白刺花多糖在制备抗肿瘤药物中的应用及提取方法技术

本发明专利技术公开了一种超声酶解法提取白刺花多糖的方法，属于中药有效成分提取的技术领域。本发明专利技术意在提供了水提醇沉法提取白刺花多糖的优化工艺。本发明专利技术以提取时间、提取温度、液料比为影响因素设计Box

【技术实现步骤摘要】
白刺花多糖在制备抗肿瘤药物中的应用及提取方法


[0001]本专利技术属于中药有效成分提取的
，涉及到白刺花多糖的的制备方法及应用。

技术介绍

[0002]白刺花(Sophora davidii)为豆科槐属植物，以根、茎、叶以及花入药，是我国少数民族常用药物之一，多生长于山坡路旁灌木丛中或草坡，在我国云南、贵州、四川等多省均有广泛分布。白刺花味苦，性凉，功能主治清热解毒，利湿消肿；全草含生物碱、黄酮苷、氨基酸、多糖等活性成分。
[0003]癌症作为困扰全球的疾病，目前患病人数仍处于逐年上升趋势，其高病死率严重影响人类生命健康安全。近年来，中药活性成分在癌症的治疗领域备受关注，开发新的抗癌天然药物成为研究热点。相比于目前常用的抗癌方式，例如手术、放疗以及化疗，中药活性成分在兼顾有效性及生物利用度的同时，可减少患者治疗过程的不适。目前中药活性成分已被广泛认可接受，成为癌症治疗手段之一。
[0004]目前研究表明，白刺花活性成分除了具有良好的血糖调控、抗炎作用外，在抗氧化活性与免疫调节等方面也表现出较好的活性。本专利技术提供一种白刺花多糖的提取方法及其在抗肝癌领域的应用，为该领域进一步研究提供参考。

