原核蛋白表达用菌感受态细胞的制备方法技术

本申请涉及原核蛋白表达用菌感受态细胞的制备方法，该方法包括如下步骤：S1.将原核蛋白表达用菌于培养基中培养至OD

【技术实现步骤摘要】
原核蛋白表达用菌感受态细胞的制备方法


[0001]本申请属于生物
，具体涉及原核蛋白表达用菌感受态细胞的制备方法。

技术介绍

[0002]生物体内的许多蛋白质的含量都非常少，为了获得大量的目的蛋白，可以通过基因工程技术将编码蛋白的核酸序列导入到某个宿主细胞，使其大量表达。蛋白表达使用最多的是原核蛋白表达系统，其中大肠杆菌是基因工程中采用最多的原核表达宿主，那么在进行大肠杆菌蛋白表达转化时，需要用到大肠杆菌表达感受态细胞进行转化诱导。
[0003]感受态细胞的定义为：利用理化方法诱导宿主细胞(一般为大肠杆菌细胞)，能吸收周围环境中的DNA分子，使其处于最适摄取和容纳外来DNA的生理状态叫做感受态细胞。感受态细胞在基因工程中扮演着很重要的角色。根据实验目的需要选择一款合适的感受态细胞。大肠杆菌BL21(DE3)菌株是原核蛋白表达实验中比较重要的宿主菌，它能满足大部分的蛋白表达实验，主要是非毒性蛋白的表达，在整个基因工程中运用的比较多。
[0004]目前，制备感受态细胞的方法主要分为两大类即化学方法和物理方法，化学方法就是用各种本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种原核蛋白表达用菌感受态细胞的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.将原核蛋白表达用菌于培养基中培养至OD
600
为0.4～0.5；S2.将菌液冰浴；离心，获得沉淀；S3.向沉淀中加入缓冲液进行悬浮，冰浴，离心，获得沉淀；S4.向沉淀中加入缓冲液进行悬浮，冰浴，加入添加剂，冰浴，获得感受态细胞；其中，所述缓冲液包括氯化钙、氯化锰、氯化镁、醋酸钾和甘油，所述添加剂为PIPES。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述缓冲液包括0.1M～0.5M氯化钙、0.1M～0.5M氯化锰、0.1M～0.2M氯化镁、1.0M～2.0M醋酸钾和2.0M～3.0M甘油。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述添加剂为0.2M～0.5M PIPES。4.根据权利要求1～3任一项所述的制备方法，其特征在于，所述冰浴时间为10min～30min。5.根据权利要求1～3任一项...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜军，王媛媛，曹文刚，宋辉，
申请(专利权)人：湖北擎科生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：