在癌细胞中具有增强复制的HSV载体制造技术

溶瘤性HSV载体，在影响病毒复制效率的病毒基因的调控区中包含NF

【技术实现步骤摘要】
在癌细胞中具有增强复制的HSV载体
[0001]相关申请的引用
[0002]本申请基于35U.S.C.
§
119(e)要求于2016年4月29日提交的美国临时专利申请 第62/329,877号的优先权，该申请的全部内容以引用方式结合于本文。


[0003]本专利申请总体上涉及HSV癌细胞中的增强复制。

技术介绍

[0004]除了通过病毒直接杀死细胞之外，溶瘤性病毒(OV)已经成为一种通过溶瘤效 应特异性破坏癌细胞的治疗方案(therapeutic arsenal)，其中溶瘤效应是一种特征在于 通过病毒裂解复制的过程实现癌细胞裂解的杀伤机制。在各种OV中，基于OV的1 型单纯疱疹病毒(“HSV
‑
1”)是最先进的，例如，美国FDA已经批准了疱疹病毒系 OV(T
‑
Vec)用于治疗黑素瘤。HSV载体的代表性实例包括美国专利第7,223,593号、 第7,537,924号、第7,063,835号、第7,063,851号、第7,118,755号、第8,277,818号 和第8,680,068号中所描述的那些。
[0005]本专利技术克服了目前的商业化溶瘤性病毒的缺点，并且进一步提供了另外的出乎意 料的益处。

技术实现思路

[0006]简言之，本专利技术提供了在癌细胞中具有增强复制的HSV载体。在一种实施方式 中，所提供的HSV载体在影响病毒复制效率的病毒基因的调控区中包含NF
‑
κB应答 元件。其他的权利要求涉及在影响病毒复制效率的病毒基因的调控区中包含 Oct3/4
‑
SOX2应答元件的HSV载体。具有这些应答元件之一或二者的病毒基因包括 US11及编码ICP4、ICP27和ICP8的基因。
[0007]其他的权利要求涉及载体，其中，NF
‑
κB应答元件包含GGGAATTTCC(SEQ IDNO:1)或其变体的1
‑
15个串联序列，其中，该变体与该序列具有至少一个核苷酸差 异。串联序列可以完全相同，或者是相同和不同序列或全部不同序列的混合。其他权 利要求涉及载体，其中，OCT3/4
‑
SOX2应答元件包含 CTACAGAGGTGCATATTAACAGAGCTTTTGTCCTGGAGA(SEQ ID NO:2)或其变 体，其中，该变体具有至少90％的相同核苷酸。
[0008]在其他权利要求中，HSV载体可以进一步包含编码用于癌症治疗的治疗性物质 的序列。该治疗性物质可以是IL12、IL15、OX40L、PDL
‑
1阻断剂或PD
‑
1阻断剂。 在2016年12月9日提交的美国专利申请第15/374,893号中描述了适合的阻断剂的 一个实例，将其全文结合于本文作为参考。
[0009]其他权利要求涉及治疗癌症的方法，所述方法包括向患有癌症或疑似患有癌症的 患者施用本文中所述的HSV载体。在其他权利要求中，提供了处理癌症干细胞和治 疗难治性癌症的方法，所述方法包括向患有难治性癌症或具有癌症干细胞的癌症的患 者施用本文中所述的HSV载体。在其他权利要求中，癌症为结肠癌、肺癌、乳腺癌、 前列腺癌、脑癌或
膀胱癌。
[0010]在
技术实现思路
部分中已经简要地介绍了某些概念，这些概念将在下文的具体实施方式部分中进一步详细描述。除非另外明确陈述，
技术实现思路
部分既不是意在确定本文要求保护主题的关键或必须特征，也不是意在限制本文要求保护主题的范围。
[0011]以下描述中阐述了一种或多种实施方式的细节。结合一种示例性实施方式说明或描述的特征可以与其他实施方式的特征组合。因此，本文中所述的各种实施方式中任一种能够与其他的实施方式组合提供。如果需要采用如本文中所述的各不同专利、申请和出版物的概念来提供进一步的实施方式，则可以对实施方式的方面进行修改。根据说明书、附图和权利要求书将使得其他特征、目的和优势变得显而易见。
附图说明
[0012]根据附图和各种实施方式的如下具体描述将使得本文披露内容的示例性特征、其性质和各种优势变得显而易见。参照附图描述了非限制性和非穷尽的实施方式，其中，除非另外明确指出，在不同视图中相似的标识或标号代表相似的部分。附图中元件的尺寸和相对位置不一定是按比例绘制的。例如，为了改善绘图清晰度会选择、放大和定位各元件的形状。选择如所绘制的元件的特定形状以易于在附图中进行识别。下文中参照附图描述了一种或多种实施方式，其中：
[0013]图1A
‑
图1B是示例性oHSV载体的示意图。
[0014]图2是示出了在存在TNFα的情况下，在ICP4的调控区中携带NF
‑
κB应答元件的示例性oHSV
‑
1载体的增强的病毒产生的图示。
[0015]图3A
‑
图3B表示OS
‑
ICP27的示意图和序列(SEQIDNO:3)。
[0016]图4A
‑
图4B表示NO
‑
ICP27
‑
145的示意图和序列(SEQIDNO:4)。
[0017]图5A
‑
图5B表示NO
‑
ICP27
‑
99的示意图和序列(SEQIDNO:5)。
[0018]图6示出了病毒hVG161的经修饰的ICP34.5区(SEQIDNO:6)的示意图。
[0019]图7示出了病毒hVG161的经修饰的UL54启动子区(SEQIDNO:7)的示意图。
[0020]图8示出了插入PD
‑
L1阻断剂(SEQIDNO:8)的hVG161病毒基因组的示意图。
[0021]图9示出了经修饰的TR区的hVG161(SEQIDNO:9)的示意图。
[0022]图10A
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图10K示出了在ICP27启动子/调控区中包含突变的病毒的测定结果。
[0023]图11A
‑
图11C示出了ELISA和蛋白质印记数据forIL
‑
12表达followinghVG161感染of细胞.
[0024]图12A
‑
图12C示出了在在细胞感染hVG161之后，IL
‑
15表达的ELISA和蛋白质印记数据。
[0025]图13A
‑
图13C示出了在细胞感染hVG161之后，IgG4表达的ELISA和蛋白质印记数据。
[0026]图14A
‑
图14E示出了感染了VG161
‑
PLBh和VG161
‑
15h的细胞的结果。
[0027]图15A
‑
图15D示出了各种构建体的r体外测定的结果。图15A
‑
图15B示出了用携带IL
‑
12、IL
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种HSV载体，在影响病毒复制效率的病毒基因的调控区中包含NF
‑
κB应答元件。2.权利要求1所述的载体，其中，所述病毒基因编码ICP4、ICP27、US11或ICP8。3.权利要求1所述的载体，其中，所述NF
‑
κB应答元件包含表1中GGGAATTTCC或变体的1
‑
15个串联序列。4.权利要求3所述的载体，其中，所述串联序列完全相同，或者是相同和不同序列或全部不同序列的混合。5.权利要求3所述的载体，其中，所述NF
‑
κB应答元件具有序列GGGAATTTCCGGGGACTTTCCGGGAATTTCCGGGGACTTTCCGGGAATTTCC...

【专利技术属性】
技术研发人员：威廉，
申请(专利权)人：复诺健生物科技加拿大有限公司，
类型：发明
国别省市：