一种龙眼促炎蛋白、提取方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种龙眼促炎蛋白、提取方法及应用，所述促炎蛋白为酚提法提取的龙眼蛋白提取物。本发明专利技术所述龙眼促炎蛋白能够促进口腔炎症致病菌的生长，在培养口腔菌群时，能够针对性促进致病菌的生长，而并不会促进其他非致病菌的生长，为模拟口腔中致病菌大量繁殖的环境提供实验基础；同时，本发明专利技术所述龙眼促炎蛋白还能够促进肠道中致病菌生长，通过较低的浓度促进细胞的炎症因子表达，为后续医药研发提供基础。供基础。供基础。

【技术实现步骤摘要】
一种龙眼促炎蛋白、提取方法及应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种龙眼促炎蛋白、提取方法及应用。

技术介绍

[0002]龙眼(Dimocarpus longan Lour.)，也称桂圆，含有人体所需的糖分、维生素、矿物质等多种营养成分，具有较高的营养价值，但桂圆性温、味甘，多食易生内热而引起“上火”，常被称为“热性水果”。现代医学认为，“上火”是一种炎症反应。柑橘和荔枝也是常见的“热性水果”，有研究发现其引起“上火”的主要成分是水溶性蛋白，尤其是14
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3的三个家族蛋白通过人体花生四烯酸(arachidonic acid,AA)代谢途径诱导机体产生免疫炎症反应。
[0003]牙龈发炎是“上火”的典型症状，主要是由口腔微生物引起的牙周疾病导致的。细菌是口腔微生物的主要类型，常在唾液薄膜上生长繁殖形成牙菌斑。牙菌斑里的细菌代谢产生有害物质刺激牙龈组织产生炎症。变形链球菌(Streptococcus mutans)是口腔菌群的主要种类，常形成牙菌斑导致龋病，其作用机制主要是通过三种葡糖基转移酶(GtfsB、GtfsC和GtfsD)将蔗糖合成胞外多糖(exopolysaccharide，EPS)，使细菌牢固地附着在牙齿表面并形成生物膜，为细菌的生长提供保障。表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)常为口腔条件致病菌。口腔细菌在口腔中易形成生物膜，大多数生物膜对各种抗生素具有较高的耐受性，从而导致口腔中各种病症的发生。但是，目前没有对龙眼中引起牙龈发炎的蛋白进行相关研究，同时，在对菌群进行培养时，基本上是单独分开培养，难以对炎症致病菌进行针对性批量培养，从而模拟炎症致病菌增殖的环境。

