一种吡丙醚、非泼罗尼复方制剂中有关物质的检测方法技术

本发明专利技术提供了一种吡丙醚、非泼罗尼复方制剂中有关物质的检测方法，属于药物分析技术领域。所述检测方法采用高效液相色谱法(HPLC)对吡丙醚、非泼罗尼复方制剂中的有关物质进行检测，依次配制供试品溶液、对照溶液，将供试品溶液、对照溶液分别注入高效液相色谱仪，采用十八烷基硅烷键合硅胶柱为色谱柱，以乙腈

【技术实现步骤摘要】
一种吡丙醚、非泼罗尼复方制剂中有关物质的检测方法


[0001]本专利技术属于药物分析
，具体涉及一种吡丙醚、非泼罗尼复方制剂中有关物质的检测方法。

技术介绍

[0002]跳蚤是世界上许多地区犬、猫最常见的寄生虫，它可以在宠物中诱发跳蚤叮咬性皮炎，造成宠物主人的极大烦恼。其中，猫栉首蚤是最常见的宠物寄生虫品种，其生物学特性非常复杂。只有一小部分跳蚤种群是在长期寄居在动物体表，其余的是环境中的卵、幼虫、虫蛹和新长成的成虫。由于常规杀虫剂的单次治疗往往不能得到令人满意的长期效果，因此非常需要采取具有策略的方法加以控制。
[0003]吡丙醚非泼罗尼复方制剂是在非泼罗尼单方制剂的基础上，增加了驱杀跳蚤卵和幼虫作用的组分，能够更有效地控制宠物体表及环境中的跳蚤数量，防治跳蚤引起的过敏性皮炎，从根除感染源的角度避免二次污染。而目前在欧美兽用注册认证中，针对跳蚤更多幼年生命阶段的药物，主要有甲氧普烯和吡丙醚，吡丙醚和甲氧普烯均为局部外用给药。但与吡丙醚相比，同样作为外用制剂使用时甲氧普烯在体外水性环境中代谢较为迅速，在紫外光作用下也非常不稳定，该药物并不适于在暴露的环境下使用。反之，吡丙醚化学特性稳定、持久，在处理户外活动的宠物时，吡丙醚、非泼罗尼复方外用制剂具有更大的优势。
[0004]现有技术主要为非泼罗尼、吡丙醚含量或单一成分有关物质的检测方法。农业部公告第2138/2026/1938号公布非泼罗尼中有关物质的检测方法，具体色谱条件为C18柱为色谱柱，甲醇
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乙腈
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水(50:15:35)为流动相，220nm为检测波长。我们采用Cosmosil 5C18
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MS
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II (4.6mm
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150mm，5μm)色谱柱，将该方法用于吡丙醚非泼罗尼复方制剂的检测，发现已知杂质之间及已知杂质与主成分之间均能很好分离，但吡丙醚出峰时间为69.045min，主成分出峰滞后。工信部发布的HG/T 5239公布了吡丙醚及其生产中产生的杂质组成的吡丙醚原药的检测方法，具体色谱条件为C18柱(4.6mm
×
250mm，5μm)为色谱柱，乙腈
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水(80:20) 为流动相，273nm为检测波长，吡丙醚保留时间约为10.2min。该方法用于复方制剂检测，由于非泼罗尼极性较吡丙醚小，出峰时间更早，同时吡丙醚非泼罗尼复方制剂破坏试验中产生的杂质数量多，出峰均在吡丙醚之前，故该方法不利于主成分与杂质、辅料的有效分离。
[0005]综合以上可以发现，对于包含非泼罗尼、吡丙醚与相关杂质及辅料的复方制剂，现有方法并不能满足各色谱峰间分离度、灵敏度、准确度的要求，无法有效控制产品质量，从而影响该药物临床使用的安全性。

