本发明专利技术提供了一种RAGE/DIAPH1信号通路抑制剂及其应用，属于高胆固醇血症治疗技术领域。本发明专利技术首次提出RAGE/DIAPH1信号通路在高胆固醇血症及其并发症中的作用，提供了一种以抑制RAGE/DIAPH1信号通路来治疗高胆固醇血症及其并发症的作用靶点。本发明专利技术首次揭示了RAGE/DIAPH1信号通路在介导高胆固醇血症引发的动脉粥样硬化、肝损伤在形成过程中的作用机制，抑制RAGE/DIAPH1信号通路异常激活，可促进血管舒张和/或内皮再生，减轻肝损伤和血管翳的形成，对肝脏保护具有重要作用，为开发高胆固醇血症及其并发症的治疗药物提供了理论基础。础。础。
【技术实现步骤摘要】
一种RAGE/DIAPH1信号通路抑制剂及其应用
[0001]本专利技术属于高胆固醇血症治疗
，尤其涉及一种RAGE/DIAPH1信号通路抑制剂及其应用。
技术介绍
[0002]血脂异常是导致多种慢性病的关键危险因素之一，高胆固醇血症是引发动脉粥样硬化、肝损伤的关键致病性因素之一。AGE是蛋白质、脂质和核苷酸的异质糖基化产物，糖基化终末产物受体(RAGE)是AGE的主要受体，属于免疫球蛋白超家族的多配体跨膜受体。RAGE在肺、心脏、肾、脑和骨骼肌等多种组织中表达，存在于淋巴细胞、白细胞、巨噬细胞和内皮细胞等不同种类的细胞表面，影响细胞存活、细胞增殖、氧化应激和炎症反应，在慢性炎症疾病、糖尿病并发症的发生中发挥核心作用。Diaphanous 1(DIAPH1)是formin家族的成员，与RAGE细胞质结构域结合，是RAGE信号转导的关键效应器，对于下游信号通路的激活至关重要。据报道，RAGE/DIAPH1信号传导可调节氧化应激、炎症、细胞凋亡、自噬、内皮
‑
间质转化、内皮通透性和功能障碍。研究发现，抑制高脂饮食诱导小鼠RAGE信号通路的激活可发挥抗炎作用，但RAGE/DIAPH1信号通路在介导高胆固醇血症及其并发症发生和发展过程中的内皮功能障碍和肝损伤研究未见任何报道。同时，通过抑制RAGE/DIAPH1信号通路在高胆固醇血症及其并发症中的表达，可促进血管舒张和/或内皮再生及保护肝脏中的应用亦未见任何报道。
技术实现思路
[0003]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供RAGE/DIAPH1信号通路抑制剂在制备治疗高胆固醇血症及其并发症药物中的应用。
[0004]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：
[0005]本专利技术提供了RAGE/DIAPH1信号通路抑制剂在制备治疗高胆固醇血症药物中的应用。
[0006]本专利技术还提供了RAGE/DIAPH1信号通路抑制剂在制备治疗高胆固醇血症并发症药物中的应用。
[0007]优选的，所述高胆固醇血症并发症包括动脉粥样硬化和肝损伤。
[0008]优选的，所述RAGE/DIAPH1信号通路抑制剂包括shRNA，所述shRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0009]本专利技术还提供了一种RAGE/DIAPH1信号通路抑制剂shRNA，所述shRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0010]本专利技术还提供了一种表达载体，所述表达载体包括与至少一个表达控制序列可操作地连接的编码上述shRNA的DNA片段。
[0011]优选的，所述表达载体包括病毒、真菌或细菌表达载体。
[0012]本专利技术还提供了一种细胞，所述细胞包括上述shRNA，或包括上述表达载体。
TGCTGGCGGTTATTTATTATTAGTGCTGTGG(SEQ ID NO.1)。
[0028]本专利技术还提供了一种RAGE/DIAPH1信号通路抑制剂shRNA，所述shRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0029]本专利技术还提供了一种表达载体，所述表达载体包括与至少一个表达控制序列可操作地连接的编码上述shRNA的DNA片段。
[0030]在本专利技术中，所述表达载体优选的包括病毒、真菌或细菌表达载体，所述病毒表达载体优选的为腺病毒表达载体，更优选的为pAV[shRNA]‑
EGFP
‑
U6>rDiaph1载体。
