用于眼部基因疗法的经修饰的腺相关病毒衣壳蛋白及其使用方法技术

本文提供了经修饰的腺相关病毒(AAV)衣壳蛋白、包含所述衣壳蛋白的组合物(例如，rAAV)、和编码所述衣壳蛋白的核酸。本文提供的AAV衣壳赋予视网膜细胞嗜性和/或角膜细胞嗜性，并且介导在临床相关的眼部细胞类型诸如感光细胞和/或角膜内皮细胞中改善的转导效率。还提供了编码所述衣壳蛋白的核酸以及包含所述衣壳蛋白的AAV颗粒。壳蛋白的AAV颗粒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于眼部基因疗法的经修饰的腺相关病毒衣壳蛋白及其使用方法
相关申请的交叉引用
[0001]本申请要求2020年1月29日提交的美国临时申请号62/967,416的权益，将其公开内容通过引用以其整体特此并入。序列表
[0002]本申请含有序列表，所述序列表已经以电子方式以ASCII格式提交并且通过引用以其整体特此并入(所述ASCII副本创建于2021年1月27日，名为“714485_SA9
‑
285TW_SL”，并且大小为47,596字节)。

技术介绍

[0003]基因疗法提供了使用遗传方法治愈性治疗人类疾病的希望，所述遗传方法可以包括引入基因(例如，突变基因)的健康拷贝或修正基因以恢复其生物功能。源自非病原性和无包膜复制缺陷型细小病毒的腺相关病毒(AAV)载体代表用于人基因递送的理想载体。AAV载体系统的一个优点是多种天然存在的血清型的可用性，所述血清型提供针对各种靶细胞的选择性嗜性。
[0004]尽管基因疗法正在被追寻作为用于治疗一系列遗传疾病的策略，但眼部障碍是对于基因疗法而言特别有吸引力的适应症。已经鉴定了引起各种本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】ID NO:9所示的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％序列同一性的氨基酸序列，其中所述衣壳蛋白中对应于SEQ ID NO:9的氨基酸573的氨基酸是R。16.一种经修饰的腺相关病毒(AAV)衣壳蛋白，其包含：在对应于氨基酸194的位置的G；在对应于氨基酸474的位置的R；在对应于氨基酸564的位置的R；和/或在对应于氨基酸573的位置的R，其中所述位置的编号基于AAV5的VP1编号。17.一种经修饰的腺相关病毒(AAV)衣壳蛋白，其包含在对应于氨基酸194的位置的G，其中所述位置的编号基于AAV5的VP1编号。18.一种经修饰的腺相关病毒(AAV)衣壳蛋白，其包含在对应于氨基酸474的位置的R，其中所述位置的编号基于AAV5的VP1编号。19.一种经修饰的腺相关病毒(AAV)衣壳蛋白，其包含在对应于氨基酸564的位置的R，其中所述位置的编号基于AAV5的VP1编号。20.一种经修饰的腺相关病毒(AAV)衣壳蛋白，其包含在对应于氨基酸573的位置的R，其中所述位置的编号基于AAV5的VP1编号。21.一种经修饰的腺相关病毒(AAV)衣壳蛋白，其包含SEQ ID NO:3、5、7或9所示的氨基酸序列。22.一种分离的核酸，其编码根据权利要求1至21中任一项所述的衣壳蛋白。23.一种分离的核酸，其包含SEQ ID NO:4、6、8或10所示的核苷酸序列。24.一种载体，其包含根据权利要求22或23所述的核酸。25.根据权利要求24所述的载体，其中所述载体是质粒或辅助病毒载体。26.根据权利要求25所述的载体，其中所述辅助病毒载体是逆转录病毒载体、疱疹病毒载体、杆状病毒载体或腺病毒载体。27.根据权利要求24至26中任一项所述的载体，其中所述载体是表达载体。28.一种重组细胞，其包含根据权利要求22或23所述的核酸或根据权利要求24至27中任一项所述的载体。29.一种生产AAV衣壳蛋白的方法，所述方法包括在表达所述核酸并且产生所述衣壳蛋白的条件下培养根据权利要求28所述的重组细胞。30.一种重组腺相关病毒(rAAV)颗粒，其包含：(a)包含经修饰的衣壳蛋白的rAAV衣壳，其中所述经修饰的衣壳蛋白包含在对应于氨基酸194、474、564和/或573的一个或多个位置的氨基酸取代，其中所述位置的编号基于AAV5的VP1编号；以及(b)包含异源核酸的rAAV载体。31.根据权利要求30所述的rAAV颗粒，其中所述位置的编号基于如SEQ ID NO:1所示的野生型AAV5 VP1的氨基酸序列。32.根据权利要求30或31所述的rAAV颗粒，其中所述经修饰的衣壳蛋白是AAV血清型的经修饰的衣壳蛋白，所述AAV血清型选自AAV1、AAV2、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAVB1、AAVAnc80、AAV7m8、AAVrh10、AAV2(Y444F)、AAV2(Y444+500+730)、AAV2(Y252+272+
