一株用于防治宠物犬细菌性腹泻的解淀粉芽孢杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术涉及功能微生物筛选与应用技术领域，具体提供了一种新的解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）及其在防治宠物犬细菌性腹泻中的应用。所述解淀粉芽孢杆菌的保藏号为CCTCC NO：M20221236。所述解淀粉芽孢杆菌对胃肠道环境耐受性强，能显著抑制大肠杆菌、沙门氏菌等致病菌的生长，可广泛用于宠物饲料的生产，情景广阔。情景广阔。

【技术实现步骤摘要】
一株用于防治宠物犬细菌性腹泻的解淀粉芽孢杆菌及其应用


[0001]本专利技术属于益生菌筛选与应用
，具体涉及一种用于防治宠物犬细菌性腹泻的解淀粉芽孢杆菌及其应用。

技术介绍

[0002]近年来，随着我国经济的不断发展及人们精神生活水平的提高，宠物市场呈现蓬勃发展的趋势。胃肠道疾病是宠物的常发病之一，腹泻是胃肠道疾病最常见的临床症状。流行病学调查显示在患胃肠道疾病的犬猫当中，有腹泻症状的分别占35.9%和43.0%，并且犬猫腹泻率最高可占所有宠物腹泻的93.5%。致病菌是导致宠物腹泻的主要原因之一，通过致病菌分泌细菌毒素而引起肠道上皮稳态紊乱。导致宠物腹泻的致病菌有很多，包括弯曲杆菌、肠致病性大肠杆菌、沙门菌和艰难梭菌等。
[0003]程度轻微的细菌性腹泻，一般可以通过饮食控制来自我恢复。严重感染的宠物通常需要进一步的评估，如粪便涂片镜检和细菌分离培养。在完成致病菌的分离鉴定后，通常选择性使用抗菌药进行治疗，从短期来看，抗菌药具有较好的治疗效果，但停药后腹泻往往会复发，特别是使用广谱的抗菌药，出现抗菌药相关性腹泻。与此同时，其他治疗方法如疫苗及噬菌体在宠物上尚未有产品上市，而益生菌在治疗细菌性腹泻方面具有良好效果。
[0004]益生菌长期以来一直作为宠物腹泻的治疗或补充治疗制剂，根据不同属、物种、菌株和剂量的微生物的试验组合分析得出，益生菌可以缩短急性腹泻的持续时间。益生菌能够帮助宠物抵御致病菌并缓解细菌性腹泻的研究已较为明确，但其作用机制有多种且较为复杂，主要分为3大类，分别是直接拮抗、免疫调节和排斥作用。（1）拮抗作用：益生菌通过杀死或抑制致病菌以限制感染，或下调致病所需的黏附素或毒素等毒力因子的表达来发挥拮抗作用。（2）免疫调节作用：益生菌与宿主免疫系统相互作用，从而提高机体的免疫力以抵御致病菌。（3）排斥作用：益生菌与致病菌竞争结合位点或改变肠道微环境、调节肠道菌群、改善肠道屏障功能，从而限制致病菌附着、进入或易位。
[0005]如今，益生菌制剂在国内宠物市场兴起，用来调节宠物胃肠道健康，促进食物消化吸收，预防及控制宠物呕吐和腹泻等。例如，G
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Gallego等研究表明腹泻犬喂食含有3种犬源益生菌(发酵乳杆菌VET 9A、鼠李糖乳杆菌VET 16A、植物乳杆菌VET 14A)的酸奶，可改善犬的食欲、腹泻状况，减少呕吐次数，降低腹泻犬粪便中致病菌的数量。Torres
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Henderson等给猫喂食粪肠球菌SF68后，可以维持猫肠道的微生物多样性，明显缓解腹泻症状。
[0006]目前，益生菌已广泛用于预防和治疗宠物细菌性腹泻，其具有抗菌效果好、提高宿主免疫力等优点，在未来的研发中越发受到重视，但益生菌的筛选和应用仍存在许多问题，筛选出安全、有效的益生菌菌株仍是研发的重点。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的是提供一种新的解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）
及其在防治宠物犬细菌性腹泻中的应用。所述解淀粉芽孢杆菌对胃肠道环境耐受性强，能显著抑制大肠杆菌、沙门氏菌等致病菌的生长，可广泛用于宠物细菌性腹泻的预防或治疗。
[0008]本专利技术所提供的解淀粉芽孢杆菌，为解淀粉芽孢杆菌VB2693（Bacillus amyloliquefaciens VB2693）株，已于2022年8月4日保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏号为CCTCC NO：M20221236。
[0009]本专利技术所提供的解淀粉芽孢杆菌VB2693株，其16s rRNA序列为SEQ ID NO：1。
[0010]本专利技术所提供的解淀粉芽孢杆菌VB2693株，其MALDI
