一种布鲁氏菌特异性抗原及其应用制造技术

本发明专利技术涉及布鲁氏菌检测技术领域。本发明专利技术提供了一种布鲁氏菌特异性抗原及其应用，所述所述布鲁氏菌特异性抗原的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明专利技术的布鲁氏菌特异性抗原特异性强，使用效果好。利用本发明专利技术的抗原制备的试纸条在阳性血清浓度稀释至1:40仍可检测到明显的阳性反应；用本发明专利技术的试纸条检测小肠耶尔森菌阳性血清和大肠杆菌阳性血清结果均为阴性，说明该试纸条有良好的特异性。说明该试纸条有良好的特异性。说明该试纸条有良好的特异性。

【技术实现步骤摘要】
一种布鲁氏菌特异性抗原及其应用


[0001]本专利技术涉及布鲁氏菌检测
，尤其涉及一种布鲁氏菌特异性抗原及其应用。

技术介绍

[0002]布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的一种以患畜流产、公畜睾丸炎、关节炎等为主要临床特征的慢性人畜共患传染病，给畜牧业发展和人类的健康带来严重的危害。该病在全国乃至全世界范围内广泛流行，全世界200多个国家中有170多个国家流行。
[0003]布鲁氏菌的致病机制是其能够在宿主单核巨噬细胞中生存，即使在低氧、营养不足、酸性环境、存在氧化物等的条件下仍能生存。并且布鲁氏菌是胞内寄生菌，一旦感染难以通过抗生素治疗。即使感染动物自愈，仍有持续排菌的危险。
[0004]为了寻找敏感、特异、快速的诊断方法，国内外学者在布鲁氏菌病的诊断方面进行了大量的研究。目前，常见的布鲁氏菌病诊断方法有病原学方法、分子生物学方法、免疫学方法等，但存在操作繁杂，耗时较长、花费较高等缺点，为适应基层大规模普查的需要，有必要研制出针对多种动物的快速检测方法，以便能够简单、方便的对布鲁氏菌进行检测。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种布鲁氏菌特异性抗原及其应用，能够简单、方便的对布鲁氏菌进行检测。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]本专利技术提供了一种布鲁氏菌特异性抗原，所述布鲁氏菌特异性抗原的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0008]本专利技术还提供了所述布鲁氏菌特异性抗原在制备检测布鲁氏菌产品中的应用。
[0009]本专利技术还提供了一种胶体金免疫层析试纸条，所述试纸条中包括样品垫、胶体金结合垫、层析垫和吸水材料，所述层析垫中含有检测线T和质控线C，所述检测线T中含有布鲁氏菌特异性抗原，所述质控线C中含有链球菌蛋白G抗体。
[0010]作为优选，所述样品垫、胶体金结合垫、检测线T、质控线C、和吸水材料按照样品的流动方向依次排列。
[0011]作为优选，所述胶体金结合垫的制备方法为：
[0012](1)按照体积比将1份0.8～1.2％的氯金酸和90～110份的水混合后煮沸，加入1～2份的柠檬酸三钠，继续煮沸10～20min后得到胶体金溶液；
[0013](2)将胶体金溶液和链球菌蛋白G混合，20～40min后在11000～13000r/min条件下离心20～40min，将沉淀用重悬液重悬，添加到金标垫上，得到胶体金结合垫。
[0014]作为优选，所述层析垫为硝酸纤维素膜。
[0015]本专利技术还提供了所述布鲁氏菌胶体金免疫层析试纸条的制备方法，包括如下步骤：
[0016](1)将硝酸纤维素膜贴于底板上，用布鲁氏菌特异性抗原划线作为检测线T，用0.8～1.2mg/mL的链球菌蛋白G抗体划线作为质控线C；
[0017](2)依次贴上胶体金结合垫、样品垫和吸水纸，得到布鲁氏菌胶体金免疫层析试纸条。
[0018]作为优选，步骤(1)中划线时所述布鲁氏菌特异性抗原和链球菌蛋白G抗体的用量独立的为0.8～1.2μL/cm。
[0019]本专利技术提供了一种布鲁氏菌特异性抗原及其应用，所述所述布鲁氏菌特异性抗原的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本专利技术的布鲁氏菌特异性抗原特异性强，使用效果好。利用本专利技术的抗原制备的试纸条在阳性血清浓度稀释至1:40仍可检测到明显的阳性反应；用本专利技术的试纸条检测小肠耶尔森菌阳性血清和大肠杆菌阳性血清结果均为阴性，说明该试纸条有良好的特异性。
附图说明
[0020]图1为胶体金免疫层析试纸条组装示意图；
[0021]图2为胶体金免疫层析试反应原性性试验检测结果；
