抗严重急性呼吸系统综合征II型冠状病毒SARS-COV-2的中和抗体技术方案

本发明专利技术公开了一种抗严重急性呼吸系统综合征II型冠状病毒SARS

【技术实现步骤摘要】
抗严重急性呼吸系统综合征II型冠状病毒SARS
‑
COV
‑
2的中和抗体
[0001]本申请是申请号为：202111222859.3，申请日为：2021年10月20日，申请名称为：抗严重急性呼吸系统综合征II型冠状病毒SARS
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COV
‑
2的中和抗体的分案申请。


[0002]本专利技术涉及一种抗严重急性呼吸系统综合征II型冠状病毒SARS
‑
COV
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2的中和抗体，属于生物医药


技术介绍

[0003]抗严重急性呼吸系统综合征II型冠状病毒(SARS
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CoV 2)感染引起的肺炎(COVID
‑
19)是严重传染性疾病，并在全球范围内造成了严重影响。寻找针对该病毒的有效治疗方案是一种迫切需求。
[0004]中和抗体是指与病毒结合后能消除病毒感染能力的抗体，是当病原微生物侵入机体时由B淋巴细胞而产生的相应的抗体，是由适应性免疫应答细胞分泌的一种可溶性蛋白。病原微生物入侵细胞时需要依赖病原体自身表达的特定分子与细胞上的受体结合，才能感染细胞，并进一步扩增。中和抗体能够与病原微生物表面的抗原结合，从而阻止该病原微生物黏附靶细胞受体，防止侵入细胞。病毒侵入人体之后，B细胞把中和抗体分泌到血液里，抗体与血液里的病毒颗粒结合，阻止病毒感染细胞，破坏病毒颗粒，这样就把病毒“中和”掉了。由此可见，中和抗体在杀灭细胞外的游离病毒时起主要作用。
[0005]来自病毒感染治愈患者血液的某些特异性中和抗体具有中和病毒的作用，因而可用于感染性疾病的治疗，使病毒丧失致病力。随着抗体制备技术的进步，治疗性抗体已逐渐在多种疾病的治疗方面发挥了很好的效果。现有的疫苗如麻疹疫苗、脊髓灰质炎疫苗、乙肝疫苗、甲肝疫苗，都是使接种者产生中和抗体以预防病毒感染的。由于中和抗体可在病毒进入细胞之前破坏病毒并可清除体内细胞外的游离病毒，所以，基于病毒感染痊愈患者血液中的中和抗体可用于病毒感染的治疗。

技术实现思路

[0006]为解决上述技术问题，本专利技术从COVID
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19康复患者血液中提取外周免疫细胞，并从中筛选可以和新冠病毒抗原蛋白
‑
刺突蛋白结合的B细胞，然后对以生产抗体的单个B细胞在单细胞水平上进行分析，获得了B细胞内编码中和抗体可变区重链和轻链的基因序列。这些序列即可用来体外重新构建和表达可中和新冠病毒的中和抗体，有望用于新冠病毒所引起的肺炎等疾病的治疗和预防。
[0007]本专利技术的第一个目的是提供一种抗严重急性呼吸系统综合征II型冠状病毒SARS
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COV
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2的中和抗体，包括：轻链可变区DNA序列，以及重链可变区DNA序列；
[0008]所述轻链可变区DNA序列的核苷酸序列为SEQ ID NO.1
‑
5中的一种或多种组合；
[0009]所述重链可变区DNA序列的核苷酸序列为SEQ ID NO.6
‑
8中的一种或多种。
[0010]进一步地，所述的中和抗体为包含恒定区和可变区的完整抗体、只包含可变区的部分抗体或只包含可变区的嵌合抗体。
[0011]本专利技术的第二个目的是提供一种编码所述的中和抗体的基因。
[0012]本专利技术的第三个目的是提供一种携带所述的基因的表达载体。
[0013]本专利技术的第四个目的是提供一种表达所述的中和抗体的重组细胞。
[0014]本专利技术的第五个目的是提供所述的中和抗体在制备治疗肺炎COVID
‑
19的药物中的应用。
[0015]本专利技术的第六个目的是提供一种治疗肺炎COVID
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19的试剂盒，所述试剂盒内含有所述的中和抗体。
[0016]本专利技术的有益效果是：
[0017]本专利技术从COVID
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19康复患者血液中提取外周免疫细胞，并从中筛选可以和新冠病毒抗原蛋白
‑
刺突蛋白结合的B细胞，然后对以生产抗体的单个B细胞在单细胞水平上进行分析，获得了B细胞内编码中和抗体可变区重链和轻链的基因序列。这些序列即可用来体外重新构建和表达可中和新冠病毒的中和抗体，有望用于新冠病毒所引起的肺炎等疾病的治疗和预防。
附图说明
[0018]图1为利用COVID
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19康复患者血液中的单个B细胞筛选中和抗体流程示意图；
[0019]图2为采用SDS
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PAGE分析表达纯化后的抗体实验结果；
[0020]图3为阴性对照抗体Pmab(无中和效果)和中和抗体HC5K VH/B5K VL(IC
50
～0.1273μg/mL)假病毒中和实验结果；
[0021]图4为中和抗体D5K VH/B5K VL假病毒中和实验结果(IC
50
～0.00033μg/mL)；
[0022]图5为中和抗体HC5K VH/D4K VL(IC
50
～0.00084μg/mL)和中和抗体HF4L VH/D5K VL(IC
50
～0.0046μg/mL)假病毒中和实验结果；
[0023]图6为中和抗体HC5K VH/D5K VL(IC
50
～0.0066μg/mL)和中和抗体HD5K VH/A5K VL(IC
50
～0.0017μg/mL)假病毒中和实验结果；
[0024]图7为中和抗体HF4L VH/A5K VL(IC
50
～0.6049μg/mL)和中和抗体HF4L VH/B5K VL(IC
50
～0.6077μg/mL)假病毒中和实验结果；
[0025]图8为中和抗体HD5K VH/D4K VL(IC
50
～0.1996μg/mL)假病毒中和实验结果。
具体实施方式
[0026]下面结合附图和具体实施例对本专利技术作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好地理解本专利技术并能予以实施，但所举实施例不作为对本专利技术的限定。
[0027]实施例1：可和SARS
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COV
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2结合的单个B细胞的分离提取
[0028]抽取多个新冠病毒感染康复患者血液约15mL，采用Ficoll梯度法分离提取每个康复患者血液中的外周血单个核细胞(PBMC)，并将所得PBMC洗涤两遍后备用。
[0029]在每个PBMC样品中先加入Fc block，作用15分钟后依次加入APC
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H7标记的抗人CD3抗体，BV421标记的抗人CD19抗体，BB700标记的抗人CD27抗体，Biotin标记的SARS
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COV
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2刺突蛋白，Biotin标记的SARS
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COV
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2Spike RBD。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗严重急性呼吸系统综合征II型冠状病毒SARS
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COV
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2的中和抗体，其特征在于，包括：轻链可变区DNA序列，以及重链可变区DNA序列；所述轻链可变区DNA序列的核苷酸序列为SEQ ID NO.4；所述重链可变区DNA序列的核苷酸序列为SEQ ID NO.7。2.根据权利要求1所述的中和抗体，其特征在于，所述的中和抗体为包含恒定区和可变区的完整抗体、只包含可变区...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘密，王义鹏，刁璐，马琳，镇学初，龙亚秋，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：