一种检测SARS-CoV-2病毒中和抗体的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种检测SARS

【技术实现步骤摘要】
一种检测SARS
‑
CoV
‑
2病毒中和抗体的试剂盒


[0001]本专利技术涉及抗体检测
，具体地，涉及一种检测SARS
‑
CoV
‑
2病毒中和抗体的试剂盒。

技术介绍

[0002]防止COVID
‑
19对人类的危害一直是科学家和疫苗企业努力的方向。冠状病毒在自然界中广泛存在，可以感染许多不同的动物，包括蝙蝠、猪、小鼠和人类。在2019年之前，已确认6种冠状病毒可引起人类呼吸道疾病，它们分别是HCoV
‑
229E、HCoV
‑
OC43、HCoV
‑
NL63、HCoV
‑
HKU1、SAR S
‑
CoV和MERS
‑
CoV。前4种病毒通常会引起轻微的疾病，例如普通感冒，而SARS
‑
CoV和MERS
‑
CoV会引起严重的危及生命的症状。到目前为止，世界卫生组织(WHO)监测了5种SARS
‑
CoV
‑
2特定的关注变体(VOC)，它们分别是Alpha、Beta、Gamma、Delta和Omicron。VOCs基因的突变会对SARS
‑
CoV
‑
2的特性产生很大影响，包括传播能力增强、致病性增加、抗体中和反应降低以及容易逃避诊断检测。
[0003]SARS
‑
CoV
‑
2冠状病毒是有包膜的单链正义RNA病毒，属于β冠状病毒。与其他冠状病毒一样，SARS
‑
CoV
‑
2病毒具有四种结构蛋白，分别是核衣壳蛋白(N)、包膜蛋白(E)、膜蛋白(M)和刺突蛋白(S)。其中，刺突蛋白(S)通过与细胞膜表面的受体血管紧张素转换酶2(ACE2)结合，介导病毒进入靶细胞，而Omicron变体可以通过内吞途径感染细胞某些部位。
[0004]当SARS
‑
CoV
‑
2病毒攻击人体时，人体免疫系统会迅速做出反应，同时启动体液免疫和细胞免疫，试图阻止病毒在宿主体内的扩散。浆细胞是对抗病毒的先驱，它们产生SARS
‑
CoV
‑
2冠状病毒特异性抗体，包括免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白A(IgA)和免疫球蛋白(IgG)。病毒感染的细胞可以在其膜表面表达病毒蛋白，单核细胞可以通过其携带的Fc受体进行识别，并介导抗体依赖性细胞毒性(ADCC)以清除这些病毒感染的细胞。SARS
‑
CoV
‑
2病毒特异性中和抗体(NAbs)可以识别并结合病毒表面刺突蛋白的某些特定表位，阻止病毒进入其靶细胞，提供数月的保护。此外，疫苗研究表明，人类SARS
‑
CoV
‑
2疫苗也可以刺激中和抗体反应，包括mRNA、DNA、蛋白质亚基、灭活、减毒活、病毒载体和病毒样颗粒疫苗。中和抗体不仅在病毒清除中发挥重要作用，而且为研究感染者或接种者的NAbs变化规律提供了途径。
[0005]目前广泛使用的SARS
‑
CoV
‑
2检测抗体方法是基于病毒核酸的实时逆转录聚合酶链反应(RT
‑
PC R)检测方法。该方法是医生判断患者急性感染和康复情况最有力、最有效的方法。此外，这种方法在社会COVID
‑
19防疫中效果很好。与之相比，血清检测分析在相关应用中帮助很大，例如识别具有强烈抗体反应的康复个体(这些患者可能是血清/血浆治疗的捐献者)；回顾性研究疫区流行病的发生和传播情况；帮助总结年龄、性别、遗传背景与COVID
‑
19的关系；评估某些疫苗诱导的免疫抗体反应或比较不同疫苗的后果。
[0006]经典的ELISA检测抗体的方法，需要在体外表达刺突蛋白并包被到板上，该过程会导致蛋白结构变化并需要检测人员花费大量精力。一方面，抗原多为原核表达，制作过程涉及较多处理步骤，导致其构像不能模拟COVID
‑
19S蛋白的受体结合域(RBD)的天然构像，可
能存在检出的抗体不能真实反应人体抗体的实际分布。另一方面，需要提取和纯化蛋白进行包板，工艺相对复杂，蛋白制作和保存成本高。抗原包被的过程中不可控因素较多，可能同一批次的孔板不同孔之间抗原的含量差异较大，不方便质控。
[0007]基于SARS
‑
CoV
‑
2感染细胞表达刺突蛋白的细胞内ELISA(icELISA)测定检测抗体方法，需要BSL3实验室的支持。胶体金试纸法存在的缺点是：一张试纸只能检测一个样品，不方便大规模实验而且灵敏度也不如ELISA法。另有文献报道用SARS
‑
CoV
‑
2刺突基因组噬菌体展示库(SARS
‑
CoV
‑2‑
S GFPDL)来了解IgM、IgG和IgA库的发展，但该方法操作困难切不适合实验室外使用。

