用于治疗与PCSK9相关疾病的靶向寡核苷酸制造技术

本公开涉及用于治疗与PCSK9相关疾病的靶向寡核苷酸，所述靶向寡核苷酸包含反义链，所述反义链具有如SEQ ID NO:53

【技术实现步骤摘要】
用于治疗与PCSK9相关疾病的靶向寡核苷酸


[0001]本公开涉及一种寡核苷酸，特别是一种用于治疗与PCSK9相关疾病的靶向寡核苷酸。

技术介绍

[0002]血脂是指血中所含脂质的总称，与临床密切相关的血脂主要包括甘油三酯和胆固醇。血脂异常通常指血清中胆固醇和(或)甘油三酯(TG)水平升高，俗称高脂血症。
[0003]高胆固醇血症是指血液中总胆固醇(TCHO)和/或低密度脂蛋白胆固醇(LDL
‑
C)或非高密度脂蛋白胆固醇(non
‑
HDL
‑
C)升高，也被称为血脂异常，可分为家族性胆固醇血症和非家族性胆固醇血症，其最重要的临床特征之一是患者血液低密度脂蛋白胆固醇(LDL
‑
C)水平增高，高胆固醇血症是心血管疾病发生的一个重要因素(Guo,Yanan,et al.Archives of Biochemistry and Biophysics(2020):108717)。一些心脑血管疾病，例如脑血管疾病、冠心病和外周动脉疾病等，通常没有明显的易察觉症状，直至出现严重的动脉粥样硬化。当前，他汀类药物是临床上降血脂的一线药物，该类药物可以通过降低LDL
‑
C来减少心血管疾病风险，但很多患者对以他汀类药物不耐受，或服用最大剂量他汀类药物后，仍无法使LDL
‑
C水平降低至合适水平(Toutouzas et al.Expert Opin Pharmacother(2010)11:1659
‑
72)，因此，有必要研发新型药物来满足患者的需求，具有重要的临床应用价值。
[0004]人PCSK9基因长约22kb，包含12个外显子，可编码长692个氨基酸长度的糖蛋白(Benjannet,Suzanne,et al.Journal of Biological Chemistry 279.47(2004):48865
‑
48875)。肝脏是合成和分泌PCSK9的主要部位，人血浆中PCSK9的正常水平从30ng/mL到4μg/mL不等，在胆固醇代谢中发挥重要作用，其主要通过影响肝细胞表面LDL受体的表达水平来控制血浆LDL水平。PCSK9基因功能获得性突变(回复突变)会导致肝细胞表面LDL受体水平降低，血液中LDL
‑
C水平升高；相反，其基因功能缺失性突变造则导致肝细胞表面LDL受体水平升高，血液中LDL
‑
C水平降低。研究表明，在最大剂量他汀类药物无法有效控制LDL
‑
C水平的情况下，通过降低PCSK9水平，可有效降低LDL
‑
C水平。
[0005]细胞内的PCSK9可结合并引导新生成的LDL受体从反式高尔基体到溶酶体内进行降解；细胞外循环的PCSK9可与肝脏细胞表面LDL受体的结合，介导其进入肝细胞溶酶体内降解，从而使肝细胞表面LDL受体减少，导致肝脏结合和清除LDL
‑
C的能力降低，最终使血液中LDL
‑
C水平升高。因此，可通过降低PCSK9表达水平来治疗高胆固醇血症(Norata et al.Annu Rev Pharmacol Toxicol(2014)54:273
‑
93)以及预防与高LDL
‑
C相关的心血管疾病。
[0006]1998年，美国两位科学家Andrew Fire和Craig Mello发现的一种生物学机制，小RNA分子可以介导特定的mRNA的降解(Fire,Andrew,et al.Nature 391.6669(1998):806
‑
811)，当RNA分子以双链形式出现在细胞中时，这种机制就会被诱发激活，即出现RNA干扰现象，这一发现预示着一个新研究领域的开始，这两位科学家也因此获得了2006年的诺贝尔生理学和医学奖。当双链RNA与蛋白质复合物Dicer结合后，Dicer将dsRNA切割成片段，而后
另一种蛋白质复合物RISC结合这些片段，siRNA双链中的一条链被去除，但另一条链仍与RISC复合物结合，RISC通过单链RNA的引导识别并降解靶基因的mRNA，使特定蛋白的表达受到抑制，进而特异性导致基因沉默。
[0007]RNA干扰为基因技术的应用开辟了一个新领域。双链RNA分子已被人工设计用于沉默人类、动物或植物中的特定基因。这种人工设计合成的用于基因沉默的双链RNA分子(siRNA)被导入细胞并激活RNA干扰机制以降解对应的mRNA，目前，这种方法是生物学和生物医学的重要研究工具。此外，目前人们已开发了众多的siRNA药物，用以治疗病毒感染、心血管疾病、癌症、内分泌失调和其他多种疾病，多数处于研发阶段或已获批上市的siRNA疗法，显示出很好的治疗效果。从2018年第一款siRNA药物上市至今，已有至少4款siRNA在欧盟或美国获批上市。因此，利用RNA干扰技术抑制特定靶基因表达已经成为一种有效的疾病治疗途径。
[0008]目前已有报道靶向PCSK9的抑制剂，包括已上市的抗体类和小核酸类药物，用于或拟用于治疗高胆固醇血症及相关疾病，但需要开发针对该靶点的其他抑制剂，以期有更好的疗效或更好的安全性。

