细菌T6SS核心组分Hcp作为药物递送载体的构建方法技术

本发明专利技术公开了细菌T6SS核心组分Hcp作为药物递送载体的构建方法，属于生物技术领域。本发明专利技术通过实验证明，多肽或蛋白质类药物与Hcp的融合蛋白可以在细菌内表达和合成，并通过搭载上述T6SS核心组分被分泌到胞外。该药物分泌体系在向真核细胞和生物体内输送大分子药物方面具有重要的应用潜力。方面具有重要的应用潜力。方面具有重要的应用潜力。

【技术实现步骤摘要】
细菌T6SS核心组分Hcp作为药物递送载体的构建方法


[0001]本专利技术属于生物
，涉及一种细菌VI型分泌系统(T6SS)核心组分Hcp作为药物递送载体的构建方法；尤其涉及一种T6SS核心组分Hcp分泌多肽和蛋白质类药物的体系的构建方法。

技术介绍

[0002]近年来，制药行业趋向于复杂的大分子疗法，大分子药物包括基于蛋白质的疗法，如抗体、激素、生长因子和细胞因子，以及基于核酸的疗法，如短干涉RNA、DNA/RNA疫苗和基因疗法。大分子药物的分子大小和复杂性使其具有高度的特异性，因此与小分子药物相比，大分子药物具有更强的效力和更少的副作用。尽管如此，大分子药物仍然面临着小分子药物所没有的几个重大挑战，其中需要解决的关键问题之一就是药物的高效递送策略。
[0003]大分子药物往往极易在胃和肠道中降解，导致这些药物的剂型受到了限制，通常只能作为注射剂来使用，方便程度远低于口服；此外分子量太大和亲水性极大地限制了其对生物膜的渗透，从而导致生物利用度低。
[0004]细菌作为单细胞、结构简单的原核生物，种类和代谢类型多种多样，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种以VI型分泌系统T6SS核心组分Hcp作为多肽和蛋白质类药物载体的分泌体系的构建方法，其特征在于，在霍乱弧菌V52菌株中，将目的药物序列整合到细菌基因组中与Hcp蛋白序列相连，获得分泌多肽和蛋白质类药物的体系。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述霍乱弧菌V52菌株是以霍乱弧菌V52 RHH为原始菌株，失活突变了T6SS毒性蛋白TseL，VasX，TseH和VgrG1的突变菌株；或为在所述突变菌株基础上进一步敲除了Hcp2编码序列的突变型霍乱弧菌V52菌株。3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括如下步骤：S1、以霍乱弧菌V52 RHH菌株为模板，分别扩增突变hcp1的上游同源左臂和下游同源右臂；左右臂扩增连接，连接后的同源臂片段克隆到自杀型质粒pDS132中；得到pDS132
‑
VChcp1
‑
BsaI突变质粒；S2、将目的药物片段克隆到pDS132
‑
VChcp1
‑
BsaI突变质粒，得到pDS132
‑
VChcp1
‑
X质粒，其中X指代目的药物序列；S3、将pDS132
‑
VChcp1
‑
X质粒转化大肠杆菌，形成接合转移的供体菌；供体菌与所述霍乱弧菌V52菌株共培养，得到Hcp
‑
X融合蛋白突变株。4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述目的药物为DNA长度小于100bp药物。5.一种如权利要求1
‑
4中任一项所述的构建方法构建得到的Hcp携带药物的分泌体系。6.根据权利要求5所述的分泌体系，其特征在于，目的药物与Hcp的融合蛋白能够在菌体内表达和...

【专利技术属性】
技术研发人员：董涛，涂琬之，李浩，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：