乙型肝炎病毒抗原的胸腺依赖性淋巴细胞抗原表位肽及其应用制造技术

本发明专利技术属于医学免疫学和感染病学领域，特别涉及189种乙型肝炎病毒抗原的胸腺依赖性淋巴细胞抗原表位肽及其应用，所述抗原表位肽分别是由HLA

【技术实现步骤摘要】
乙型肝炎病毒抗原的胸腺依赖性淋巴细胞抗原表位肽及其应用
[0001]本案是针对专利技术名称为乙型肝炎病毒抗原的胸腺依赖性淋巴细胞抗原表位肽及其应用，申请号为2019112846358，申请日为2019.12.13的案件所做的分案。


[0002]本专利技术属于医学免疫学和感染病学领域，特别涉及189种乙型肝炎病毒抗原的胸腺依赖性淋巴细胞抗原表位肽及其应用。

技术介绍

[0003]乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染是最常见感染性疾病之一，严重危及人类的健康。世界卫生组织2015年7月统计数据显示，预计全球1/3的人口感染过HBV，约2.48亿HBV携带者，后期可发展为肝硬化和原发性肝细胞癌。每年约78万HBV感染的患者因疾病进展为肝硬化、肝衰竭或是肝癌而导致死亡。流行病学调查显示在中国约8亿人感染过HBV，乙肝表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)携带率高达10.34％，即我国目前约有1.2亿人为HBV携带者，占全球慢性感染人数的一半。另外，我国也是一个肝癌大国，约占全球肝癌人数的55％以上。
[0004]HBV基因组由不完全双链环状DNA组成，长的为负链，含3020
‑
3320个碱基，短的为正链，含1700
‑
2800个碱基。包括四个开放阅读框(ORF)，分别称为C、X、P和S编码区。C区由pre
‑
C和C基因组成，分别由不同的起始密码子调控，在相同的终止密码子处结束，pre
>‑
C和C基因共同编码pre
‑
C蛋白，Pre
‑
C蛋白再经过切割加工后形成e抗原(HBeAg)。C基因编码病毒的衣壳蛋白，即HBcAg。S区由S基因、PreS1和PreS2基因组成，由3个不同的起始密码子启动翻译，在同一个终止密码子处终止翻译，分别编码表面抗原(HBsAg)蛋白、PreS1蛋白和PreS2蛋白。P区基因编码的HBV的聚合酶蛋白(HBpol)。X区的基因编码X蛋白(HBx)，包含154个氨基酸，是最小的一个开放阅读框。
[0005]细胞毒性T细胞(Cytotoxic T lymphocyte,CTL)是介导适应性免疫应答的核心细胞，在抗感染、抗肿瘤以及超敏反应和自身免疫病的发生中起着至关重要的作用，其细胞膜上的T细胞受体(T cell receptor,TCR)能够特异性识别并结合抗原递呈细胞表面MHC I类分子与抗原肽的复合物，即MHC/抗原肽复合体分子。CTL表位是指与MHC I类分子结合的抗原肽，是抗原分子中能被TCR特异性识别的线性片段或空间构象性结构，是引起免疫应答反应的基本抗原单位，在CTL活化过程中扮演着关键角色。
[0006]MHC系统指主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)，是脊椎动物基因组中一组紧密连锁的基因群，编码表达MHC I类和II类蛋白分子。HLA(human leukocyte antigen)是人类的MHC系统，是人体最复杂的基因群，在人群中具有高度多态性。HLA在抗原识别、抗原呈递等机体免疫过程中发挥重要作用，是影响人体免疫反应的主要因素。HLA I类分子主要负责将内源性HBV抗原呈递给CD8
+ CTL，活化的CTLs通过分泌穿孔素和颗粒酶等使病毒感染的肝细胞凋亡，同时分泌特定的细胞因子抑制HBV的复
制。因此，动态监测HBV抗原特异性CD8
+ T细胞的数量和功能可以准确反映乙肝感染者针对HBV的特异性免疫功能状态。由于不同人的HLA分子型别不同，其对HBV不同抗原的加工、处理和提呈能力也不相同，从而引起不同程度的HBV抗原特异性免疫应答反应。根据乙肝患者不同的HLA分子型别，选择其所提呈的HBV特异性抗原肽，动态监测该HBV抗原肽特异性的CD8
+ T细胞的数量和功能，对HBV感染者的疾病进程监测、诊断与治疗方案的制定、疗效观察和预后转归的判断等都有重要意义，是实现乙肝精准医学治疗的重要技术手段。同时，利用这些HLA
‑
A分子高亲和力结合的HBV特异性抗原肽，还可以制备多肽疫苗或基因疫苗，预防和治疗HBV感染。
[0007]但是，目前已明确的被各种HLA分子所提呈并能刺激机体引起T细胞应答反应的HBV抗原肽仍然很少，从而限制了对携带不同HLA等位基因的乙肝患者开展特异性T细胞检测，也限制了HBV特异性T细胞在乙肝发生发展中的作用研究，更限制了基于HLA基因个体差异性及其提呈的HBV抗原肽差异性的个性化检测和精准免疫治疗。