技术实现思路

[0009]为了解决现有技术中存在的问题，本公开的目的在于提供疗效好、安全性高、药效持久的靶向PCSK9的抑制剂。
[0010]在一方面，本公开提供了用于降低PCSK9的表达的寡核苷酸或其药学上可接受的盐，所寡核苷酸包含反义链，所述反义链具有如SEQ ID NO:53
‑
106中任一所示的序列或其片段、或所述序列或其片段的修饰序列。
[0011]在本公开的一些实施方案中，所述寡核苷酸进一步包含具有如SEQ ID NO:1
‑
52中任一所示的序列或其片段、或所述序列或其片段的修饰序列。
[0012]在本公开的一些实施方案中，所述反义链由如SEQ ID NO:53
‑
106中任一所示的序列或其片段、或所述序列或其片段的修饰序列组成。
[0013]在本公开的一些实施方案中，所述反义链的修饰序列包含具有如SEQ ID NO:138
‑
183、185
‑
186中任一所示的序列或其片段。
[0014]在本公开的一些实施方案中，所述正义链的修饰序列包含具有如SEQ ID NO:107
‑
137、135、184中任一所示的序列或其片段。
[0015]在本公开的一些实施方案中，所述正义链和所述反义链分别为19/21配对、21/21配对、21/23配对或23/23配对的双链体结构。
[0016]在另一方面，本公开提供了一种组合物，所述组合物包含所述寡核苷酸或其药学上可接受的盐，以及任选地药学上可接受的载体。
[0017]在另一方面，本公开提供了所述的寡核苷酸或其药学上可接受的盐或组合物在制备用于治疗或/和预防脂质失调方本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于降低PCSK9的表达的寡核苷酸或其药学上可接受的盐，所述寡核苷酸包含反义链，所述反义链具有如SEQ ID NO:53
‑
106中任一所示的序列或其片段、或所述序列或其片段的修饰序列；优选地，所述寡核苷酸进一步包含正义链，所述正义链具有如SEQ ID NO:1
‑
52中任一所示的序列或其片段、或所述序列或其片段的修饰序列；优选地，所述反义链由如SEQ ID NO:53
‑
106中任一所示的序列或其片段、或所述序列或其片段的修饰序列组成；优选地，所述正义链由如SEQ ID NO:1
‑
52中任一所示的序列或其片段、或所述序列或其片段的修饰序列组成；优选地，所述反义链的修饰序列包含具有如SEQ ID NO:138
‑
183、185
‑
186中任一所示的序列或其片段；优选地，所述正义链的修饰序列包含具有如SEQ ID NO:107
‑
137、135、184中任一所示的序列或其片段；优选地，所述反义链由如SEQ ID NO:138
‑
183、185
‑
186中任一所示的序列或其片段、或所述序列或其片段的修饰序列组成；优选地，所述正义链由如SEQ ID NO:107
‑
137、135、184中任一所示的序列或其片段、或所述序列或其片段的修饰序列组成。2.权利要求1所述的寡核苷酸或其药学上可接受的盐，其中所述反义链长度为19至23个核苷酸。3.权利要求1或2所述的寡核苷酸或其药学上可接受的盐，其中所述正义链长度为19至23个核苷酸。4.权利要求1至3中任一项所述的寡核苷酸或其药学上可接受的盐，其中所述寡核苷酸包含长度为一个或多个核苷酸的3'