[0022]图3为胶体金免疫层析试纸条敏感性试验检测结果；
[0023]图4为胶体金免疫层析试纸条特异性试验检测。
具体实施方式
[0024]本专利技术提供了一种布鲁氏菌特异性抗原，所述布鲁氏菌特异性抗原的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0025]在本专利技术中，所述布鲁氏菌特异性抗原的氨基酸序列优选如SEQ IDNO.2所示。
[0026]本专利技术还提供了所述布鲁氏菌特异性抗原在制备检测布鲁氏菌产品中的应用。
[0027]本专利技术还提供了一种胶体金免疫层析试纸条，所述试纸条中包括样品垫、胶体金结合垫、层析垫和吸水材料，所述层析垫中含有检测线T和质控线C，所述检测线T中含有布鲁氏菌特异性抗原，所述质控线C中含有链球菌蛋白G抗体。
[0028]在本专利技术中，所述样品垫、胶体金结合垫、检测线T、质控线C、和吸水材料按照样品的流动方向依次排列。
[0029]在本专利技术中，所述胶体金结合垫的制备方法为：
[0030](1)按照体积比将1份0.8～1.2％的氯金酸和90～110份的水混合后煮沸，加入1～2份的柠檬酸三钠，继续煮沸10～20min后得到胶体金溶液；
[0031](2)将胶体金溶液和链球菌蛋白G混合，20～40min后在11000～13000r/min条件下离心20～40min，将沉淀用重悬液重悬，添加到金标垫上，得到胶体金结合垫。
[0032]在本专利技术中，所述胶体金结合垫中的胶体金探针含量为80～120μL/cm2，进一步优选为100μL/cm2。
[0033]在本专利技术中，所述胶体金探针为链球菌蛋白G。
[0034]在本专利技术中，所述氯金酸的浓度优选为1％。
[0035]在本专利技术中，步骤(1)中所述水的量优选为100份。
[0036]在本专利技术中，步骤(1)中所述柠檬酸三钠的量优选为1.5份。
[0037]在本专利技术中，所述继续煮沸的时间优选为15min。
[0038]在本专利技术中，步骤(2)中所述混合前优选将胶体金溶液冷却至室温。
[0039]在本专利技术中，步骤(2)中所述胶体金溶液的pH值优选为7.3～7.7，进一步优选为7.5。
[0040]在本专利技术中，步骤(2)中所述pH值优选用0.2％的K2CO3调节。
[0041]在本专利技术中，步骤(2)中所述混合后优选每过4～6min颠倒混匀一次，进一步优选为5min。
[0042]在本专利技术中，步骤(2)中所述离心时间优选为混合后30min。
[0043]在本专利技术中，步骤(2)中所述离心的方法优选为12000r/min条件下离心30min。
[0044]在本专利技术中，步骤(2)中所述重悬液的配方优选为4～6％蔗糖、0.4～0.6％吐、1.5～2.5％BSA、0.08～0.12MTris，进一步优选为5％蔗糖、0.5％吐温、2％BSA、0.1MTris。
[0045]在本专利技术中，所述层析垫为硝酸纤维素膜。
[0046]本专利技术还提供了所述布鲁氏菌胶体金免疫层析试纸条的制备方法，包括如下步骤：
[0047](1)将硝酸纤维素膜贴于底板上，用布鲁氏菌特异性抗原划线作为检测线T，用0.8～1.2mg/mL的链球菌蛋白G抗体划线本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种布鲁氏菌特异性抗原，其特征在于，所述布鲁氏菌特异性抗原的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.权利要求1所述布鲁氏菌特异性抗原在制备检测布鲁氏菌产品中的应用。3.一种含有权利要求1所述布鲁氏菌特异性抗原的胶体金免疫层析试纸条，其特征在于，所述试纸条中包括样品垫、胶体金结合垫、层析垫和吸水材料，所述层析垫中含有检测线T和质控线C，所述检测线T中含有布鲁氏菌特异性抗原，所述质控线C中含有链球菌蛋白G抗体。4.根据权利要求3所述的试纸条，其特征在于，所述样品垫、胶体金结合垫、检测线T、质控线C、和吸水材料按照样品的流动方向依次排列。5.根据权利要求4所述的试纸条，其特征在于，所述胶体金结合垫的制备方法为：(1)按照体积比将1份0.8～1.2％的氯金酸和90～110份的水混合后煮沸，加入1～2份的柠檬酸三钠，继续煮沸10～2...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹小安，尚佑军，吴锦艳，何继军，陈新军，胡莉萍，刘萍，兰喜，刘永杰，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：