网状路径产物定向合成制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体涉及网状路径产物定向合成。与利用天然微生物内源路径转化甾体底物相比，本发明专利技术在酵母底盘下，利用重新构建人工异源网状路径，通过理性组合路径组分蛋白，可实现定向合成节点产物。通过组合表达不同催化特异性的路径组分同源蛋白，可实现路径转化效率的进一步提升。同时利用在微生物底盘下构建人工孕烯醇酮合成路径，并通过引入特定下游雄烯二酮合成路径组分，实现以简单碳源为底物，定向合成雄烯二酮路径节点化合物。定向合成雄烯二酮路径节点化合物。

【技术实现步骤摘要】
网状路径产物定向合成


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及网状路径产物定向合成。

技术介绍

[0002]脊索动物中，甾体类激素合成路径由众多非特异性催化酶组成，这些酶可修饰多种结构相似的底物，因而酶之间往往共用多个底物，路径间反应交叉最终使得甾体合成路径呈现呈复杂网状催化，这大大增加了微生物定向异源合成网状路径中间节点化合物的难度。
[0003]甾体激素是一类以环戊烷多氢菲母核为基本结构是四环脂肪族碳氢化合物，该类化合物种类繁多，目前全世界生产的甾体药物已有400多种，以其抗炎、抗过敏、调节内分泌等功效得到广泛应用，到2017年甾体激素药物全球销售额达1000亿美元，为第二大类化学药物。由CYP17
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3β
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HSD构成的“孕烯醇酮
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雄烯二酮”合成路径位于脊椎动物类固醇合成途径中的交叉路口，其中包含多种甾体激素药物的关键前体(孕烯醇酮、孕酮、17
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羟基孕酮、17
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羟基孕烯醇酮、DHEA、雄烯二酮、睾酮)。/>[0004]甾体本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.表达如下任意项在合成甾体类化合物和/或甾体激素药物中的应用：(I)、来源于Equus caballus、Ovis aries、Mesocricetus auratus或Xenopus laevis的CYP17A1和POR；和/或(II)、来源于Equus caballus、Ovis aries、Mesocricetus auratus或Sus scrofa的CYB5；和/或(III)、来源于Mus musculus、Bos taurus、Vaccinia virus、Arabidopsis thaliana、Mycobacterium tuberculosis、Homo sapiens(I型)、Homo sapiens(II型)、Homo sapiens(I型，L237S突变)或Homo sapiens(II型，L236S突变)的3β
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HSD；和/或(IV)、来源于Sus scrofa的mCYP11A1。2.模块，其特征在于，包括表达如下任意项：(I)、来源于Equus caballus、Ovis aries、Mesocricetus auratus或Xenopus laevis的CYP17A1和POR；和/或(II)、来源于Equus caballus、Ovis aries或Mesocricetus auratus或Sus scrofa的CYB5；和/或(III)、来源于Mus musculus、Bos taurus、Vaccinia virus、Arabidopsis thaliana、Mycobacterium tuberculosis、Homo sapiens(I型)、Homo sapiens(II型)、Homo sapiens(I型，L237S突变)或Homo sapiens(II型，L236S突变)的3β
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HSD；和/或(IV)、来源于Sus scrofa的mCYP11A1。3.质粒，其特征在于，包括如权利要求2所述的表达元件。4.宿主，其特征在于，包括如权利要求3所述的质粒。5.如权利要求4所述的宿主，其特征在于，包括模块一、模块二、模块三、模块四、模块五、模块六、模块七、模块A、模块B、模块C或模块D中的一种或多种：所述模块一包括来源于Equus caballus、Ovis aries、Mesocricetus auratus或Xenopus laevis的CYP17A1和POR；所述模块一包括IntD整合位点和/或两端带有LoxP位点的Leu2标签；和/或所述模块二包括来源于Equus caballus、Ovis aries、Mesocricetus auratus或Susscrofa的CYB5；所述模块二包括IntB整合位点和/或Ura3标签；和/或所述模块三包括来源于Mus musculus、Bos taurus、Vaccinia virus、Arabidopsis thaliana、Mycobacterium tuberculosis、Homo sapiens(I型)、Homo sapiens(II型)、Homo sapiens(I型，L237S突变)或Homo sapiens(II型，L236S突变)的3β
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HSD；所述模块三连接的载体包括pINA1269
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Nat；和/或所述模块四包括来源于Equus caballus的CYP17A1和POR；所述模块四包括IntF整合位点和/或两端带有LoxP位点的Leu2标签；和/或所述模块五包括：来源于Ovis aries的CYP17A1和POR；所述模块五敲除Leu2标签；和/或所述模块六包括；来源于Homo sapiens(II型)的3β
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HSD；所述模块六包括IntC整合位点和/或两端带有LoxP位点的Leu2标签；和/或所述模块七包括：来源于Mesocricetus auratus的CYP17A1和POR、来源于Homo sapiens(II型)的3β
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HSD和来源于Vaccinia virus的3β
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【专利技术属性】
技术研发人员：元英进，张若思，王颖，肖文海，姚明东，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：