非洲猪瘟疫苗组合物制造技术

本发明专利技术涉及多肽、多核苷酸、质粒和包含它们的疫苗组合物，其涉及引发对非洲猪瘟的免疫应答。并且，本发明专利技术还涉及一种引发受体对非洲猪瘟免疫应答的方法。此外，本发明专利技术还涉及一种用于治疗或预防非洲猪瘟的药物组合物，该药物组合物包含多肽、多核苷酸或质粒，其涉及引发对非洲猪瘟免疫应答。另外，本发明专利技术还涉及治疗或预防受体非洲猪瘟的方法。或预防受体非洲猪瘟的方法。或预防受体非洲猪瘟的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】非洲猪瘟疫苗组合物


[0001]本专利技术涉及一种多肽、多核苷酸、质粒和包含它们的疫苗组合物，其涉及引发对非洲猪瘟的免疫应答。并且，本专利技术还涉及一种引发受体对非洲猪瘟免疫应答的方法。此外，本专利技术还涉及一种用于治疗或预防非洲猪瘟的药物组合物，该药物组合物包含多肽、多核苷酸或质粒，其涉及引发对非洲猪瘟免疫应答。另外，本专利技术还涉及一种治疗或预防受体非洲猪瘟的方法。

技术介绍

[0002]非洲猪瘟(African Swine Fever，ASF)是一种猪的传染性病毒疾病，会导致严重出血。一旦发生，它具有高度传染性，而且没有治疗方法。此外，受感染的猪的死亡率非常高，对猪肉行业造成巨大损害。因此，当非洲猪瘟发生时，必须立即向世界动物卫生组织(OIE)报告，并立即停止与猪有关的国际贸易。ASF被世界动物卫生组织(OIE)列为一种非常重要的疾病，根据韩国《传染病预防法》，该疾病被指定为法定传染病并进行管理。
[0003]非洲猪瘟病毒(ASFV)是一种约200nm的DNA病毒，属于非洲猪瘟病毒科非洲猪瘟病毒属。据报道，ASF病毒不会感染人类或其他动物，但只感染猪科动物。
[0004]ASF病毒大量存在于受感染动物的唾液、呼吸道分泌物、尿液、粪便等中，ASF传染接触这些物质的正常动物。由于猪死后病毒可能会在血液和组织中存活，如果在不加热的情况下向猪提供含有受感染动物组织的饲料，ASF可能会迅速传染。另外，该病毒可能会通过猪之间打斗、血性腹泻等溢出的血液传播。另外，吸血昆虫，如蚊子、咬人的苍蝇和属于钝缘蜱属的软蜱可能携带ASFV，并当它们咬猪或吸血时作为传播疾病的携带者。
[0005]ASF可以感染所有年龄段的猪。发病率取决于感染的病毒和接触途径，自然感染的潜伏期为4至19天不等。感染高致病性病毒时，死亡率几乎为100％。
[0006]ASF病毒根据其致病性可分为高致病性、中致病性和低致病性。高致病性ASF病毒可引起过急性(猪感染后1至4天死亡)和急性(猪感染后3至8天死亡)疾病，而中致病性ASF病毒可引起急性(猪感染之后11至15天死亡)和亚急性(猪感染20天后死亡)疾病。低致病性ASF病毒仅在流行地区报告，并导致亚临床或慢性疾病。
[0007]ASF很难在早期诊断，特别是当感染猪的数量很少时。这是因为ASF的临床症状与其他出血性猪疾病相混淆，如败血症性沙门氏菌病和猪皮炎肾病综合征(PDNS)。只有通过实验室分析，如检测血液和内脏中病毒的方法和检测感染猪血清中抗体的方法，才能准确诊断。在许多情况下，当ASF被诊断时，该疾病已经广泛传播。例如，ASF的传染性如此之高，以至于2018年在中国首次确诊ASF后不到9个月，ASF就在中国所有行政区发生。此外，在世界上最大的养猪国中国，2019年约有1.3亿头猪因ASF死亡或被杀死，这意味着从ASF爆发前的4.3亿头猪减少了约1/3。
[0008]ASF疫苗自20世纪60年代以来一直在稳步研究。迄今为止，已经进行了各种尝试，例如减毒活疫苗、灭活疫苗、重组蛋白疫苗和病毒载体疫苗，但尚未开发出可商业应用的具有优异效果的疫苗。最近发表的一项研究表明，即使通过接种灭活疫苗形成了中和抗体，但
在实际挑战过程中没有保护作用或可以忽略。研究表明，除了产生中和抗体外，诱导细胞免疫应答是提高疫苗对病毒保护能力的重要机制(Takamatsu et al.,Virus Res.2013 Apr,173(1):110
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21)。
[0009]此外，很难开发出针对猪致命的ASF的有效疫苗的原因之一是ASF病毒的庞大和复杂性。正常病毒有10至12种蛋白质，ASF病毒有150多种蛋白质，有许多不同类型的病毒(24种基因型)。因此，专家们预测，至少在未来10年内，疫苗的商业化是困难的。
[0010]因此，非常需要针对ASF的疫苗或治疗。特别是，提前稳定有效地预防ASF是非常重要的，为此，对新疫苗的需求非常高。

