家重点实验室保存。黄萎病菌菌株(大丽轮枝菌，V.dahliae)
‘
V991
’
，由中国农业科学院植物保护研究所简桂良研究员馈赠。各种限制性内本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种棉花GhSAP6编码基因，其特征在于：所述棉花GhSAP6编码基因为：SEQ ID NO.2所示的蛋白质；或将SEQ ID NO.2所示的蛋白质通过一个或多个氨基酸的替换、缺失或/和插入而衍生得到的仍具有GhSAP6转录因子功能或活性的蛋白变体；或SEQ ID N0.3所示的碱基序列；或在SEQ ID N0.3所示的碱基序列基础上进行一个或多个碱基的替换、缺失或/和插入的碱基序列变体，且该碱基序列变体所编码的蛋白仍具有GhSAP6转录因子的功能或活性。2.根据权利要求1所述的棉花GhSAP6编码基因，其特征在于：所述SEQ ID N0.2所示氨基酸序列组成的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接有如下标签：标签残基序列Poly
‑
Arg5
‑
6个RRRRRPoly<...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴家和，胡广，权永刚，姜辉，胡保民，陈爱民，
申请(专利权)人：新疆九中禾棉种有限公司，
类型：发明
国别省市：