一种产琥珀酸放线杆菌CRISPRi系统构建方法技术方案

本发明专利技术公开了一种产琥珀酸放线杆菌CRISPRi系统构建方法，属于生物技术领域。本发明专利技术提供的CRISPRi系统以表达载体pLGZ92M为骨架载体，其主要作用元件包括cpf1表达元件和crRNA表达元件，其中pckA启动子启动表达dcpf1蛋白，frd启动子启动表达crRNA，由终止子rrnB t1终止子终止。本发明专利技术提供的CRISPRi系统只需更换针对靶基因的crRNA即可实现对靶基因产生抑制作用。本发明专利技术的方法针对产琥珀酸放线杆菌实现基因抑制，操作过程简单，转化效率高。转化效率高。转化效率高。

【技术实现步骤摘要】
一种产琥珀酸放线杆菌CRISPRi系统构建方法


[0001]本专利技术涉及一种产琥珀酸放线杆菌CRISPRi系统构建方法，属于生物


技术介绍

[0002]产琥珀酸放线杆菌是一株从牛的瘤胃中分离的高产琥珀酸的革兰氏阴性菌，它能天然的生产琥珀酸，且能利用广谱的碳源用于生产琥珀酸，是生产琥珀酸最有潜力的微生物之一。但由于缺乏对产琥珀酸放线杆菌遗传背景的认知，以及缺少相应的遗传操作工具，产琥珀酸放线杆菌的基因工程改造落后于E.coli。目前报道的产琥珀酸放线杆菌的遗传工具很少，Kim等在胸膜肺炎放线杆菌与大肠杆菌穿梭质粒pGZRS
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19基础上成功构建了载体pLGZ920，实现外源基因在琥珀酸放线杆菌中的表达(US 20050164360A1)。借助产琥珀酸放线杆菌含大量的USS序列、膜结合DNA吸收机制的自然转化能力、以及异柠檬酸脱氢酶缺陷型的特点，该研究小组进一步建立了产琥珀酸放线杆菌的无痕敲除方法(Applied and Environmental Microbiology.Joshi,2014,80(10):3053本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种CRISPRi系统，其特征在于，所述CRISPRi系统包含质粒pCpf1
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CRISPRi，所述质粒pCpf1
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CRISPRi包含编码dcpf1的基因和crRNA表达框；所述编码dCpf1的基因位于pckA启动子下游，所述crRNA表达框位于dCpf1基因的下游。2.根据权利要求1所述的CRISPRi系统，其特征在于，所述crRNA表达框包含frd启动子、crRNA序列和rrnB t1终止子。3.根据权利要求2所述的CRISPRi系统，其特征在于，所述crRNA表达框的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。4.根据权利要求1所述的CRISPRi系统，其特征在于，所述dCpf1如下(a)～(c)：(a)来源于Francisella tularensis subsp.Novicida；，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；(b)在(a)的基础上，将第9...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑璞，陈春梅，吴丹，陈鹏程，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：