技术实现思路

[0005]本专利技术的一个目的在于，提供一种超声酶解法提取白刺花多糖的方法，并提供了白刺花多糖新的应用方向。
[0006]为了实现本专利技术目的，具体采用如下技术手段：
[0007]白刺花多糖提取方法如下：
[0008](1)粉碎：取白刺花适量置于中药粉碎机中，粉碎过筛得到白刺花粗粉，备用；
[0009](2)提取：将步骤(1)所得白刺花粗粉与纯化水混合均匀，加入1％复合酶超声提取2次，过滤，合并两次滤液得白刺花粗提液；
[0010](3)浓缩：将步骤(2)所得白刺花多糖粗提液经减压浓缩至黏稠，得白刺花多糖浓缩液备用；
[0011](4)醇沉：上述步骤(3)所得浓缩液放冷后加入乙醇溶液搅拌均匀，置离心机中分离上清液与下层沉淀物；取离心一次后的上层清液重复该步骤，收取两次沉淀物，并将离心所得上清液回收处理；
[0012](5)精制：将步骤(4)所得沉淀物加纯化水搅拌溶解，得白刺花多糖溶解液；重复步骤(4)对复溶的白刺花多糖溶解液二次醇沉；
[0013](6)干燥：将步骤(5)所得全部醇沉物转移至蒸发皿中，置烘箱中干燥至恒重即得白刺花多糖。
[0014]优选的，所述步骤(1)白刺花粉碎至粗粉粒径为15～80目。
[0015]优选的，所述步骤(2)白刺花粗粉与水的液料比为5～15mL/g；超声提取时间为30～90min；超声功率为300～500W；提取温度为20～70℃。所述复合酶为纤维素酶、淀粉酶、果胶酶、木聚糖酶、β
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葡聚糖酶中的一种或几种。
[0016]优选的，所述步骤(3)减压浓缩过程真空度控制在
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0.07～
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0.1Mpa；旋蒸水浴温度为40～60℃；浓缩至加入水体积的1/5～1/15。
[0017]优选的，所述步骤(4)乙醇浓度为60％～95％，加入乙醇体积为浓缩液体积的3～5倍，离心转速在4500～5500r/min。
[0018]优选的，所述步骤(6)干燥温度为40～60℃；干燥时间为20～60min。
[0019]优选的，所述提取工艺得到的白刺花多糖对癌细胞增殖具有抑制作用。
[0020]优选的，所述癌细胞为肝癌细胞SMMC
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7721、HepG2。
[0021]有益效果
[0022]本专利技术采用超声酶解辅助提取法，复合酶可水解白刺花细胞壁，配合超声提取，可使有效活性成分更好的析出。本专利技术采用水提醇沉法，该步骤中乙醇可回收使用，降低能耗与污染。
[0023]该方法提取的白刺花多糖在体外显示对肝癌细胞的增殖具有抑制作用。
附图说明
[0024]图1硫酸
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蒽酮法检测多糖含量标准曲线。
[0025]图2白刺花多糖液料比单因素影响试验图。
[0026]图3白刺花多糖提取时间单因素影响试验图。
[0027]图4白刺花多糖提取次数单因素影响试验图。
[0028]图5白刺花多糖提取温度单因素影响试验图。
[0029]图6白刺花多糖液料比
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提取时间响应面试验曲面图。
[0030]图7白刺花多糖液料比
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提取温度响应面试验曲面图。
[0031]图8白刺花多糖提取时间
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提取温度响应面试验曲面图。
[0032]具体实施方法
[0033]硫酸
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蒽酮法建立多糖标准曲线。
[0034]硫酸溶液(12mol/L)：以分析纯浓硫酸(18mol/L)配置成12mol/L的硫酸溶液。
[0035]蒽酮溶液：把50mg研成细末的蒽酮加至50mL硫酸溶液中，摇散蒽酮，并放置过夜以得到饱和溶液。将该溶液放于具塞的深色玻璃瓶中，暗处保存，用时过滤。
[0036]取葡聚糖约0.2g，精密称定，至30ml硫酸溶液中，放置过夜，然后再以硫酸溶液稀释至250ml，混合均匀，制得0.8mg/mL的葡聚糖标准溶液。分别精密移取葡聚糖标准溶液0.5mL、1mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3.0mL于50mL容量瓶中，加入蒽酮溶液4mL，摇匀，90℃水浴30分钟，放冷至室温，用硫酸溶液稀释至刻度并摇匀，作为标准系列溶液。在625nm下测定吸光度值，并绘制标准曲线。见图1。
[0037]白刺花多糖液料比单因素影响试验。
[0038]称取白刺花粗粉10g，将白刺花粗粉与纯化水按液料比6～12mL/g混合均匀，加入1％复合酶于50℃超声提取2次，每次60min，过滤，合并两次滤液，测定结果，结果见图2。
[0039]白刺花多糖提取时间单因素影响试验。
[0040]称取白刺花粗粉10g，将白刺花粗粉与纯化水按液料比10mL/g混合均匀，加入1％复合酶于50℃超声提取2次，分别提取30～90min，过滤，合并两次滤液，测定结果，结果见图3。
[0041]白刺花多糖提取次数单因素影响试验。
[0042]称取白刺花粗粉10g，将白刺花粗粉与纯化水按液料比10mL/g混合均匀，加入1％复合酶于50℃分别超声提取1
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5次，每次60min，过滤，合并两次滤液，测定结果，结果见图4。
[0043]白刺花多糖提取温度单因素影响试验。
[0044]称取自刺花粗粉10g，将白刺花粗粉与纯化水按液料比10mL/g混合均匀，加入1％复合酶分别于30℃～70℃超声提取2次，每次60min，过滤，合并网次滤液，测定结果，结果见图4。
[0045]根据单因素试验结果，白刺花多糖含量随提取次数呈正相关，综合考虑时间、能耗等因素，为提高提取效率，因此确定提取次数为2次，并根据单因素实验结果中本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.白刺花多糖在制备抗肿瘤药物中的应用及提取方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)粉碎：取白刺花适量置于中药粉碎机中，粉碎过筛得到白刺花粗粉，备用；(2)提取：将步骤(1)所得白刺花粗粉与水混合均匀，加入复合酶超声提取2次，过滤，合并两次滤液得白刺花粗提液；(3)浓缩：将步骤(2)所得白刺花粗提液减压浓缩至黏稠，得白刺花多糖浓缩液备用；(4)醇沉：上述步骤(3)所得浓缩液放冷后加入乙醇溶液搅拌均匀，置离心机中分离上清液与下层沉淀物；取离心一次后的上层清液重复该步骤，收取两次沉淀物，并将离心所得上清液回收处理；(5)精制：将步骤(4)所得沉淀物加纯化水搅拌溶解，得白刺花多糖溶解液；重复步骤(4)对复溶的白刺花多糖溶解液二次醇沉；(6)干燥：将步骤(5)所得全部醇沉物转移至蒸发皿中，置烘箱中干燥至恒重即得白刺花多糖。2.根据权利要求1所述，其特征在于，所述白刺花粉碎至粗粉粒径为15～80目。3.根据权利要求1所述，其特征在于，白刺花粗粉与水的液料比为5～15mL/g；...

【专利技术属性】
技术研发人员：董自波，徐旭辉，王洞川，
申请(专利权)人：江苏神曲医药有限公司，
类型：发明
国别省市：