CFLAR的抑制剂在治疗ARID1A缺失型肿瘤中的应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药领域，具体涉及CFLAR的抑制剂在治疗ARID1A缺失型肿瘤中的应用。具体地，本发明专利技术提供了以下任意一种或多种基因的抑制剂在制备ARID1A缺失型癌症药物中的应用：CFLAR、PHIP、FTO和ADRB3。或者，本发明专利技术提供了ARID1A抑制剂与CFLAR、PHIP、FTO和ADRB3的抑制剂中一种或多种组合使用在制备癌症药物中的应用。应用。应用。

【技术实现步骤摘要】
CFLAR的抑制剂在治疗ARID1A缺失型肿瘤中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及CFLAR的抑制剂在治疗ARID1A缺失型肿瘤中的应用。

技术介绍

[0002]合成致死（Synthetic lethality）理论由来已久，通俗来讲，指两个非致死基因同时失活将导致细胞死亡的现象。概念最早可以追溯到1992年，美国科学家卡尔文在果蝇的研究中发现，具有pd和 Pdr双基因突变的果蝇不能存活，而这其中任何一个基因单独突变都不会导致果蝇死亡。1946年，西奥多
·
多布赞斯基正式提出“合成致死”概念，用来描述这种不同基因之间的互补性致死作用。
[0003]合成致死对癌症研究有重要影响。合成致死率的概念为癌症治疗的发展开辟了一条新的途径，即在识别出癌症特异性突变后，靶向合成致死目标。随着越来越强大的工具和应用合成致死概念，药物靶点和遗传背景的确定无疑将是一种有效的治疗选择和患者的变革机会。许多研究人员已经预见到使用合成致命性基因筛查来识别药物组合和发现特定基因型癌症的特定弱点的巨大潜力。
[0004]ARID1A是人类癌症中最常见的突变基因之一，在多种肿瘤中发生突变或缺失，在卵巢透明细胞癌的突变率高达60%。前期研究显示，ARID1A可通过多种机制影响肿瘤的发生发展，如调控增强子活性、调节细胞周期和DNA损伤检查点、与p53相互作用调控p53下游靶基因表达、负调节TERT转录活性等。大多数ARID1A突变都是失活突变，也即其细胞是ARID1A缺陷型细胞，ARID1A缺陷与多种肿瘤类型突变负荷增加有关。
[0005]目前针对ARID1A缺陷型肿瘤还没有特异疗法。本专利技术所提供的治疗靶点对于ARID1A缺陷型肿瘤治疗的影响具有重要的临床意义。

