一株产超低分子量聚谷氨酸的解淀粉芽孢杆工程菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种超低分子量聚谷氨酸的生物合成方法。以消除内源质粒P2sip，敲除聚谷氨酸水解酶pgdSA后得到解淀粉芽孢杆菌NS，进一步耦合共表达谷氨酸消旋酶基因yrpC、γ

【技术实现步骤摘要】
一株产超低分子量聚谷氨酸的解淀粉芽孢杆工程菌及其应用


[0001]本专利技术属于基因工程及发酵工程领域，具体涉及一株产超低分子量聚谷氨酸的解淀粉芽孢杆工程菌及其应用。

技术介绍

[0002]随着对γ
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PGA研究的不断深入，越来越多的研究表明γ
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PGA的生物学功能与其分子量大小有着密切的关系。尤其是当分子量低于10kDa时，γ
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PGA展现出独特的生物学活性功能。研究表明，分子量在1
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10kDa之间的γ
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PGA更易于渗透到皮肤肌底，起到透皮保湿的功效。分子量低于10kDa的γ
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PGA易于与药物结合，并提高靶向特性，促使药效发挥更完全，并且在基因治疗方面也体现出一定的优势。这表明，γ
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PGA(1
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10kDa)在化妆品以及医药领域展现出了重要的应用前景。
[0003]目前γ
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PGA降解的方式主要为物理降解、化学降解及酶降解。前期的研究发现，通过物理降解和化学降解的方式本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株产超低分子量聚谷氨酸的解淀粉芽孢杆工程菌的构建方法，其特征在于，以解淀粉芽孢杆菌NX
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2S CCTCC NO:M 2016346为出发菌株，消除内源质粒p2Sip，并进一步敲除聚谷氨酸降解酶基因pgdSA得到重组解淀粉芽孢杆菌NS，重组解淀粉芽孢杆菌NS通过耦合共表达pgsA
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yrpC
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pgdS得到解淀粉芽孢杆工程菌NS
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LM。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述的yrpC
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pgsA
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pgdS中，谷氨酸消旋酶基因yrpC来源于解淀粉芽孢杆菌NS，γ
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PGA合成酶基因pgsA来源于炭疽芽孢杆菌BA，γ
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PGA降解酶基因pgdS来源于枯草芽孢杆菌NX
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2。3.权利要求1所述的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)以解淀粉芽孢杆菌NX
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2S为出发菌株，消除内源质粒P2Sip，敲除聚谷氨酸降解酶基因pgdSA构建重组解淀粉芽孢杆菌NS；(2)以解淀粉芽孢杆菌NS基因组为模板，利用PCR扩增片段yrpC；(3)以炭疽芽孢杆菌BA基因组为模板，利用PCR扩增片段pgsA；(4)以枯草芽孢杆菌NX
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2基因组为模板，利用PCR扩增片段pgdS；(5)质粒pHY
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yrpC
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pgdS的构建：a:以穿梭质粒pHY300PLK为骨架，经BamH I和HindⅢ双酶切线性化后得到载体骨架A；以质粒PMA5及解淀粉芽孢杆菌NS基因组为模板，通过PCR扩增出启动子PHpaⅡ及终止子Tamy片段；将启动子PHpaⅡ、步骤(4)得到的pgdS片段及终止子Tamy片段利用重叠PCR的方式进行连接，得到片段pHpa
Ⅱ‑
pgdS；通过一步克隆法将得到的片段PHpa
Ⅱ‑
pgdS和载体骨架A进行连接得到质粒pHY
‑
PHpa
Ⅱ‑
pgdS；b:以质粒pHY
‑
PHpa
Ⅱ‑
pgdS为骨架，经EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切线性化后得到载体骨架B；以质粒PMA5及解淀粉芽孢杆菌NS基因组为模板...

【专利技术属性】
技术研发人员：王延斌，冯小海，许宗奇，金如昌，孟恒君，
申请(专利权)人：南京轩凯生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：