一种贝莱斯芽孢杆菌NC-B4及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种贝莱斯芽孢杆菌NC

【技术实现步骤摘要】
一种贝莱斯芽孢杆菌NC
‑
B4及其应用


[0001]本专利技术涉及医学生物
，具体讲是一种贝莱斯芽孢杆菌NC
‑
B4及其应用。

技术介绍

[0002]耳念珠菌(Candida auris)，又称耳道假丝酵母,是日本科学家在2009年首次报道的新物种，有"超级真菌"之称。耳念珠菌可以感染不同年龄段患者，会引起ICU患者发生血流感染等侵袭性感染，也会定植在人体的皮肤、呼吸道和泌尿道等不同部位，其在环境中的存活时间久且很难清除，此外，耳念珠菌最突出的特征是耐药乃至多重耐药性，其对三类主要的抗真菌药物
‑
唑类药物、多烯类药物和棘白菌素类药物通常都具有单一或多重耐药性,且耐药性程度不尽相同，这也是耳念珠菌感染治疗失败及流行难以控制的主要原因。
[0003]耳念珠菌对于氟康唑、伏立康唑等广谱三唑类抗真菌药有较强耐药性，仅棘白菌素类药物对于部分菌株尚有治疗效果，抗真菌药物治疗目前仍然是耳念珠菌感染治疗的主要措施，但长期是使用抗生素类药物引发的环境污染、病原菌抗药性等问题越来越引起人们的担忧。而利用生防菌株及其活性产物作为一种新型生防微生物因子防治病原菌越来越受到人们的关注。因此，筛选鉴定出对耳念珠菌具有显著拮抗作用的生防菌株，对耳念珠菌感染的治疗具有重要意义。
[0004]大量研究表明，芽孢杆菌在工农业及医药生产中均有广泛应用，其产生的抗菌物质一般具有广泛的抑菌谱，能杀伤包括耐药菌株在内的细菌、某些真菌、寄生虫、部分病毒以及肿瘤细胞等，并且有结合脂多糖、中和内毒素等作用，因此引起了科学家和医务工作者的广泛关注。芽孢杆菌制备的微生态制剂在治疗肠道菌群失调症、治疗念珠菌感染、预防疮面感染等医疗过程中发挥了重要的作用，其作为益生菌在医药领域被广泛研究，是较理想的新型生防微生物因子。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于至少解决现有技术中存在的技术问题之一，提供一种贝莱斯芽孢杆菌NC
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B4及其在防治耳念珠菌感染上的应用。
[0006]本专利技术的技术解决方案如下：
[0007]一种贝莱斯芽孢杆菌NC
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B4，分类命名为贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis，名称为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)NC
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B4，已于2022年05月19日保存于中国普通微生物菌种保藏管理中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所)，保藏编号为CGMCC NO.24929。
[0008]进一步地，其上的16S rDNA、gyrA、rpoB基因的序列分别如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3所示。
[0009]本专利技术还公开了一种如上所述的贝莱斯芽孢杆菌NC
‑
B4在制备防治人体病原真菌感染药物上的应用。
[0010]进一步地，所述人体病原真菌为耳念珠菌、白色念珠菌、隐球菌、丝状真菌。
[0011]进一步地，所述丝状真菌为小克银汉霉、许兰毛癣菌、犁头霉以及毛色二孢菌。
[0012]本专利技术还公开了一种防治人体病原真菌感染上的药物和一种防治耳念珠菌感染上的药物，其活性成分均为如上所述的贝莱斯芽孢杆菌NC
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B4。
[0013]本专利技术还公开了一种如上所述的贝莱斯芽孢杆菌NC
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B4的筛选方法，包括以下步骤：
[0014]S1：采集植物根际土壤，用LB培养基进行分离，得到分离菌株；
[0015]S2：然后对分离菌株进行平板拮抗试验，得到对人体病原真菌有拮抗效果的初筛细菌；
[0016]S3：对初筛细菌通过平板打孔拮抗试验，测量抑菌圈大小，进一步筛选、鉴定，得到贝莱斯芽孢杆菌NC
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B4细菌。
[0017]进一步地，所述贝莱斯芽孢杆菌NC
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B4的菌株细胞杆状，菌落呈圆形、乳白色、不透明、表面干燥皱褶、边缘不整齐、中央凹陷。
[0018]本专利技术的有益效果是：本专利技术提供了一种Bacillus velezensis NC
