一种巨噬细胞靶向的穿膜肽及其制备和应用制造技术

本发明专利技术公开一种巨噬细胞靶向的穿膜肽及其制备和应用。所述的功能性多肽由穿膜序列和HBXIPC端亮氨酸拉链序列编码。本发明专利技术所述的多肽可以特异性靶向巨噬细胞，具有免疫调节和抗衰老功能，可以降低LPS诱导的肺炎和DSS诱导的肠炎模型中的炎症因子水平，下调肺纤维化相关基因的表达，下调老龄小鼠肺组织中衰老相关基因p16和p21的表达。本发明专利技术提出的CPP

【技术实现步骤摘要】
一种巨噬细胞靶向的穿膜肽及其制备和应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种巨噬细胞靶向的穿膜肽及其制备和应用。

技术介绍

[0002]个体衰老伴随着机体各种生物学功能的逐渐衰退，其中一个重要特征是衰老细胞在体内的累积。衰老细胞随寿命而累积，并且与许多疾病相关。衰老细胞存在于许多肿瘤前病变、纤维包括神经性病理(如脑动脉瘤、阿尔茨海默症和帕金森氏症)、肺部病理(如特发性肺纤维化、慢性阻塞性肺部疾病和囊性纤维化)、眼部病理(如白内障、青光眼、黄斑变性)、肌肉骨骼病理(如肌症、椎间盘退行性病变、骨关节炎)、心血管病理(如动脉粥样硬化、心脏纤维化、主动脉瘤)、肾脏病理(如肾脏疾病、移植并发症)以及诸如糖尿病、粘膜炎、高血压和骨髓纤维化(OMF)的其他病理。
[0003]衰老细胞增殖处于停滞期，复制受限，同时发生多种表型变化，包括染色质重组、β
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半乳糖苷酶活性增加、形态学和代谢变化，并分泌多种炎症因子和细胞因子，统称为衰老相关分泌表型(SASP)。免疫和衰老密切相关，衰老过程中产生的炎症因子是造成组织器官功能紊乱并加速衰老进程的重要诱因。衰老的免疫系统耐受性失调，免疫监视不足，全身体液免疫老化，可导致老年性疾病及恶性肿瘤等多种疾病。最近研究表明，免疫系统的衰老会加速全身器官的衰老及组织损伤的进程，逆转免疫细胞促炎的衰老状态可能为一些衰老相关疾病的防治产生良好疗效。而衰老状态下的巨噬细胞是引起炎性衰老的重要因素。持续低水平分泌炎性因子被认为会促进许多年龄相关性症状，如认知衰退、神经变性、动脉粥样硬化。减轻巨噬细胞炎症反应、增强巨噬细胞细胞代谢可逆转小鼠认知功能衰退等衰老相关疾病。最近研究表明，衰老细胞和巨噬细胞在众多生物学特性，包括活化、代谢、增殖、凋亡等方面有相似之处。基于其中关键通路，开发靶向巨噬细胞的药物有望同时调节免疫、炎症和衰老，具有巨大潜力。
[0004]细胞的寿命很大程度上取决于溶酶体功能，越来越多证据显示溶酶体是控制细胞衰老的关键枢纽。溶酶体不仅是处理细胞废物的场所，也是细胞稳态的重要调节剂。它们参与调节细胞内营养物质的有效组成，如应激反应、程序性细胞死亡、质膜修复、发育和细胞分化等过程。溶酶体功能障碍在衰老和巨噬细胞中引起凋亡细胞清除受损、蛋白体聚集、抗原抗体复合物形成等，激发炎症和细胞衰老等。因此，靶向溶酶体、以溶酶体修复为目标的药物研发和干预手段是调节免疫和抗衰老研究的重要领域和创新前沿。目前已发现的干预措施如热量限制、间歇性禁食和一些干预药物如亚精胺、二甲双胍、白藜芦醇等都与溶酶体功能的调节和修复密切相关。本专利技术是基于前期研究发现HBXIP具有结合溶酶体v
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ATPase亚基，调节溶酶体pH，促进自噬而设计的靶向小肽。
[0005]多肽类药物通常是指不超过50个氨基酸的肽链，在临床应用上具有适应证广、安全性高、疗效显著等特点；生产制备方面可控性高、纯度高、易修饰、结构稳定，已广泛应用于肿瘤、心脑血管疾病、肝炎、糖尿病、艾滋病等疾病的预防、诊断和治疗。细胞穿膜肽
(CPPs)是一类由通常不多于30个氨基酸残基组成、带有正电荷的多肽片段，富含精氨酸、赖氨酸等碱性氨基酸残基，可携带活性物质(如小分子药物、多肽、蛋白质、siRNAs、纳米粒子)进入细胞发挥生物学活性，在靶向制剂、经皮给药制剂和化妆品领域等方面具有重大的价值。随着多肽合成技术的发展和成熟，多肽药物已成为药物研发的热点之一。目前有超过约80种多肽药物在全球上市，覆盖200多亿美元的市场，另有150余个在开展临床试验。但目前有关免疫调节和抗衰老的多肽类药物研发仍处于初创阶段，整体规模尚小，具有较大的发展空间和应用价值。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于针对现有技术的不足，提供一种巨噬细胞靶向的穿膜肽及其制备和在制备免疫调节药物或抗衰老药物中的应用。
[0007]第一方面，本专利技术提供一种巨噬细胞靶向的具有穿越细胞膜功能的多肽CPP
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AA，由穿膜序列和HBXIPC端亮氨酸拉链序列编码，其氨基酸序列为KIKKVKKKGRKHAGVISVLAQQAAKLTSDPTDIP，如SEQNO.1所示。
