一种花生耐盐基因AhLRR-RLK265及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种花生耐盐基因AhLRR

【技术实现步骤摘要】
一种花生耐盐基因AhLRR
‑
RLK265及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种花生耐盐基因AhLRR
‑
RLK265及其应用。

技术介绍

[0002]花生（Arachis hypogaea L.）属豆科（Fabaceae），落花生属（Arachis），是我国重要的油料和经济作物之一，在国民经济中占有重要地位。花生中含有丰富的脂肪和蛋白质，是人类食用油脂和蛋白的重要来源。我国花生种植面积居世界第二位，全年产量占全球总产量的40%，居世界首位。盐碱胁迫严重影响花生的生长发育，在农业生产中造成大量减产，是制约我国花生产业进一步发展的重要因素。据不完全统计，我国约有盐碱地总面积0.33亿hm2，且有不断扩大的趋势，其中绝大部分尚未得到利用。随着花生需求量的不断增加，充分利用我国盐碱土地，扩大花生种植面积，提高花生产量，是科研人员迫切需要解决的问题。因此，培育耐盐碱花生新品种，对于花生产业的发展至关重要。相比于传统育种，利用分子生物学技术培育耐盐碱花生新品种，具有周期短、效率高的优势。耐盐碱基因的挖掘利用对培育耐盐品种同样具有重要的意义。
[0003]目前，花生中已经明确具有耐盐功能的基因尚少。亟需挖掘鉴定花生耐盐基因，为花生分子辅助育种提供基因资源和理论基础。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供了一种花生耐盐基因AhLRR
‑
RLK265及其应用，将AhLRR
‑
RLK265基因转化拟南芥后得到的转基因株系，其根长和萌发率明显优于野生型株系，证明该基因可以有效提高植物的耐盐性。
[0005]为实现上述专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案予以实现：本专利技术提供了一种花生耐盐基因AhLRR
‑
RLK265，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
[0006]进一步的，所述花生耐盐基因AhLRR
‑
RLK265编码的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。
[0007]本专利技术还提供了所述的花生耐盐基因AhLRR
‑
RLK265在提高植物耐盐性中的应用。
[0008]进一步的，所述应用包括以下步骤：（1）扩增花生耐盐基因AhLRR
‑
RLK265；（2）克隆花生耐盐基因AhLRR
‑
RLK265，经酶切、纯化后连接到表达载体中，得到过表达重组载体；（3）将所述过表达重组载体转化农杆菌中，得到过表达重组菌株；（4）将所述过表达重组菌株转化植物中，筛选并得到AhLRR
‑
RLK265转基因株系，以提高植物耐盐性。
[0009]进一步的，用于扩增所述花生耐盐基因AhLRR
‑
RLK265的引物具体如下：AhLRR
‑
RLK265
‑
F：GGATCCATGACACAAGCTTCTTGTTTTAATT；
AhLRR
‑
RLK265
‑
R：GAGCTCCTATGTTGTTCGCTTGGACAAT。
[0010]进一步的，所述步骤（1）中扩增的反应条件为：98 ℃预变性 30 s；98 ℃变性10 s，58 ℃退火 10 s，72 ℃ 50 s，30个循环；72 ℃后延伸10 min。
[0011]进一步的，所述步骤（2）中表达载体为pCambia2300EC载体，其包含35S启动子和NOS终止子。
[0012]进一步的，所述AhLRR
‑
RLK265转基因株系与野生型株系相比，植物根长和萌发率明显增加。
[0013]进一步的，所述植物为花生和拟南芥。
[0014]本专利技术还提供了所述的花生耐盐基因AhLRR
‑
RLK265在用于选育耐盐花生品种中的应用。
[0015]本专利技术与现有技术相比，具有以下优点和有益效果：本专利技术通过转录组测序分析，筛选到一个在盐胁迫下，表达量显著提高的花生基因AhLRR
‑
RLK265，通过荧光定量 PCR 验证了该基因在盐胁迫下在花生幼苗叶中表达量提高近50倍，再将该基因经克隆、构建超表达载体、过表达重组菌株后，转化到拟南芥中获得转基因拟南芥植株AhLRR
‑
RLK265
‑
OE，并证实AhLRR
‑
RLK265
‑
OE在盐胁迫下的根长和萌发率明显优于野生型。由此证明AhLRR
‑
RLK265基因是一个耐盐基因。因此，花生AhLRR
‑
RLK265基因的功能鉴定既丰富了花生耐盐育种的基因资源，又有利于解析花生LRR
‑
RLK类受体蛋白激酶的多样性功能，具有重要的理论意义和应用价值。
附图说明
[0016]图1为盐胁迫下AhLRR
‑
RLK265基因表达量，其中竖坐标为相对表达量，横坐标为处理时间；处理浓度为200 mM NaCl溶液；0，6，24，48为盐胁迫处理后时间（小时）。
[0017]图2和图3为转AhLRR
‑
RLK265基因拟南芥耐盐性鉴定，其中OE3和OE5为转基因拟南芥，WT为未转基因野生型拟南芥。
具体实施方式
[0018]结合以下具体实例对本专利技术的技术方案作进一步详细的说明。
[0019]下述实施例中，如无特殊说明，所使用的实验方法均为常规方法，所用材料、试剂等均可从生物或化学试剂公司购买。
[0020]实施例1本专利技术通过转录组测序分析，筛选到一个在盐胁迫下，表达量显著提高的花生基因AhLRR
‑
RLK265，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，编码的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。然后经RT
‑
qPCR验证发现，在盐胁迫条件下，AhLRR
‑
RLK265基因在花生幼苗叶中表达量提高近50倍，并初步确定该基因在花生应对盐胁迫反应中发挥重要作用。进一步，以花生叶片cDNA为试验材料，利用PCR扩增获得AhLRR
‑
RLK265基因片段；经酶切连接构建表达载体后，利用农杆菌侵染将其转到模式植物拟南芥中，获得了转AhLRR
‑
RLK265基因拟南芥，并证实该基因可以显著提高转基因拟南芥对盐胁迫的抗性，由此证明AhLRR
‑
RLK265基因是一个耐盐基因。因此，花生AhLRR
‑
RLK265基因的功能鉴定既丰富了花生耐盐育种的基因资源，又有利于解析花生LRR
‑
RLK类受体蛋白激酶的多样性功能，具有重要的理论意义和应用价值。
[0021]下面为花生耐盐基因AhLRR
‑
RLK265的克隆方法及其应用的具体步骤：1、以花生AhLRR
‑
RLK265基因编码区序列为参考，设计本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种花生耐盐基因AhLRR
‑
RLK265，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。2.根据权利要求1所述的花生耐盐基因AhLRR
‑
RLK265，其特征在于，其编码的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。3.权利要求1或2所述的花生耐盐基因AhLRR
‑
RLK265在提高植物耐盐性中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述应用包括以下步骤：（1）扩增花生耐盐基因AhLRR
‑
RLK265；（2）克隆花生耐盐基因AhLRR
‑
RLK265，经酶切、纯化后连接到表达载体中，得到过表达重组载体；（3）将所述过表达重组载体转化农杆菌中，得到过表达重组菌株；（4）将所述过表达重组菌株转化植物中，筛选并得到AhLRR
‑
RLK265转基因株系，以提高植物耐盐性。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，用于扩增所述花生耐盐基因AhLRR
‑
RLK265的引物具体如下：A...

【专利技术属性】
技术研发人员：王奇，李春娟，单世华，
申请(专利权)人：山东省花生研究所，
类型：发明
国别省市：