[0031]本专利技术还提供了一种细胞，所述细胞包括上述shRNA，或包括上述表达载体。本专利技术对于所述细胞的具体种类没有特殊限定。
[0032]本专利技术还提供了一种上述表达载体或上述细胞在制备治疗高胆固醇血症或高胆固醇血症并发症药物中的应用。
[0033]本专利技术还提供了一种治疗高胆固醇血症或高胆固醇血症并发症的药物，所述药物包括上述shRNA。
[0034]本专利技术对于药物中含有的其他物质没有特殊限定，采用本领域药物制备时常用的辅料即可。
[0035]下面结合实施例对本专利技术提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本专利技术保护范围的限定。
[0036]下述实施例中，如无特殊说明，均为常规方法。
[0037]下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0038]下述实施例中的数据均采用SPSS 24.0软件进行数据分析，结果以均值
±
标准差表示，不同时间段各组间的比较采用重复测量数据的两因素方差分析，多组间比较采用单因素方差分析，符合方差齐性，采用LSD
‑
t检验，不符合方差齐性，采用Dunnett T3检验，P<0.05有统计学意义。
[0039]实施例1
[0040]高脂乳剂的制备及高脂饮食诱导大鼠模型构建
[0041]高脂乳剂配方：吐温60％+食用油15％+胆固醇6％+胆酸钠2％+丙基硫氧嘧啶0.2％+H2O16.8％(配方中的百分数均为质量百分含量)。制备方法：
①
食用油在80℃水浴中搅拌加热；
②
在加热后的食用油中加入胆固醇和丙基硫氧嘧啶，充分搅拌溶解；
③
加入胆酸钠和适量蒸馏水，充分搅拌使胆酸钠溶解；
④
加适量吐温，充分搅拌至产生乳化现象；
⑤
37℃温水稀释至100mL，
‑
20℃保存备用。灌胃前，将高脂乳剂置于60℃水浴中加热融化。
[0042]基础日粮配合高脂乳剂灌胃法构建高脂饮食(HFD)大鼠模型，按10mL/kg
·
d高脂乳剂给予大鼠灌胃，每只大鼠进食30g/d基础日粮，分3次定时定量饲喂，每周记录不同试验组大鼠体重的变化。
[0043]DIAPH1 shRNA腺病毒重组载体构建
[0044]参照NCBI GenBank(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/NM_001107393.3)大鼠DIAPH1 CDS区，设计1对DIAPH1
‑
shRNA(DIAPH1
‑
shRNA
‑
Sequence：CTGCTTTTCC TGCTGGCGGTTATTTATTATT AGTGCTGTGG)，构建pAV[shRNA]‑
EGFP
‑
U6>rDiaph1载体(见图1)，对DIAPH1
‑
shRNA质粒宿主菌扩大培养并进行质粒大提，
‑
20℃保存备用。
[0045]试验动物分组及样品采集
[0046]选取48只6周龄健康状况良好、体重相近(190
±
10g)SPF级雄性Wistar大鼠。室温下自由饮水，常规喂饲基础日粮1w后，根据组间平均体重相近原则，随机分为4个试验组(n＝12)，试验时间为6w(适应性饲养1w，正式试验5w本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.RAGE/DIAPH1信号通路抑制剂在制备治疗高胆固醇血症药物中的应用。2.RAGE/DIAPH1信号通路抑制剂在制备治疗高胆固醇血症并发症药物中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述高胆固醇血症并发症包括动脉粥样硬化和肝损伤。4.根据权利要求1
‑
3任意一项所述的应用，其特征在于，所述RAGE/DIAPH1信号通路抑制剂包括shRNA，所述shRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。5.一种RAGE/DIAPH1信号通路抑制剂shRNA，其特征在于，所述shRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。6.一种表达载体，其特...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈嘉，
申请(专利权)人：山西农业大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。