技术实现思路

[0011]本专利技术的一个目的是提供能够引发对ASF的免疫应答的多肽和编码该多肽的多核苷酸。
[0012]本专利技术的另一个目的是提供能够引发对ASF的免疫应答的质粒。
[0013]本专利技术的另一个目的是提供抗ASF的疫苗组合物。
[0014]本专利技术的另一个目的是提供一种在受体中引发对ASF的免疫应答的方法。
[0015]本专利技术的另一个目的是提供用于治疗或预防ASF的药物组合物。
[0016]本专利技术的另一个目的是提供治疗或预防受体ASF的方法。
[0017]为了实现上述目的，本专利技术的一个方面提供了一种多肽，包含至少一个选自ASF病毒基因p30、p54、C型凝集素、CD2v、p49、pp62、EP364R、F317L、A104R和K205R的氨基酸序列。
[0018]本专利技术的另一方面提供一种多肽，其包含至少一个选自SEQ ID NOs：1～10的氨基酸序列或与其具有90％或更多同一性的氨基酸序列。
[0019]如本文所用，术语“同一性”是指给定多肽序列或多核苷酸序列对应的程度，并且可以百分比表示。在本说明书中，与给定多肽序列具有相同或类似活性的序列的同一性可以用“％同一性”表示。可以通过使用诸如BLAST2.0的标准软件来确定同一性，BLAST 2.0计算诸如分数、同一性、相似性等参数，或者通过在严格限定的条件下使用的杂交测试来比较序列。可通过本领域技术人员公知的任何方法来确定待定义的适当杂交条件。
[0020]SEQ ID NOs：1～10的氨基酸序列依次是6通过比较来自各种ASF病毒株的基因p30(CP204L)、p54(E183L)、C型凝集素(EP153R)、CD2v(EP402R)、p49(B438L)、pp62(CP530R)、EP364R、F317L、A104R和K205R的序列同源性而获得的共有序列。
[0021]包含SEQ ID NOs：1～10的氨基酸序列或与其具有90％或更多同一性的氨基酸序列中的至少一个的多肽可以有效地充当能够产生针对ASF的免疫应答的抗原。
[0022]所述多肽可包含上述氨基酸序列中的一个，或可包含两个或更多。此外，所述多肽可进一步包含Kozak序列、IgE前导序列、泛素序列和/或切割位点序列。例如，所述多肽可包含Kozak序列
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IgE前导序列
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SEQ ID NO：1的氨基酸序列。作为另一个例子，所述多肽可包含Kozak序列
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IgE前导序列
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泛素序列
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SEQ ID NO：1的氨基酸序列。作为另一个例子，所述多肽可包含Kozak序列
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IgE前导序列
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泛素序列
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SEQ ID NO：1的氨基酸序列
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切割位点序列
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SEQ ID NO：2的氨基酸序列。泛素序列优选为SEQ ID NO：41，切割位点序列优选为SEQ ID NO：43。<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种多肽，包含至少一个选自非洲猪瘟病毒基因p30、p54、C型凝集素、CD2v、p49、pp62、EP364R、F317L、A104R和K205R的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的多肽，其中，所述多肽包含至少一个选自SEQ ID NOs：1～10的氨基酸序列或与其具有90％或更多同一性的氨基酸序列。3.根据权利要求1所述的多肽，其中，所述多肽进一步包含选自Kozak序列、IgE前导序列、泛素序列和弗林蛋白酶切割位点序列中的至少一个。4.根据权利要求1所述的多肽，其中，所述多肽进一步包含SEQ ID NO：41的氨基酸序列。5.根据权利要求1所述的多肽，其中，所述多肽进一步包含SEQ ID NO：43的氨基酸序列。6.一种多核苷酸，包含至少一个选自非洲猪瘟病毒基因p30、p54、C型凝集素、CD2v、p49、pp62、EP364R、F317L、A104R和K205R的核苷酸序列。7.根据权利要求6所述的多核苷酸，其中，所述多核苷酸包含编码SEQ ID NOs：1～10的氨基酸序列或与其具有90％或更多同一性的氨基酸序列，或者SEQ ID NOs：11～20的核苷酸序列或与其具有90％或更多同一性的核苷酸序列。8.根据权利要求6所述的多核苷酸，其中，所述多核苷酸进一步包含选自Koz...

【专利技术属性】
技术研发人员：金银眞，严泰起，宋暻珠，金旼志，陆根荣，
申请(专利权)人：株式会社准绳生命科学，
类型：发明
国别省市：