一种重组新冠肺炎病毒中和抗体的生产及放大工艺制造技术

本发明专利技术通过建立一套技术开发及放大平台，用于培养基，工艺参数，及放大确定。通过平台化工艺，仅需进行风险评估即可从2L直接放大至2000L规模。该方法包括摇瓶种子复苏与扩增，WAVE反应器细胞扩增，500L生物反应器扩增，2000L生物反应器原液生产和培养液离心收获及深层过滤。本发明专利技术用于快速细胞培养工艺开发及放大，可至少缩短细胞工艺开发周期3

【技术实现步骤摘要】
一种重组新冠肺炎病毒中和抗体的生产及放大工艺


[0001]本专利技术属于细胞工程领域，具体涉及一种动物细胞培养方法，特别涉及一种基于生产抗体的重组CHO细胞培养和扩大培养平台的重组新冠肺炎病毒中和抗体的生产及放大工艺。

技术介绍

[0002]新型冠状肺炎病毒(新冠病毒，下同)中和抗体是针对新冠病毒开发的生物药，用于新冠病毒引起的疫情，降低死亡率，相比小分子抗病毒药物，中和抗体特异性高，且可以更好的预防病毒感染。目前，针对新冠病毒的中和抗体包括新冠病毒重组人抗体SARS
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CoV/SARS
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CoV
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2S、新冠病毒ECD重组人抗体SARS
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CoV
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2S ECD、新冠病毒单克隆抗体SARS
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CoV
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2S等(Huang Yang,Sun Hui,Yu Hai,Li Shaowei,Zheng Qingbing,Xia Ningshao.Neutralizing antibodies against SARS
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CoV
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2:current understanding,challenge and perspective.[J].Antibody therapeutics,2020,3(4).)。由于新冠中和抗体是新的靶点，缺乏参考工艺，且其制剂剂量高，对时间要求紧迫，所以要求我们的细胞培养工艺有更高的表达量，开发出一种成熟的细胞培养开发及放大平台化的方法。
[0003]现有方法往往通过CHO细胞小规模培养的工艺进行研究，找出其细胞培养的工艺关键参数，并进行科学的从5L放大至200L培养规模，锁定工艺后进行至少三批的连续生产确认，能够证明放大后的工艺与原有工艺质量一致，蛋白表达量不低于原工艺水平，批次产量增加数倍，为CHO细胞培养放大的工业化生产提供支持。通过对工艺的放大研究，成功的将细胞培养规模从5L放大至200L，但是其基于传统的放大流程，摸索小规模工艺条件，从5L放大至200L规模，后续需放大至2000L规模仍需进行相应的研究和验证，耗费时间较长。