技术实现思路

[0006]本专利技术旨在解决现有技术中存在的问题，提供一种吡丙醚、非泼罗尼复方制剂中有关物质分离和测定的方法。选用乙腈
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甲醇
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水体系作为流动相A、乙腈
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甲醇混合液作为流动相B，并通过改变流动相的比例，应用梯度洗脱的方式，对吡丙醚、非泼罗尼复方制剂进行有关物质检测。
[0007]为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：
[0008]一种吡丙醚、非泼罗尼复方制剂中有关物质的检测方法，所述方法为：
[0009]精密称取吡丙醚、非泼罗尼复方制剂，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液为供试品溶液；将供试品溶液注入高效液相色谱仪中进行检测并记录色谱图；
[0010]色谱条件如下：
[0011]色谱柱：Cosmosil 5C18
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MS
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II柱，规格4.6mm
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150mm，5μm；
[0012]流动相A：乙腈
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甲醇
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水混合液，其混合比例为(11～51):(11～51):(18～58)；
[0013]流动相B：乙腈
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甲醇混合液，其混合比例为(5～95):(5～95)；
[0014]流速：0.8～1.2ml/min；
[0015]柱温：20～30℃；
[0016]检测波长：210～280nm；
[0017]所述梯度洗脱条件为：
[0018]时间(min)流动相A(v/v％)流动相B(v/v％)090～1000～101568～8812～322568～8812～322890～1000～103890～1000～10
[0019]优选地，所述梯度洗脱条件为：
[0020]时间(min)流动相A(v/v％)流动相B(v/v％)095～1000～51573～8317～272573～8317～272895～1000～53895～1000～5
[0021]更优选地，所述梯度洗脱条件为：
[0022]时间(min)流动相A(v/v％)流动相B(v/v％)01000157822257822281000381000
[0023]优选地，所述流动相A：乙腈
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甲醇
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水混合液，其混合比例为(26～36):(26～36): (33～43)。
[0024]优选地，所述流动相B：乙腈
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甲醇混合液，其混合比例为(40～60):(40～60)。
[0025]进一步优选地，所述流动相A中乙腈、甲醇、水的用量比为31:31:38。
[0026]进一步优选地，所述流动相B中乙腈、甲醇的用量比为50:50。
[0027]优选地，所述流速为1.0ml/min。
[0028]优选地，所述柱温为25℃。
[0029]优选地，所述检测波长为275nm。检测器为紫外吸收(UV)检测器。
[0030]有益效果：
[0031]1.本专利技术建立了一种完整的吡丙醚、非泼罗尼复方制剂中有关物质的检测方法。该检测方法各主成分之间及杂质与主成分之间分离较好，分离得到的杂质数量较多，且该系统能有效分离降解杂质，具有较强的专属性。
[0032]2.本专利技术方法为吡丙醚、非泼罗尼复方制剂中有关物质的定量检测提供了依据。
附图说明
[0033]图1：实施例1中混合对照品HPLC图谱；
[0034]图2：实施例1中吡丙醚对照品HPLC图谱；
[0035]图3：实施例1中非泼罗尼对照品HPLC图谱；
[0036]图4：实施例1中空白辅料溶液HPLC图谱；
[0037]图5：实施例1中供试品溶液HPLC图谱；
[0038]图6：实施例1中吡丙醚、非泼罗尼制剂酸破坏HPLC图谱；
[0039]图7：实施例1中吡丙醚、非泼罗尼制剂碱破坏HPLC图谱；
[0040]图8：实施例1中吡丙醚、非泼罗尼制剂氧化破坏HPLC图谱；
[0041]图9：实施例1中吡丙醚、非泼罗尼制剂高温破坏HPLC图谱本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种吡丙醚、非泼罗尼复方制剂中有关物质的检测方法，其特征在于，所述检测方法为采用高效液相色谱法进行梯度洗脱，色谱条件如下：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱；流动相A：乙腈
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甲醇
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水混合液，其混合比例为(11～51):(11～51):(18～58)；流动相B：乙腈
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甲醇混合液，其混合比例为(5～95):(5～95)；梯度洗脱条件为：时间(min)流动相A(v/v％)流动相B(v/v％)090～1000～101568～8812～322568～8812～322890～1000～103890～1000～102.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱条件为：时间(min)流动相A(v/v％)流动相B(v/v％)095～1000～51573～8317～272573～8317～272895～1000～53895～1000～53.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱条件为：时间(min)流动相A(v/v％)流动相B...

【专利技术属性】
技术研发人员：张朋丽，张晓鹏，李守军，侯亚婷，李亚玲，刘爱玲，李梁，李强，樊雅茹，
申请(专利权)人：瑞普天津生物药业有限公司，
类型：发明
国别省市：