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TOF
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MS蛋白质指纹图谱如图2所示。
[0011]本专利技术所提供的解淀粉芽孢杆菌VB2693株在饲料生产中的应用。
[0012]本专利技术所提供的解淀粉芽孢杆菌VB2693株在制备具有预防或治疗细菌性腹泻功能的制品中的应用。
[0013]所述的细菌为大肠杆菌或沙门氏菌。
[0014]所述的制品，为食品、保健品或药品。
[0015]本专利技术还提供了一种宠物饲料，包含解淀粉芽孢杆菌VB2693株和/或其发酵产物。
[0016]本专利技术筛选获得的解淀粉芽孢杆菌VB2693安全性良好，对大肠杆菌、沙门氏菌、鸡源产气荚膜梭菌和肺炎克雷伯菌均具有显著的抑制作用，其中对大肠杆菌和鸡源产气荚膜梭菌的抑菌作用最强，抑菌圈直径达到21mm和23mm。攻毒试验结果显示，解淀粉芽孢杆菌VB2693能够显著降低攻毒幼犬的腹泻率，对幼犬具有明显的保护作用。
[0017]所述解淀粉芽孢杆菌VB2693具有较高的产蛋白酶和吲哚乙酸（IAA）能力，其发酵上清液中蛋白酶活力高达820 U/ml，吲哚乙酸的含量高达89.21mg/L取得了意料不到的技术效果。
[0018]所述解淀粉芽孢杆菌VB2693对酸性和含胆盐环境具有很强的耐受性，其中，在pH 2.0条件下处理2h后，存活率为36.9%，在0.1%~0.5%的胆盐中存活率为69.2%~89.6%，效果显著。
[0019]本专利技术提供的解淀粉芽孢杆菌VB2693可广泛用于制备预防或治疗宠物细菌性腹泻的制品，市场前景广阔。
附图说明
[0020]图1为VB2693菌株的菌落形态图；图2为VB2693菌株的蛋白质谱峰图。
具体实施方式
[0021]本专利技术所述筛选方法并不局限于实施例所述，已知的能够达到筛选目的的方法均可以，实施例的筛选说明只是对本专利技术的说明，并不是对本专利技术保护范围的限制。在不背离本专利技术精神和实质的情况下，对本专利技术方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本专利技术的范围。
[0022]下面结合具体实施例对本专利技术做详细的描述。
[0023]实施例1 菌株的分离与筛选1. 样品来源：
宠物粪便15份。
[0024]2. 菌株初筛分离：称取粪便样品1g置于9mL无菌生理盐水中，在30℃，200rpm，处理10min，得到菌悬液；将菌悬液置于80℃水浴锅中，处理10min，取出，迅速冷却；将处理过菌悬液以10倍梯度稀释至合适浓度，取100uL于营养琼脂平板上，涂抹均匀，37℃培养16
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24h；挑取营养琼脂平板上已培养好的不同单菌落，进一步划线3
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4次，共分离了27株芽孢杆菌，分别命名为YB01、YB02、
……
、YB16、YB17、
……
YB26、YB27。
[0025]3. 菌株复筛：选取引起宠物腹泻的常见致病菌大肠杆菌，通过抑菌圈直径大小(cm)评价所分离的芽孢杆菌对大肠杆菌的抑菌能力。
[0026]3.1 供试菌液的准备将分离的芽孢杆菌先在平板上培养，后取1接种环接种到营养肉汤培养基中，37 ℃，220 r/min培养16 h，制备成供试菌液，菌量为108~10
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种解淀粉芽孢杆菌，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌的保藏号为CCTCC NO：M20221236。2.如权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌的16s rRNA序列为SEQ ID NO：1。3.如权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌的MALDI
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TOF
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MS蛋白质指纹图谱如图2所示...

【专利技术属性】
技术研发人员：周英俊，孙文丽，凌红丽，陈琳，李青，唐融志，
申请(专利权)人：山东蔚蓝生物科技有限公司青岛蔚蓝生物集团有限公司，
类型：发明
国别省市：