利用大肠杆菌P450酶全细胞催化合成羟基化黄酮化合物的方法及应用技术

本发明专利技术公开了利用大肠杆菌P450酶全细胞催化合成羟基化黄酮化合物的方法及应用，属于基因工程技术领域。本发明专利技术通过筛选出高产羟基化黄酮化合物的P450sca

【技术实现步骤摘要】
利用大肠杆菌P450酶全细胞催化合成羟基化黄酮化合物的方法及应用


[0001]本专利技术涉及利用大肠杆菌P450酶全细胞催化合成羟基化黄酮化合物的方法及应用，属于基因工程


技术介绍

[0002]细胞色素P450酶是一类以血红素为辅基的酶，广泛存在于动植物、古生菌、细菌和真核生物等生物体内。在哺乳动物如人体内，P450酶广泛参与异源物质降解、解毒作用、药物代谢以及甾体类激素和维生素的合成。在植物中，P450酶能够催化一系列天然产物(如：萜类、多烯类、糖肽类、生物碱类、脂肪酸类、类固醇类)发生区域或立体的羟基化、环氧化、脱烷基、脱卤素等氧化催化反应。由于P450酶具有广泛的底物谱和催化反应的多样性，大量的P450酶逐渐被应用到微生物制药领域用来合成有价值的天然产物或者药物。以往的研究多采用胞外酶促催化方法，该方法往往需要对P450酶及辅酶进行纯化，而且需要额外添加昂贵的辅因子NAD(P)H和辅因子循环系统，催化合成成本较高。与胞外酶促催化方法相比，全细胞催化方法是催化成本低的替代方法。
[0003]黄酮类化合物是一类广泛存在植物中本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.细胞色素P450酶突变体，其特征在于，以SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列为出发序列，进行了如下任意一种改进：(1)将SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列的第88位的精氨酸突变为丙氨酸；(2)将SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列的第96位的丝氨酸突变为丙氨酸；(3)将SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列的第88位的精氨酸突变为丙氨酸，并将第96位的丝氨酸突变为丙氨酸。2.编码权利要求1所述突变体的基因。3.表达权利要求1所述细胞色素P450酶突变体或表达SEQ ID NO.1所示细胞色素P450酶的重组大肠杆菌。4.根据权利要求3所述的重组大肠杆菌，其特征在于，还表达铁氧还蛋白还原酶基因CamA和铁氧还蛋白基因CamB。5.根据权利要求3所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述大肠杆菌还表达氧化还原伴侣基因；所述氧化还原伴侣基因包括大肠杆菌的黄素氧还蛋白还原酶Fpr和大肠杆菌来源的黄素氧化蛋白Fld、FldA、FldB、枯草芽孢杆菌来源的黄素氧化蛋白YkuN、YkuP中的任一蛋白的组合。6.根据权利要求3所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌使用表达载体共表达权利要求1所述细...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵鑫锐，胡宝东，周景文，堵国成，陈坚，李江华，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：