‑
突出端序列，其中所述3'
‑
突出端序列存在于反义链和/或正义链上；优选地，所述反义链带有一个突出端；优选地，所述正义链带有一个突出端；优选地，所述寡核苷酸包含长度为两个核苷酸的3'
‑
突出端序列；优选地，所述3'
‑
突出端序列存在于所述正义链上；优选地，所述突出端序列选自：GG、GA、GC、UC、UG、UU、UA、CA、CC、CG、CU、AA、AG、AU、AC；优选地，所述3'
‑
突出端序列存在于所述反义链上；优选地，所述突出端序列选自：UU、UC、UA、UG、GA、GG、GU、GC、TT、AG、AU、AA、AC、CA、CC、U；更优选地，所述突出端序列为UU。5.权利要求1至4中任一项所述的寡核苷酸或其药学上可接受的盐，优选地，所述寡核苷酸包含长度各自在19至23个核苷酸的范围内的反义链和正义链；优选地，所述正义链与所述反义链形成双链体区域；优选地，所述正义链和所述反义链分别为19/21配对、21/21配对、21/23配对或23/23配对的双链体结构；优选地，所述寡核苷酸包含长度为两个核苷酸的3'
‑
突出端序列，其中所述3'
‑
突出端序列存在于所述反义链上，且其中所述正义链长度为19个核苷酸且所述反义链长度为21个核苷酸，使得所述正义链和反义链形成长度为19个核苷酸的双链体；
所述寡核苷酸包含长度为两个核苷酸的3'
‑
突出端序列，其中所述3'
‑
突出端序列存在于所述反义链和正义链上，且其中所述正义链长度为21个核苷酸且所述反义链长度为21个核苷酸，使得所述正义链和反义链形成长度为19个核苷酸的双链体；优选地，所述寡核苷酸包含长度为两个核苷酸的3'
‑
突出端序列，其中所述3'
‑
突出端序列存在于所述反义链上，且其中所述正义链长度为21个核苷酸且所述反义链长度为23个核苷酸，使得所述正义链和反义链形成长度为21个核苷酸的双链体；优选地，所述寡核苷酸包含长度为两个核苷酸的3'
‑
突出端序列，其中所述3'
‑
突出端序列存在于所述反义链和正义链上，且其中所述正义链长度为23个核苷酸且所述反义链长度为23个核苷酸，使得所述正义链和反义链形成长度为21个核苷酸的双链体；优选地，所述寡核苷酸选自反义链SEQ ID NO:55
‑
57、61、66、70
‑
71、80、82、84、93
‑
106中任一所述的未修饰寡核苷酸，以及反义链SEQ ID NO:138
‑
183中任一所述的修饰寡核苷酸；优选地，所述寡核苷酸选自反义链SEQ ID NO:80、84、93
‑
95、99
‑
106中任一所述的未修饰寡核苷酸，以及反义链SEQ ID NO:145、147
‑
150、154
‑
183、185
‑
186中任一所述的修饰寡核苷酸；优选地，所述寡核苷酸选自正义链SEQ ID NO:3
‑
5、9、14、18、1...

【专利技术属性】
技术研发人员：田宝磊，高杰，赵君竺，
申请(专利权)人：北京安龙生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：