增强协同作用的益生菌混合发酵方法技术

本发明专利技术涉及益生菌发酵技术领域，尤其涉及一种增强协同作用的益生菌混合发酵方法；鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热乳杆菌和副干酪乳杆菌的拮抗作用主要源于其代谢产物中含有的过氧化氢，重组细胞中包含过氧化氢酶基因，在共同发酵培养时，重组细胞中的过氧化氢酶基因得到表达，使代谢产物中持续产生的过氧化氢得到降解，另一方面，重组细胞中还包含产生丙酮酸的基因，在共同发酵培养时，持续产生丙酮酸，丙酮酸的生成能够促进鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热乳杆菌和副干酪乳杆菌共同发酵的协同作用，有效提高其共同发酵的效率。有效提高其共同发酵的效率。

【技术实现步骤摘要】
增强协同作用的益生菌混合发酵方法


[0001]本专利技术涉及益生菌发酵
，尤其涉及一种增强协同作用的益生菌混合发酵方法。

技术介绍

[0002]益生菌是指一类可通过改善肠道菌群平衡而对人的健康产生有利影响的活性微生物添加剂，已被广泛用于食品生产中。
[0003]由于益生菌活菌期时间短，在加工和贮藏过程中保证生物活性是其产品面临的巨大挑战。
[0004]通过多菌种混合发酵，利用菌种之间的优势互补，即利用其中一株菌的代谢物刺激另一株菌的生长代谢，从而产生单菌发酵无法获得的产物及高活菌数。
[0005]但是多菌种混合发酵时，会产生不利于其他菌种生长的代谢产物，因此产生拮抗作用，抑制多菌种共同发酵，而菌种发酵产生的部分代谢产物能够促进其他菌种的发酵。
[0006]因此，如何改进多菌种发酵方法，减弱多菌种之间的拮抗作用，同时增强多菌种的协同作用，成为亟需解决的技术问题。

