一种心肌细胞及心肌炎症细胞外泌体提取方法及其应用技术

本发明专利技术属于生物医学技术领域，具体涉及一种心肌细胞及心肌炎症细胞外泌体提取方法及其应用。本发明专利技术通过采用施加脂多糖(或脂多糖联合脂联素)的方式并对诱导条件进行筛选优化，从而成功诱导心肌细胞转化为心肌炎症细胞，同时采用差速离心法和超滤法相结合的方式提取细胞培养上清中的外泌体，得到的外泌体提取物具有产量大，纯度高等优点。同时上述技术方案通过优化的脂联素添加浓度和添加时间进一步培养心肌细胞及心肌炎症细胞，使得外泌体的产量和纯度可以获得明显的提高。从而方便后续外泌体内容物以及功能研究的进行，并提供相应的外泌体鉴定方法，为后续研究外泌体在心肌炎症中的作用机制提供方法学基础，因此具有良好的实际应用之价值。好的实际应用之价值。好的实际应用之价值。

【技术实现步骤摘要】
一种心肌细胞及心肌炎症细胞外泌体提取方法及其应用


[0001]本专利技术属于生物医学
，具体涉及一种心肌细胞及心肌炎症细胞外泌体提取方法及其应用。

技术介绍

[0002]公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
[0003]外泌体是一种由活细胞产生的直径40
‑
160nm，具有脂质双层膜结构的细胞外囊泡，可广泛存在于多种体液及细胞培养上清中。外泌体内含有核酸、蛋白质及脂质等多种生物活性物质，在细胞间通讯中发挥重要作用。已有研究表明，在多种疾病的病理生理过程中，外泌体的含量及其内容物会有所变化，以促进或抑制疾病进展。近年来，随着对外泌体研究的不断深入，外泌体在动脉粥样硬化、急性心肌梗死、心力衰竭等心血管疾病中的抗炎、改善心室重构、促进血管新生等作用受到越来越多学者的重视。
[0004]心肌炎是由多种病因引起的可危及生命的心肌炎症，可导致心功能障碍以及心律失常等严重后果，但目前心肌炎的发病机制尚不本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种心肌细胞及心肌炎症细胞外泌体提取方法，其特征在于，所述方法包括：S1、培养心肌细胞并诱导产生心肌炎症细胞；其中，诱导产生心肌炎症细胞的方法包括加入10
‑
20μg/ml脂多糖培养24
‑
48h诱导产生心肌炎症细胞；并在脂多糖加入后的0
‑
8小时加入10
‑
25ng/ml的脂联素；S2、诱导成功心肌炎症细胞继续培养并收集培养基，离心，得上清液I；S3、将步骤S2获得的上清液I进行高速离心，收集得上清液II；S4、将S3中收集的上清液II经滤器过滤至超速离心管中，超速离心，离心后所得沉淀即为外泌体。2.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤S1中，所述心肌细胞为AC16心肌细胞。3.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤S1具体方法包括：培养心肌细胞的具体方法包括：选用含有10％胎牛血清的完全培养基对心肌细胞进行培养，其培养条件为：30
‑
40℃，3
‑
8％CO2，当细胞生长密度达50％时，更换无血清的培养基继续培养8
‑
12小时，加入10
‑
20μg/ml脂多糖培养24
‑
48h诱导产生心肌炎症细胞；并在脂多糖加入后的4
‑
6小时加入10
‑
25ng/ml的脂联素。4.如权利要求3所述的提取方法，其特征在于，所述胎牛血清为去除外泌体的胎牛血清。5.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤S2中，具体离心方法包括：将收集到的培养基在低温200
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩波，马孟洁，张丽，贾海琳，
申请(专利权)人：山东第一医科大学附属省立医院山东省立医院，
类型：发明
国别省市：