技术实现思路

[0008]本专利技术的目的是克服现有技术的上述不足，提供一种检测SARS
‑
CoV
‑
2病毒中和抗体的试剂盒。
[0009]本专利技术的第一个目的是提供核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示的SARS
‑
CoV
‑
2病毒重组刺突蛋白基因在制备检测SARS
‑
CoV
‑
2病毒中和抗体产品中的应用。
[0010]本专利技术的第二个目的是提供氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的SARS
‑
CoV
‑
2病毒重组刺突蛋白在制备检测SARS
‑
CoV
‑
2病毒中和抗体产品中的应用。
[0011]本专利技术的第三个目的是提供一种含有所述的SARS
‑
CoV
‑
2病毒重组刺突蛋白基因的重组载体在制备检测SARS
‑
CoV
‑
2病毒中和抗体产品中的应用。
[0012]本专利技术的第四个目的是提供一种含有所述的SARS
‑
CoV
‑
2病毒重组刺突蛋白基因的重组细胞在制备检测SARS
‑
CoV
‑
2病毒中和抗体产品中的应用。
[0013]本专利技术的第五个目的是提供一种表达所述的SARS
‑
CoV
‑
2病毒重组刺突蛋白的重组细胞在制备检测SARS
‑
CoV
‑
2病毒中和抗体产品中的应用。
[0014]本专利技术的第六个目的是提供一种检测SARS
‑
CoV
‑
2病毒中和抗体的试剂盒。
[0015]为了实现上述目的，本专利技术是通过以下本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示的SARS
‑
CoV
‑
2病毒重组刺突蛋白基因在制备检测SARS
‑
CoV
‑
2病毒中和抗体产品中的应用。2.氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的SARS
‑
CoV
‑
2病毒重组刺突蛋白在制备检测SARS
‑
CoV
‑
2病毒中和抗体产品中的应用。3.一种含有权利要求1中所述的SARS
‑
CoV
‑
2病毒重组刺突蛋白基因的重组载体在制备检测SARS
‑
CoV
‑
2病毒中和抗体产品中的应用。4.一种含有权利要求1中所述的SARS
‑
CoV
‑
2病毒重组刺突蛋白基因的重组细胞在制备检测SARS
‑
CoV
‑
2病毒中和抗体产品中的应用。5.一种表达权利要求2中所述的SARS
‑
CoV
‑
2病毒重组刺突蛋白的重组细胞在制备检测SARS
‑
CoV
‑
2病毒中和抗体产品中的应用。6.根据权利要求4或5中所述的应用，其特征在于，所述重组细胞制备方法为：将权利要求3中所述的重组载体与Lenti慢病毒包装质粒结合，再转染到293T细胞中，孵育，收集培养基，得到含有权利要求1中所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：王忠芳，杨小云，宋涛，赵培静，杨础华，蒋丽婷，李小凤，黄东浪，
申请(专利权)人：广东省华微检测股份有限公司，
类型：发明
国别省市：