技术实现思路

[0008]本专利技术解决现有技术中存在的上述技术问题，提供乙型肝炎病毒抗原的胸腺依赖性淋巴细胞抗原表位肽及其应用。
[0009]为解决上述问题，本专利技术的技术方案如下：
[0010]乙型肝炎病毒抗原的胸腺依赖性淋巴细胞抗原表位肽，其氨基酸序列为如下所示表位肽序列中的任一种：
[0011][0012][0013][0014][0015][0016][0017][0018][0019]由上述的表格可看出，上述序列分别为乙肝病毒e抗原HBeAg、表面抗原HBsAg、聚合酶蛋白HBpol或X蛋白(HBx)的抗原肽序列，上述序列分别与HLA
‑
A0201、A1101、A2402、A3101、A0206、A0207、A3303、A3001、A0203、A1102、A0301、A0101、A2601分子呈高亲和力结合，在抗原提呈细胞表面组成MHC/抗原肽复合体分子，与抗原肽特异性CD8
+ T细胞克隆结合，刺激其活化、增殖和分化，发挥抗乙型肝炎病毒的免疫效应作用。
[0020]所述乙型肝炎病毒抗原的胸腺依赖性淋巴细胞抗原表位肽序列可用于制备乙型肝炎多肽疫苗或基因疫苗：多肽疫苗制备：按照本专利技术的抗原表位肽序列人工合成一种或多种抗原肽，与佐剂混合制成可溶性制剂，或者由生物纳米材料装载制成纳米多肽疫苗，注入乙肝病毒感染者或乙型肝炎患者体内，激发患者乙肝病毒抗原特异性T细胞活化、增殖，并增强其杀瘤细胞活性，从而制备成乙肝多肽疫苗。基因疫苗制备：按照本分明的多肽序列，构建一种多肽或多种多肽的重组DNA基因片段、重组质粒或者重组病毒载体，注入乙肝病毒感染者或乙型肝炎患者体内，使该重组基因在体内表达一种或多种多肽，激发乙肝病毒抗原特异性T细胞活化、增殖，并增强其杀病毒感染细胞的活性，从而制备成乙肝基因疫苗。
[0021]所述乙型肝炎病毒抗原的胸腺依赖性淋巴细胞抗原表位肽序列可用于制备检测乙型肝炎病毒抗原特异性T细胞的检测制剂或试剂盒：按照本专利技术的抗原表位肽序列，人工合成一种或多种抗原肽，在酶联免疫斑点法、胞内细胞因子荧光染色法和酶联免疫吸附试验中，作为抗原制剂，与患者外周血单个核细胞(PBMC)混合培养，刺激乙肝病毒抗原特异性T细胞活化、增殖和分泌细胞因子，进而通过其他组合试剂检测该细胞因子的合成量，从而反应特异性T细胞的数量和反应活本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.乙型肝炎病毒抗原的胸腺依赖性淋巴细胞抗原表位肽，其特征在于，所述抗原表位肽的氨基酸序列为如下序列中的任一种：TVNAHQVLPK、PASRELVVSY、HTAELLAACF。2.一种利用要求1所述的乙型肝炎病毒抗原的胸腺依赖性淋巴细胞抗原表位肽进行单个氨基酸的去除或者更换后所得抗原表位肽。3.一种利用权利要求1所述的乙型肝炎病毒抗原的胸腺依赖性淋巴细胞抗原表位肽或权利要求2所述的抗原表位肽在制备乙型肝炎多肽疫苗或基因疫苗中的应用。4.一种利用权利要求1所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈传来，周子宁，丁艳，
申请(专利权)人：东南大学，
类型：发明
国别省市：