444+500+700+704+730F)、AAV8(Y733F)以及其任何变体。33.根据权利要求30至32中任一项所述的rAAV颗粒，其中所述经修饰的衣壳蛋白是AAV5的经修饰的衣壳蛋白。34.根据权利要求30至33中任一项所述的rAAV颗粒，其中所述经修饰的衣壳蛋白包含与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％序列同一性的氨基酸序列。35.根据权利要求30至34中任一项所述的rAAV颗粒，其中所述经修饰的衣壳蛋白包含与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。36.根据权利要求30至35中任一项所述的rAAV颗粒，其中所述经修饰的衣壳蛋白包含与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的氨基酸序列。37.根据权利要求30至32中任一项所述的rAAV颗粒，其中所述衣壳蛋白中对应于氨基酸194的氨基酸是G。38.根据权利要求37所述的rAAV颗粒，其中所述经修饰的衣壳蛋白包含与SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％序列同一性的氨基酸序列，其中所述衣壳蛋白中对应于SEQ ID NO:3的氨基酸194的氨基酸是G。39.根据权利要求30至32中任一项所述的rAAV颗粒，其中所述衣壳蛋白中对应于氨基酸474的氨基酸是R。40.根据权利要求39所述的rAAV颗粒，其中所述经修饰的衣壳蛋白包含与SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％序列同一性的氨基酸序列，其中所述衣壳蛋白中对应于SEQ ID NO:5的氨基酸474的氨基酸是R。41.根据权利要求30至32中任一项所述的rAAV颗粒，其中所述衣壳蛋白中对应于氨基酸564的氨基酸是R。42.根据权利要求41所述的rAAV颗粒，其中所述经修饰的衣壳蛋白包含与SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％序列同一性的氨基酸序列，其中所述衣壳蛋白中对应于SEQ ID NO:7的氨基酸564的氨基酸是R。43.根据权利要求30至32中任一项所述的rAAV颗粒，其中所述衣壳蛋白中对应于氨基酸573的氨基酸是R。44.根据权利要求43所述的rAAV颗粒，其中所述经修饰的衣壳蛋白包含与SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％序列同一性的氨基酸序列，其中所述衣壳蛋白中对应于SEQ ID NO:9的氨基酸573的氨基酸是R。45.一种重组腺相关病毒(rAAV)颗粒，其包含：(a)包含经修饰的衣壳蛋白的rAAV衣壳，其中所述经修饰的衣壳蛋白包含：在对应于氨基酸194的位置的G、在对应于氨基酸474的位置的R、在对应于氨基酸564的位置的R和/或在对应于氨基酸573的位置的R，其中所述位置的编号基于AAV5的VP1编号；以及
(b)包含异源核酸的rAAV载体。46.一种重组腺相关病毒(rAAV)颗粒，其包含：(a)rAAV衣壳，所述rAAV衣壳包含在对应于氨基酸194的位置的G，其中所述位置的编号基于AAV5的VP1编号；以及(b)包含异源核酸的rAAV载体。47.一种重组腺相关病毒(rAAV)颗粒，其包含：(a)rAAV衣壳，所述rAAV衣壳包含在对应于氨基酸474的位置的R，其中所述位置的编号基于AAV5的VP1编号；以及(b)包含异源核酸的rAAV载体。48.一种重组腺相关病毒(rAAV)颗粒，其包含：(a)rAAV衣壳，所述rAAV衣壳包含在对应于氨基酸564...

【专利技术属性】
技术研发人员：A，
申请(专利权)人：建新公司，
类型：发明
国别省市：