[0008]所述的穿膜区序列为KIKKVKKKGRK；
[0009]所述的HBXIP基因中拉链序列为核苷酸(55
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116)，优选为核苷酸(102
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116)序列或其简并序列所翻译。
[0010]第二方面，本专利技术提供一种分离的多核苷酸，其编码上述多肽CPP
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AA。
[0011]第三方面，本专利技术提供一种表达载体，其含有所述多肽CPP
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AA的编码多核苷酸。
[0012]第四方面，本专利技术提供一种重组细胞，其含有所述多核苷酸的表达载体或其基因组中包所述多核苷酸。
[0013]第五方面，本专利技术提供上述多肽CPP
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AA，或多核苷酸，或表达载体，或重组细胞在制备免疫调节或抗与衰老相关的疾病或病症的药物中的应用。
[0014]作为优选，所述免疫调节药物是预防、缓解或治疗急性肺炎的药物。
[0015]所述的免疫调节药物是降低急性肺损伤肺部炎症反应，减少肺部炎性浸润以及修复肺组织损伤的药物。
[0016]所述的免疫调节药物是治疗溃疡性肠炎的药物。
[0017]所述的免疫调节药物是减少溃疡性肠炎中肠组织炎症反应、修复肠组织损伤、减小溃疡性结肠炎导致的体重下降的药物。
[0018]作为优选，所述与衰老相关的疾病或病症为代谢性疾病、炎症性疾病、肺部疾病、神经性疾病、增生性疾病、肾脏疾病、眼部疾病或皮肤病学的疾病中的一种或多种。
[0019]作为优选，所述的抗衰老药物是治疗衰老相关特发性肺纤维化及抗衰老的药物。
[0020]作为优选，所述抗衰老药物是降低肺纤维化模型肺组织中纤维化相关基因、减少胶原纤维、改善肺组织结构完整的药物。
[0021]作为优选，所述的抗衰老药物是降低衰老肺组织中衰老基因p16、p21表达水平的药物。
[0022]作为优选，所述的抗衰老药物是降低衰老肺组织中细胞衰老标志β
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半乳糖苷酶的药物。
[0023]第六方面，本专利技术提供一种制备多肽CPP
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AA的方法，所述方法包括：培养所述的重
组细胞，从而重组表达多肽CPP
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AA；或，通过体外人工合成的方法制备多肽CPP
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AA。
[0024]第七方面，本专利技术提供一种药物组合物，所述的药物组合物包括：多肽CPP
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AA或编码其的多核苷酸，或所述的表达载体或所述的重组细胞；以及药学上或生理学上可接受的载体
[0025]第八方面，本专利技术提供一种试剂盒，所述试剂盒包括：多肽CPP
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AA或编码其的多核苷酸；或所述的表达载体；或所述的重组细胞；或所述的药物组合物。
[0026本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种巨噬细胞靶向的具有穿越细胞膜功能的多肽，其特征在于所述多肽的氨基酸序列见SEQNO.1。2.一种分离的多核苷酸，其特征在于，其编码权利要求1所述的多肽。3.一种表达载体，其特征在于，其含有权利要求2所述的多核苷酸。4.一种重组细胞，其特征在于，其含有权利要求3所述的表达载体或其基因组中包含权利要求2所述的多核苷酸。5.权利要求1所述的多肽，或权利要求2所述的多核苷酸，或权利要求3所述的表达载体，或权利要求4所述的重组细胞在制备免疫调节药物或抗与衰老相关疾病的药物中的应用。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于降低LPS诱导的肺炎和DSS诱导的肠炎模型中的炎症因子水平，下调肺纤维化相关基因的表达，下调老龄肺组织中衰老相关基因p16和p21的表达。7.根据权利要求5或6所述的应...

【专利技术属性】
技术研发人员：史丽云，吕年银，
申请(专利权)人：浙江树人学院，
类型：发明
国别省市：