技术实现思路

[0004]针对现有技术存在的上述不足，本专利技术的目的在于，提供一种龙眼促炎蛋白，以解决现有技术中没有对龙眼中引起牙龈发炎的蛋白相关研究、以及难以对菌群中的牙龈发炎致病菌进行针对性培养的问题。
[0005]本专利技术的进一步目的在于，提供一种上述龙眼促炎蛋白的提取方法，用以解决对于难以大量准确获取龙眼促炎蛋白的问题。
[0006]本专利技术的更进一步目的在于，提供一种上述龙眼促炎蛋白的应用，用以解决现有技术中难以对炎症致病菌进行针对性批量培养的问题，为后续药物研发提供基础。
[0007]为了解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案：
[0008]一种龙眼促炎蛋白，所述促炎蛋白为酚提法提取的龙眼蛋白提取物，经鸟枪法质谱分析龙眼蛋白提取物，检测得到的肽段覆盖率在30％以上的蛋白质包括：胞质铜/锌超氧化物歧化酶、NADP特异性异柠檬酸脱氢酶、细胞色素c氧化酶亚基Vb、谷胱甘肽转移酶、谷胱甘肽过氧化物酶、核糖体蛋白L22、NADP依赖性异柠檬酸脱氢酶、细胞周期蛋白依赖性激酶、FRIGIDA样蛋白质3a
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2、RNA聚合酶β、生长素响应因子、GTP结合核蛋白、NBS
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LRR抗病蛋白NBS37、抗坏血酸过氧化物酶、转录因子E2FB、磷脂酶Dδ、隐花色素1、WRKY转录因子2
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3、WRKY转录因子72
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4、WRKY转录因子28
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2、细胞周期蛋白T1
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4、核糖体蛋白S4、母体效应胚胎停滞
蛋白、谷胱甘肽S
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转移酶、脱氢抗坏血酸还原酶；所述龙眼蛋白中促炎蛋白的分子量在30KD以上。
[0009]本专利技术还提供一种龙眼促炎蛋白的提取方法，具体包括如下步骤：
[0010]步骤1：龙眼果肉榨汁后过滤，离心处理并收集上清液，冷冻干燥后缩小体积，在4℃下透析处理，然后再次冷冻干燥；
[0011]步骤2：将步骤1干燥后的粉末加入预冷的酚提取缓冲液，再加入预冷的Tris饱和酚溶液，剧烈摇晃使其混合均匀，在冰盒中振荡2h，在4℃下离心处理，获得上层液体；
[0012]步骤3：所述上层液体重复进行步骤2，取上层酚相，加入预冷的含有乙酸铵的甲醇溶液，在
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20℃条件下静置沉淀蛋白，在4℃下离心处理，取沉淀物；
[0013]步骤4：向沉淀物中加入丙酮，混合均匀，置于
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20℃条件下静置1h，然后在4℃下离心处理；
[0014]步骤5：重复进行步骤4两次后，空气干燥得到所述龙眼蛋白。
[0015]一种龙眼促炎蛋白的应用，上述提取方法提取得到的龙眼蛋白用于促进口腔菌群中致病菌的生长，尤其是促进变异链球菌和表皮葡萄球菌的生长。
[0016]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
[0017]1、本专利技术所述龙眼促炎蛋白能够促进口腔炎症致病菌的生长，在培养口腔菌群时，能够针对性促进致病菌的生长，而并不会促进其他非致病菌的生长，为模拟口腔中致病菌大量繁殖的环境提供实验基础；同时，本专利技术所述龙眼促炎蛋白还能够促进肠道中致病菌生长，通过较低的浓度促进细胞的炎症因子表达，为后续相关药物研发提供实验基础。
[0018]2、本专利技术所述方法能够高效的从龙眼中提取促炎蛋白，对蛋白活性的影响较小，产物纯度高，促炎活性好，为后续进行龙眼“上火”研究提供了实验基础。
附图说明
[0019]图1为本专利技术所述龙眼蛋白SDS
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PAGE电泳图。
[0020]图2为本专利技术所述龙眼蛋白对口腔细菌生长的影响图；其中，图2A为变异链球菌，图2B为表皮葡萄球菌，图2C为腐生葡萄球菌，且P<0.05。
[0021]图3为不同浓度龙眼蛋白对细菌生长的影响图；其中，图3A为变异链球菌，图3B为表皮葡萄球菌，图3C为腐生葡萄球菌，且P<0.05。
[0022]图4为龙眼蛋白对细菌生物膜形成的影响图；其中，A为生物膜形态，B为生物膜量，且P<0.05。
[0023]图5为龙眼蛋白对细菌生物膜产EPS的影响图；其中，图5A为变异链球菌，图5B为表皮葡萄球菌，图5C为腐生葡萄球菌，且P<0.05。
[0024]图6为不同方法提取龙眼蛋白组分的SDS
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PAGE电泳分析。
[0025]图7为不同浓度龙眼蛋白对小鼠肠道致病菌和益生菌的影响。
[0026]图8为不同浓度龙眼蛋白对细胞炎症因子的影响。
[0027]图9为不同浓度龙眼蛋白对血液中炎症因子的影响。
[0028]图10为不同浓度龙眼蛋白对肺部炎症的影响。
具体实施方式
[0029]下面将结合附图和实施例对本专利技术作进一步说明。
[0030]一、一种龙眼促炎蛋白
[0031]本专利技术所述促炎蛋白为酚提法提取的龙眼蛋白提取物，基于鸟枪法蛋白质组学分析方法，使用反相液相色谱－串联质谱系统分析龙眼蛋白质的胰蛋白酶酶解产物，结合数据库检索，共鉴定到肽段覆盖率在30％以上的蛋白质25种，包括：胞质铜/锌超氧化物歧化酶、NADP特异性异柠檬酸脱氢酶、细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种龙眼促炎蛋白，其特征在于，所述促炎蛋白为酚提法提取的龙眼蛋白提取物，经鸟枪法质谱分析龙眼蛋白提取物，检测得到的肽段覆盖率在30%以上的蛋白质包括：胞质铜/锌超氧化物歧化酶、NADP特异性异柠檬酸脱氢酶、细胞色素c氧化酶亚基Vb、谷胱甘肽转移酶、谷胱甘肽过氧化物酶、核糖体蛋白L22、NADP依赖性异柠檬酸脱氢酶、细胞周期蛋白依赖性激酶、FRIGIDA样蛋白质3a
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2、RNA聚合酶β、生长素响应因子、GTP结合核蛋白、NBS
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LRR抗病蛋白NBS37、抗坏血酸过氧化物酶、转录因子E2FB、磷脂酶D δ、隐花色素1、WRKY转录因子2
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3、WRKY转录因子72
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4、WRKY转录因子28
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2、细胞周期蛋白T1
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4、核糖体蛋白S4、母体效应胚胎停滞蛋白、谷胱甘肽S
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转移酶、脱氢抗坏血酸还原酶；所述龙眼蛋白中促炎蛋白的分子量在30KD以上。2.一种龙眼促炎蛋白的提取方法，其特征在于，具体包括如下步骤：步骤1：龙眼果肉榨汁后过滤，离心处理并收集上清液，冷冻干燥后缩小体积，在4℃下透析处理，然后再次冷冻干燥；步骤2：将步骤1干燥后的粉末加入预冷的酚提取缓冲液，再加入预冷的Tris饱和酚溶液，剧烈摇晃使其混合均匀，在冰盒中振荡2h，在4...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁姗，
申请(专利权)人：长江师范学院，
类型：发明
国别省市：