Pup基因敲除的结核分枝杆菌H37Ra菌株的构建方法及应用技术

本发明专利技术公开了Pup基因敲除的结核分枝杆菌H37Ra菌株的制备方法及应用，属于基因工程领域。上述制备方法包括以下步骤：(1)扩增Pup基因上下游同源臂，并将上下游同源臂构建到Cosmid质粒上，构建重组质粒；(2)将所述重组质粒转导λ噬菌体，构建重组噬菌体；(3)将所述重组噬菌体转染H37Ra菌株，制备Pup基因敲除的结核分枝杆菌H37Ra菌株。进一步通过小鼠体内实验研究，结果发现：本发明专利技术制备的Pup基因敲除的结核分枝杆菌H37Ra菌株可以显著降低结核分枝杆菌的感染，并且在小鼠体内表现出长效性和稳定性，可以作为结核病疫苗的潜在菌株。这为结核病发病机制的研究和抗结核药物的研发提供了理论基础。了理论基础。了理论基础。

【技术实现步骤摘要】
Pup基因敲除的结核分枝杆菌H37Ra菌株的构建方法及应用


[0001]本专利技术涉及基因工程领域，特别是涉及一种Pup基因敲除的结核分枝杆菌H37Ra菌株的构建方法及应用。

技术介绍

[0002]结核病是由结核分枝杆菌(Mycobacterium Tuberculosis)引起的世界性传染病，也是一种单一致病菌感染导致死亡率最高的疾病，全世界约有1/3的人感染结核分枝杆菌，严重影响人类的健康。因此，结核病的预防、早期诊断以及及时治疗都是高度关注的课题，在世界范围内也是重点防控的疾病之一。
[0003]结核分枝杆菌是国际标准减毒株H37Ra菌株，是目前科研方面广泛使用的菌株，尤其是广泛应用于与结核病相关的生物医药研究中。目前临床上分离多种结核分枝杆菌，并且随着药物的使用，耐药性出现，使得世界范围内的结核病的防治形式愈加严峻。而防治结核病的关键就是对结核分枝杆菌的耐药机理和致病机理进行研究，而关于这方面的研究目前主要是通过失活或者缺失特定的基因，分析结核分枝杆菌突变株与结核病进程的关系，进而了解其基因和疾病间的关系。<br/>[0004]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种Pup基因敲除的结核分枝杆菌H37Ra菌株的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)扩增Pup基因上下游同源臂，并将上下游同源臂构建到Cosmid质粒上，构建重组质粒；(2)将所述重组质粒转导噬菌体，构建重组噬菌体；(3)将所述重组噬菌体转染结核分枝杆菌，制备Pup基因缺失重组菌株。2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述Pup基因上下游同源臂之间包含氨苄青霉素抗性基因序列。3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述结核分枝杆菌为H37Ra。4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，扩增Pup基因上游同源臂的引物为：Pup
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【专利技术属性】
技术研发人员：张万江，冯楠，柳小玲，吴芳，吴江东，张杰，董江涛，王菊，张辉，徐芳，赵正涌，梁粟，朱荟云，
申请(专利权)人：石河子大学，
类型：发明
国别省市：