一种无乳糖添加的高效生产乳酰-N-新四糖的基因工程菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种无乳糖添加的高效生产乳酰

【技术实现步骤摘要】
一种无乳糖添加的高效生产乳酰
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N
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新四糖的基因工程菌及其应用


[0001]本专利技术涉及一种无乳糖添加的高效生产乳酰
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N
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新四糖的基因工程菌及其应用，属于代谢工程和食品发酵领域。

技术介绍

[0002]人乳寡糖(HMOs)是人乳中仅次于乳糖和脂肪的第三大固体组分，母乳中的寡糖含量为5
‑
15g/L，是牛乳的100
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300倍。近年来，随着食品工业的快速发展，对于功能寡糖的开发成为了国际生物
的重要课题，寡糖产业现已成为一个应用于食品、饲料、医药、化工等行业的重要新兴产业。
[0003]乳酰
‑
N
‑
新四糖(Lacto
‑
N
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neotetraose，LNnT)是人乳寡糖中重要的成分之一，属于非岩藻糖基化的中性母乳寡糖，在母乳中的含量约为0.5g/L，具有增强人体免疫力、调节肠道菌群和促进细胞成熟等重要的生物学功能。已被欧洲食品安全局(EFSA)、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主进行基因编辑，所述重组大肠杆菌为(a)或(b)：(a)敲除基因组上β
‑
半乳糖苷酶基因lacZ和UDP
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N
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乙酰氨基葡萄糖
‑2‑
差向异构酶基因wecB；敲除基因组上葡萄糖特异性转运蛋白酶EⅡABC
Glc
组件编码基因crr和ptsG，并在crr和ptsG位点分别整合了setA和glf；敲除基因组上泛醌依赖性丙酮酸脱氢酶基因poxB，并在该位点整合了β
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1,3
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N
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乙酰氨基葡萄糖氨基转移酶基因lgtA；敲除基因组上磷酸乙酰转移酶和乙酸激酶基因簇pta
‑
ackA，并在该位点整合了谷氨酰胺
‑
果糖
‑6‑
磷酸氨基转移酶基因glmS；敲除基因组上甲酸裂解酶基因pflB，并在该位点整合了N
‑
乙酰氨基葡萄糖
‑1‑
磷酸尿酸基转移酶基因glmU；敲除基因组上UDP
‑
乳糖
‑6‑
脱氢酶基因ugd，并在该位点整合了尿苷二磷酸葡萄糖
‑4‑
差向异构酶基因galE；敲除基因组上乳糖激酶基因glk，并在该位点整合了来源于脑膜炎奈瑟球菌的β
‑
1,4
‑
半乳糖基转移酶基因NmlgtB；(b)在(a)的基础上，游离表达基因glmS、galE、lgtA和NmlgtB。2.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌以pETDuet
‑
1质粒表达基因glmS和galE，以pRSFDuet
‑
1质粒表达基因lgtA和NmlgtB。3.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述β
‑
半乳糖苷酶基因lacZ的NCBI登录号为NP_414878.1，UDP
‑
N
‑
乙酰氨基葡萄糖
‑2‑
差向异构酶基因wecB的NCBI登录号为YP_026253.1，所述葡萄糖特异性转运蛋白酶EⅡABC
Glc
组件编码基因包括crr和ptsG，crr的Gene ID为946880，ptsG的Gene ID为945651。4.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述葡萄糖转运蛋白基因glf来源于运动发酵单胞菌，糖外排转运蛋白基因setA来源于伯氏耶尔森氏菌ATCC 43970，其核苷酸序列分别为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2，所述β
‑
1,3
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：张涛，骆叶姣，李梦丽，江波，胡苗苗，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：