技术实现思路

[0007]本专利技术所要解决的技术问题是：如何改进多菌种发酵方法，减弱多菌种之间的拮抗作用，同时增强多菌种的协同作用。
[0008]为了解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案为：
[0009]一种增强协同作用的益生菌混合发酵方法，包括以下步骤：
[0010]构建第一重组质粒，所述重组质粒包含NC_009792.1基因序列；
[0011]构件第二重组质粒，所述重组质粒包含DD259296.1基因序列；
[0012]将第一重组质粒和第二重组质粒共同转化至大肠杆菌感受态细胞，获得重组细胞；
[0013]重组细胞、鼠李糖乳杆菌CGMCC No.14410)、嗜酸乳杆菌(CGMCCNo.4649)、嗜热乳杆菌(CGMCC No.0784)和副干酪乳杆菌杆菌(CCTCCNO:201217)共同接种于发酵培养基中；所述发酵培养基添加有葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、酵母粉和甜味剂，添加无机盐；所述葡萄糖的加入量为重量g/体积ml比0.1～1.5％，蛋白胨的加入量为重量g/体积ml比0.05～1％，酵母膏的加入量为重量g/体积ml比0.01～0.2％，酵母粉的加入量为重量g/体积ml比0.01～0.1％；所述的无机盐为K2HPO4·
3H2O 0.1g/100ml、KH2PO40.1g/100ml、FeSO4·
7H2O5.0mg/100ml、ZnSO4·
7H2O 4.4mg/100ml、MgSO4·
7H2O 25mg/100ml，每培养4h，观察发酵液的OD值变化。
[0014]进一步，上述增强协同作用的益生菌混合发酵方法中，所述重组质粒的载体选自pET
‑
28a(+)。
[0015]进一步，上述增强协同作用的益生菌混合发酵方法中，所述大肠杆菌选自DH5α。
[0016]进一步，上述增强协同作用的益生菌混合发酵方法中，所述构建重组质粒包括对载体通过限制性内切酶进行双酶切，所述限制性内切酶选自BamHI和EcoRI。
[0017]进一步，上述增强协同作用的益生菌混合发酵方法中，得到第一扩增产物的所述PCR扩增的引物为：
[0018]上游引物：5
’‑
GATTC GGGATCCCATGCTTTTCCCA
‑3’
[0019]下游引物：3
’‑
AATTC TCGATGTAGTTCCCTTTGCGT
‑5’
。
[0020]进一步，上述增强协同作用的益生菌混合发酵方法中，得到第二扩增产物的所述PCR扩增的引物为：
[0021]上游引物：5
’‑
GATTC GCAACGGGGTTATCAACTGC
‑3’
[0022]下游引物：3
’‑
AATTC GCGTGACATCCATCACTCCT
‑5’
。
[0023]本专利技术的有益效果在于：鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热乳杆菌和副干酪乳杆菌的拮抗作用主要源于其代谢产物中含有的过氧化氢，重组细胞中包含过氧化氢酶基因，在共同发酵培养时，重组细胞中的过氧化氢酶基因得到表达，使代谢产物中持续产生的过氧化氢得到降解，另一方面，重组细胞中还包含产生丙酮酸的基因，在共同发酵培养时，持续产生丙酮酸，丙酮酸的生成能够促进鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热乳杆菌和副干酪乳杆菌共同发酵的协同作用，有效提高其共同发酵的效率。
具体实施方式
[0024]为详细说明本专利技术的
技术实现思路
、所实现目的及效果，以下结合实施方式予以说明。
[0025]实施例1
[0026]从NCBI中获取基因组序列NC_009792.1，如下：
[0027]ATGCTGTCTCTGAATAAACCACTTCAGGAATTTAGTAAGCTCGATAAGTGCCTGTCTAAATACGGCACGTACTTTGAATACGCCGATGAAAAGCAGGTTGTCTATTCGAATGATGCCAATCAAGGCGATACGTTTGTCATTTTAGACGGTCTCATCTCTTTGCGCAGAGGGGAGAACGTGCTTATGGGGATAACGCAGGCTCCCTTTATTATGGGGATTGCTGATGGCGTGATGAAAAATGATATCGAATATAAATTAGTCACGGAAAGTCGTGGTACCGGTTATTTTCTTCCTTCTTCCCACGCGATAAAAATCCTTGAGCAACACCAGTTATGGCGTGAAGCCTTTTGCTGGCTGGCATGGGAAAACAGAACTCTGGAACTGCGCGATCTGCAATTAATTGGCAATAACTCGTATGATCAAATTCGGGCGACGTTGATCGCGATGGTTGACTGGGATGAAGGCCTGCGAGCGCGTATTGGCGTGATGAACTACATTCATCAGAGAACGCGAATTTCCCGTTCCGTAGTGGCTGAAGTGCTCGCCGCGTTACGCAAAGGGAACTACATCGAAATGAAAAAAGGCAAACTGGTCAATATCAACCATTTGCCTTCAGAGTATTGA
[0028]设计引物：
[0029]上游引物：5
’‑
GATTC GGGATCCCATGCTTTTCCCA
‑3’
[0030]下游引物：3
’‑
AATTC TCGATGTAGTTCCCTTTGCGT
‑5’
。
[0031]以上引物中，在上游引物增加了限制性内切酶BamHI可识别的粘性末端序列GATTC，在下游引物增加了限制性内切酶EcoRI可识别的粘性末端序列AATTC；
[0032]人工合成上述引物序列以及基因组序列NC_009792.1；在常规PCR体系下扩增后，得到第一扩增产物；
[0033]将第一扩增产物与载体pET
‑
28a(本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.增强协同作用的益生菌混合发酵方法，其特征在于，包括以下步骤：构建第一重组质粒，所述重组质粒包含NC_009792.1基因序列；构件第二重组质粒，所述重组质粒包含DD259296.1基因序列；将第一重组质粒和第二重组质粒共同转化至大肠杆菌感受态细胞，获得重组细胞；重组细胞、鼠李糖乳杆菌CGMCC No.14410)、嗜酸乳杆菌(CGMCCNo.4649)、嗜热乳杆菌(CGMCC No.0784)和副干酪乳杆菌杆菌(CCTCCNO:201217)共同接种于发酵培养基中；所述发酵培养基添加有葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、酵母粉和甜味剂，添加无机盐；所述葡萄糖的加入量为重量g/体积ml比0.1～1.5％，蛋白胨的加入量为重量g/体积ml比0.05～1％，酵母膏的加入量为重量g/体积ml比0.01～0.2％，酵母粉的加入量为重量g/体积ml比0.01～0.1％；所述的无机盐为K2HPO4·
3H2O 0.1g/100ml、KH2PO40.1g/100ml、FeSO4·
7H2O5.0mg/100ml、ZnSO4·
7H2O 4.4mg/100ml、MgSO4·
7H2O 25mg/100ml，每培养4h，观察发酵液的OD值变化。2.根据权利要求1所述的增强协同作用的益生菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄平，
申请(专利权)人：福州一诺维生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：