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B4人体病原真菌感染药物上的应用，尤其是在防治耳念珠菌感染的应用。本专利技术针对目前耳念珠菌感染缺少高效安全的药物治疗，加之耳念珠菌对抗真菌药物易产生耐药性的问题，通过对耳念珠菌拮抗菌的分离筛选及其防效试验，分离筛选出对耳念珠菌有拮抗作用的菌株，在此基础上可以进行进一步的抗菌活性物质分离鉴定及临床试验，借以开发出一种新型生防微生物因子，对减少大量抗生素的使用，减轻环境污染和耐药菌产生具有重要意义。
附图说明
[0019]图1是本专利技术中菌株NC
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B4及其发酵液对耳念珠菌的拮抗效果示意图；
[0020]图2是本专利技术中菌株NC
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B4的菌落形态图；
[0021]图3是本专利技术中菌株NC
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B4的显微形态图；
[0022]图4是本专利技术中菌株NC
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B4的系统发育树；
[0023]图5是本专利技术中菌株NC
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B4及其发酵液对细胞毒性结果图；
[0024]图6是本专利技术中菌株NC
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B4的16S rDNA、gyrA、rpoB基因核酸电泳图。
具体实施方式
[0025]通过以下实施例对本专利技术作更详细说明，但以下实施例仅是说明性的，本专利技术并不受这些实施例的限制。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为常规方法。
[0026]实施例1：细菌进行分离纯化：
[0027]1、培养基
[0028]LB培养基：Tryptone(胰蛋白胨)10g，Yeast extract 5g，NaCl 10g，琼脂15g，H2O 1000ml，PH 7.0
‑
7.2，121℃灭菌20分钟。
[0029]2、实验步骤
[0030]2.1培养基配制
[0031]配制如1所述的LB琼脂培养基，制备细菌培养基。
[0032]2.2样品采集
[0033]从南昌市梅岭公园采集植物根际土壤，装入袋中并作好记录。
[0034]2.3将土壤磨碎，并制备成悬液
[0035]将土壤磨成小块，切碎重悬于无菌水中，按照1:10(g/ml)浓度的土壤稀释液(10
‑1)。取上清液并10倍梯度稀释(10
‑2、10
‑3、10
‑4、10
‑5)备用。
[0036]2.4细菌分离
[0037]选择上述10
‑2、10
‑3、10
‑4和10
‑5四个浓度各0.1ml，分别涂布到准备好的LB固体培养基平板。将接种完的培养皿倒置，35℃恒温培养，设置三个重复。尽可能挑取不同形态的单克隆。
[0038]2.5结果
[0039]按上述方法分离得到细菌200株。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种贝莱斯芽孢杆菌NC
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B4，其特征在于，分类命名为贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis，已于2022年05月19日保存于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC NO.24929。2.根据权利要求1所述的一种贝莱斯芽孢杆菌NC
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B4，其特征在于，其上的16S rDNA、gyrA、rpoB基因的序列分别如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3所示。3.一种如权利要求1或2所述的贝莱斯芽孢杆菌NC
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B4在制备防治人体病原真菌感染药物上的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述人体病原真菌为耳念珠菌、白色念珠菌、隐球菌、丝状真菌。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述丝状真菌为小克银汉霉、许兰毛癣菌、犁头霉以及毛色二孢菌。6.一种防治人体病原真菌感染上...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨春喜，崔朝宇，张震，
申请(专利权)人：江西省人民医院，
类型：发明
国别省市：