技术实现思路

[0004]本专利技术建立一套平台化的新冠病毒细胞培养工艺开发及放大的方法，快速确定细胞培养开发工艺及放大方法。具体而言，一方面，本专利技术提供一种重组抗体的生产及放大工艺，其特征在于，将抗体种子细胞持续扩增。
[0005]进一步，本专利技术提供一种重组抗体的生产及放大工艺，其特征在于，所述扩增为将种子细胞经过三次反应器生产培养后，培养体积扩增超过2100倍。
[0006]进一步，本专利技术提供一种重组抗体的生产及放大工艺，其特征在于，所述扩增为将种子细胞经过三次反应器生产培养后，培养体积扩增超过2100倍。
[0007]进一步，本专利技术提供一种重组抗体的生产及放大工艺，其特征在于，所述扩增为将种子细胞经过三次反应器生产培养后，培养体积由550ml扩增至1200L。
[0008]进一步，本专利技术提供一种重组抗体的生产及放大工艺，其特征在于，所述三次反应器为WAVE反应器生产培养、XDR500反应器生产培养和XDR2000反应器生产培养。
[0009]进一步，本专利技术提供一种重组抗体的生产及放大工艺，其特征在于，所述XDR2000反应器生产培养过程中需调整温度。
[0010]进一步，本专利技术提供一种重组抗体的生产及放大工艺，其特征在于，所述调整温度为培养至第3天时将温度由37.0℃调整至34.0℃。
[0011]进一步，本专利技术提供一种重组抗体的生产及放大工艺，其特征在于，所述WAVE反应器培养过程中需调整转速。
[0012]进一步，本专利技术提供一种重组抗体的生产及放大工艺，其特征在于，所述调整转速为培养至第3天时将转速由15rpm调整至20rpm。.
[0013]进一步，本专利技术提供一种重组抗体的生产及放大工艺，其特征在于，所述WAVE反应器培养过程中需要补加培养基。
[0014]进一步，本专利技术提供一种重组抗体的生产及放大工艺，其特征在于，所述补加培养基为培养至第3天时补加20kg的MC01基础培养基。
[0015]进一步，本专利技术提供一种重组抗体的生产及放大工艺，其特征在于，所述细胞从摇瓶向WAVE反应器扩增后，细胞体积由550ml到5L，所述WAVE反应器培养第3天后细胞体积由5L扩增至25L，所述细胞从WAVE反应器向XDR500反应器扩增后细胞体积由25L扩增至200L，所述细胞从XDR500反应器向XDR2000反应器扩增后细胞体积由200L扩增至1200L。
[0016]进一步，本专利技术提供一种重组抗体的生产及放大工艺，其特征在于，在三次反应器生产培养后进行碟片式离心和深层过滤。
[0017]进一步，本专利技术提供一种重组抗体的生产及放大工艺在制备重组新冠肺炎病毒中和抗体中的应用。
[0018]为更好理解本专利技术，首先定义一些术语。其他定义则贯穿具体实施方式部分而列出。
[0019]在此使用的术语“培养基”和“细胞培养基”指的是含有滋养生长的动物细胞，例如，哺乳动物细胞的养分的溶液，并且也指的是与细胞结合的培养基。
[0020]优选的哺乳动物细胞为中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。本领域技术人员周知通过基因工程改造的细胞和/或细胞系表达感兴趣的蛋白质的方法和载体。基因工程技术包括，但不限于表达载体、定向同源重组和基因激活。可选地，该蛋白质在异源调控元件，比如，在自然界中不引导多肽生产的启动子，的控制下表达。例如，该启动子可以为引导哺乳动物多肽表达的病毒型强启动子(例如，CMV，SV40)。该宿主细胞通常可以或不可以生产蛋白质。例如，该宿主细胞可以为CHO细胞，该CHO细胞通过基因改造产生蛋白质，意味着编码该蛋白质的核酸已经导入该CHO细胞中。
[0021]在此使用的术语“抗体”包括抗体或抗体衍生物，或其片段，并且抗体的说明也适用于本专利技术的抗体的制备。在抗体的片段中，功能相当或同源的抗体包括含有免疫球蛋白结合结构域的多肽或摹拟该结合结构域，以及Fc区或与Fc区或至少部分Fc区同源的区的肽。也包括与另一多肽融合的、含有免疫球蛋白结合结构域，或等同物的嵌合分子。
[0022]典型的抗体分子是完整的免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子含有抗体决定簇的部位，包括被称为Fab、Fab'、F(ab')2、Fc和F(v)，以及N
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多糖结构的这些部位。抗体描述了血清的功能成分并且通常指的是许多分子(抗体或免疫球蛋白，片段等等)或一种分子(抗体分子或免疫球蛋白分子)。抗体分子能与特定的抗原决定簇(抗原或抗原表位)结合或反应，这反过来可以诱导免疫效应机制。单独的抗体分子通常被看成是单一特异性的并且抗体分子的组合物可以是单克隆的(即，由相同的抗体分子组成)或多克隆的(即，由与相同抗
原上或有差别的不同的抗原上相同或不同表位反应的不同的抗体分子组成)。组成多克隆抗体的差别的和不同的抗体分子可以称为“成本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组抗体的生产及放大工艺，其特征在于，将抗体种子细胞持续扩增。2.如权利要求1所述一种重组抗体的生产及放大工艺，其特征在于，所述扩增为将种子细胞经过三次反应器生产培养后，培养体积扩增超过2100倍。3.如权利要求2所述一种重组抗体的生产及放大工艺，其特征在于，所述扩增为将种子细胞经过三次反应器生产培养后，培养体积由550ml扩增至1200L。4.如权利要求2所述一种重组抗体的生产及放大工艺，其特征在于，所述三次反应器为WAVE反应器生产培养、XDR500反应器生产培养和XDR2000反应器生产培养。5.如权利要求4所述一种重组抗体的生产及放大工艺，其特征在于，所述XDR2000反应器生产培养过程中需调整温度。6.如权利要求5所述一种重组抗体的生产及放大工艺，其特征在于，所述调整温度为培养至第3天时将温度由37.0℃调整至34.0℃。7.如权利要求4所述一种重组抗体的生产及放大工艺，其特征在于，所述WAVE反应器培养过程中需调整转速。8.如权利要求7所述一种重组抗体的生产及放大工艺，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：付小朋，陆游，丁满生，周帆，魏守祥，戚昭波，郝龙，代虎，沈红，
申请(专利权)人：江苏泰康生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：