一种成年番鸭心肌细胞分离和原代培养的方法技术

本发明专利技术属于细胞培养技术领域，具体涉及一种成年番鸭心肌细胞分离和原代培养的方法。本发明专利技术培养方法中，成年番鸭的心肌细胞分离、纯化操作步骤简单，细胞贴壁快、存活率高，活性好，细胞培养体系稳定性好，是一种较为理想的成年番鸭原代心肌细胞培养方法，基本可以满足医学、生物学、药学和生命科学各研究领域对番鸭心肌细胞相关实验研究的要求，适宜在一般实验室进行推广应用。验室进行推广应用。验室进行推广应用。

【技术实现步骤摘要】
一种成年番鸭心肌细胞分离和原代培养的方法


[0001]本专利技术属于细胞培养
，具体地说，是一种成年番鸭心肌细胞分离和原代培养的方法。

技术介绍

[0002]在人类医学中培养心肌细胞是进行心血管疾病的研究的主要技术手段。心肌细胞在心肌肥大、心脏损伤、心力衰竭等心脏类疾病研究治疗中的作用至关重要，但近些年研究表明，心肌成纤维细胞和心肌细胞非常相似，对于心脏疾病的治疗或许会带来帮助。随着科学技术的发展，对禽类心脏疾病的研究也在不断深入，也不断有以心肌细胞、心肌成纤维细胞为对象来进行项目开展。家禽心肌与哺乳动物心肌组织存在较大差别，而且与哺乳动物及啮齿动物相比，禽类动物普遍体温较高，在酶消化过程中，更难把控消化酶的比例、消化温度及消化时间，很容易造成组织破碎但细胞未能成功游离出来，这也提高了禽类动物细胞原代分离的难度。以鸡胚或鸭胚为原材料进行心肌细胞、心肌成纤维细胞的分离培养方法比较成熟，日龄较小的难以分清组织类型，分离获取的细胞为胚胎成纤维细胞；日龄相对较大的，可分清组织类型，胚胎来源组织分化程度较低，分离难度小，易获得单细胞。但一些禽类疾病本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种成年番鸭心肌细胞分离和原代培养的方法，它包括如下步骤：S1成年番鸭心脏组织采集和前处理：无菌剪剪下成年番鸭心脏组织心室部分2g组织，于70％或75％酒精中浸泡5
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10s，再于含2％双抗的1
×
PBS中清洗3次，无菌剪剪碎；S2酶消化法获取成年番鸭心肌细胞：将S1中剪碎的组织置于50ml离心管内，加入约3
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5倍体积的混合消化液，37℃水浴消化30min
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90min，期间多次晃动离心管，使组织块充分消化；用含血清的α
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MEM心肌细胞完全培养液终止消化，静置10min；将消化后的溶液依次过200和400目细胞筛，悬液1000rpm离心10min，再经α
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MEM基础培养基重悬清洗一次，1000rpm离心10min；再放入1mLα
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MEM心肌细胞完全培养液重悬后，收集所有的细胞混悬液接种于T25培养瓶于37℃、5％CO2培养箱贴壁培养，24h后将未贴壁细胞收集重新接种于新的培养瓶去除成纤维细胞，即可得到成年番鸭原代心肌细胞。2.根据权利要求1所述的成年番鸭心肌细胞分离和原代培养的方法，其特征在于：S2中所述的α
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MEM心肌细胞完全培养液为10
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20％FBS、0.5
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2％MEM NEAA。3.根据权利要求2所述的成年番鸭心肌细胞分离和原代培养的方法，其特征在于：S2中所述的α
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MEM心肌细胞完全培养液还包括0.5
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2％丙酮酸钠、0.5
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2％谷氨酰胺、10
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30ng/ml EGF、10
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30ng/ml FGF、...

【专利技术属性】
技术研发人员：张树润，张亚平，吴汝念，尹婷婷，李锦秀，
申请(专利权)人：中国科学院昆明动物研究所，
类型：发明
国别省市：