技术实现思路

[0006]为筛选ARID1A缺失型肿瘤的治疗靶点，本专利技术利用CRISPR基因编辑技术针对性筛选ARID1A的合成致死基因，鉴定ARID1A合成致死靶点，为ARID1A缺陷型（ARID1A缺失型）肿瘤患者的治疗提供药物靶点。
[0007]具体地，本专利技术提供以下技术方案：第一方面，本专利技术提供了以下任意一种或多种基因的抑制剂在制备ARID1A缺失型癌症药物中的应用：CFLAR、PHIP、FTO和ADRB3。
[0008]另一方面，本专利技术提供了ARID1A抑制剂与以下一种或多种抑制剂组合使用在制备癌症药物中的应用：CFLAR的抑制剂、PHIP的抑制剂、FTO的抑制剂和ADRB3的抑制剂。
[0009]优选地，所述抑制剂（基因抑制剂）包括CRISPR技术、RNA干扰技术、反义寡核苷酸（ASO）技术、TALEN技术、ZFN技术、Cre
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loxP 基因重组技术等基因编辑技术所使用的试剂。
[0010]在另一种具体实施例中，所述抑制剂还可以是对具体基因表达具有特异性抑制效果的化合物，具体包括竞争性抑制剂或非竞争性抑制剂，非限制性举例如：FTO的抑制剂有
FB23
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2、Rheic Acid、Dac51、FB23等。
[0011]优选地，本专利技术所述抑制剂是CRISPR技术中所使用的试剂。
[0012]如本专利技术所使用术语“CRISPR技术”也可称为CRISPR/Cas技术，该技术中CRISPR是指规律间隔成簇短回文重复序列/规律间隔成簇短回文重复序列相关核酸酶系统（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats/CRISPR
‑
associated proteins）；Cas是指CRISPR
‑
associated proteins，也即CRISPR相关蛋白，具有靶向和/或剪切靶核酸的活性。Cas蛋白种类众多，最常见的例如Cas9、Cas12等，不同cas蛋白的引导序列设计原则不同，但都是本领域技术人员所熟知的。Cas蛋白通过引导序列达到特异性靶向位点，达到精准基因编辑（包括基因敲除）的目的。
[0013]具体地，所述CRISPR技术中所使用的试剂是本领域所熟知的，具体地至少包括Cas蛋白和引导序列（可称为sgRNA）。如本专利技术所使用的引导序列是通过两个oligo退火后连接到分子载体上使用的，两个oligo中反向互补的部分即为引导序列。例如，靶向ARID1A的sgRNA是通过序列分别为caccgATGGTCATCGGGTACCGCTG和aaacCAGCGGTACCCGATGACCATG的oligo反向互补构成的，则靶向ARID1A的引导序列即为ATGGTCATCGGGTACCGCTG，也即得知两个oligo的情况下，其反向互补序列即为引导序列（sgRNA），也即为Cas蛋白所靶向的位点。
[0014]具体地，本专利技术针对ARID1A、CFLAR、PHIP、FTO、ADRB3设计并合成了特异性引导序列（sgRNA，其oligo如具体实施例所记载），所述特异性引导序列与Cas9蛋白组合使用即可以达到抑制（敲除）ARID1A、CFLAR、PHIP、FTO、ADRB3表达的目的。 也即本专利技术中将针对具体基因设计的特异性引导序列结合Cas蛋白就可以实现抑制具体基因表达的目的。包括针对具体基因所设计的特异性引导序列和Cas蛋白在内的试剂，就称为该具体基因的抑制剂。
[0015]优选地，所述抑制剂可以通过任意常规技术导入靶细胞（癌细胞），本专利技术具体实施例中具体使用了转染的方法，所述转染试剂可以是商品化的产品或自行配制的试剂；示例性的所述商品化产品包括Lipofectamine
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2000（Thermo Fisher Scientific）、Lipofectamine
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3000（Thermo Fisher Scientific）、Lipofectamine
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RNAiMAX（Thermo Fisher Scientific）、Neon
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转染系统（Thermo Fisher Scientific）、HiPerFect （QIAGEN）、X
‑
tremeGENE（Roche）、siLentFect
™
（Bio
‑
Rad）等。
[0016]如本文所用，“癌症”和“肿瘤”是可互换的术语，是指动物中任何异常细胞或组织的生长或增殖。如本文所用，术语“癌症”和“肿瘤”涵盖实体癌和血液/淋巴癌，并且还涵盖恶性、恶性前和良性生长，诸如发育异常。癌症的非限制性实例包括：肺癌、小细胞肺癌（SCLC）、非小细胞肺癌（NSCLC）、尿道癌、鳞状细胞癌、小细胞肺癌、垂体癌、食管癌、星形细胞瘤、软组织肉瘤、肺腺癌、肺鳞状癌、腹膜癌、肝癌、胃肠道癌、胰腺癌、胶质母细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌（liver cancer）、膀胱癌、肝细胞瘤、乳腺癌、结肠癌、结直肠癌、子宫内膜或子宫癌（包括子宫体子宫内膜癌）、唾液腺癌、肾癌（kidney cance本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.以下一种或多种基因的抑制剂在制备ARID1A缺失型癌症药物中的应用：CFLAR、PHIP、FTO和ADRB3。2.ARID1A抑制剂与以下一种或多种基因的抑制剂组合在制备癌症药物中的应用：CFLAR、PHIP、FTO和ADRB3。3.如权利要求1或2所述的应用，所述抑制剂包括CRISPR技术、RNA干扰技术、反义寡核苷酸技术、TALEN技术、ZFN技术、Cre
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loxP 基因重组技术中所使用的试剂，或者，所述抑制剂是针对基因具有特异性抑制效果的化合物。4.如权利要求3所述的应用，所述抑制剂是CRISPR技术中所使用的试剂。5.如权利要求4所述应用，所述CRISPR技术中所使用的试剂包括Cas蛋白和特异性引导序列。6.如权利要求1或2所述的应用，所述药物中还包括合适的药学可接受载体。7.如权利要求1或2所述的应用，所述癌症包括肺癌、尿道癌、鳞状细胞癌、小细胞肺癌、垂体癌、食管癌、星形细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：王晓月，梁俊波，王町町，古雅妮，
申请(专利权)人：中国医学科学院基础医学研究所，
类型：发明
国别省市：