基于限制性酶切的CpG岛甲基化富集测序技术制造技术

本发明专利技术提供一种简便且高效的甲基化测序文库构建方法，在传统的全基因组甲基化测序方法的基础上增加限制性内切酶组合酶切，实现对CpG岛尤其是甲基化修饰的CpG岛富集测序。本发明专利技术的方法降低测序成本并省去了复杂的操作，适用于针对CpG岛的甲基化的研究与应用。用于针对CpG岛的甲基化的研究与应用。

【技术实现步骤摘要】
基于限制性酶切的CpG岛甲基化富集测序技术


[0001]本专利技术涉及DNA测序领域。具体地说，本专利技术涉及基于限制性酶切的CpG岛甲基化富集测序技术。

技术介绍

[0002]DNA的甲基化修饰(5mC)对正常的基因表达以及细胞功能至关重要，参与调控基因表达、染色质稳定性等最基础的生命活动。基因甲基化多态性是个体表型差异的重要原因，基因的甲基化变异也因此会导致个体表型异常。目前已有大量研究表明相较于正常细胞，肿瘤细胞基因的甲基化特征发生广泛且显著的变化，不同癌种也发现具有癌种特异性的甲基化变异基因。因此，基因的甲基化变异可作为泛癌种的生物标志物。
[0003]甲基化肿瘤标志物的发现与研究依赖于对健康组织与癌组织的基因组DNA进行差异甲基化基因分析，目前已有多种成熟的技术能够用于全基因组甲基化检测，包括基于微阵列芯片的Illumina 850K甲基化芯片，基于NGS测序平台的WGBS(Whole
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genome bisulfite sequencing，全基因组重亚硫酸盐测序)，RRBS(Reduced represe本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种DNA甲基化测序文库的构建方法，其特征在于，包括步骤：S1)提供待测DNA样品；S2)对待测DNA两端连接接头序列，从而得到带接头的DNA；S3)对所述带接头的DNA进行AT酶切、非甲基化位点酶切、和CT转化，从而得到酶切测序文库。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1)中，所述待测DNA样品包括基因组DNA(gDNA)或细胞游离DNA(cfDNA)。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1)中，所述待测DNA样品经过片段化处理，优选地被片段化至100
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600bp，更优选为200
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400bp。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S2)中，所述的接头为甲基化接头，其中所有胞嘧啶C均被5
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甲基化修饰。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S3)包括选自下组的步骤：i)a.对DNA进行非甲基化位点酶切和AT酶切，b.对经酶切的DNA进行CT转化，随后进行第一轮PCR扩增，从而得到酶切测序文库；或ii)a.对DNA进行非甲基化位点酶切，b.对经酶切的DNA进行CT转化，随后进行第一轮PCR扩增，c.对经转化的DNA进行AT酶切，随...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜正文，方欧，王果，林芳斌，
申请(专利权)人：上海天昊生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：