点蜂缘蝽分泌蛋白RpSP4043及其在大豆“症青”防控中的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种点蜂缘蝽分泌蛋白基因RpSP4043的dsRNA合成以及该基因在大豆“症青”病害防控中的应用。病害防控中的应用。病害防控中的应用。

【技术实现步骤摘要】
点蜂缘蝽分泌蛋白RpSP4043及其在大豆“症青”防控中的应用


[0001]本专利技术涉及基因工程领域，涉及一种点蜂缘蝽分泌蛋白RpSP4043的dsRNA合成、dsRNA导入点蜂缘蝽体内以及该基因在防治大豆“症青”相关病害中的应用。

技术介绍

[0002]近年来，大豆“症青”在我国各大豆产区呈爆发式出现，在黄淮海地区尤为严重。大豆“症青”具体表现为品种生育期结束，应进入成熟期时，植株茎、叶及豆荚仍滞绿不衰老，荚而不实或籽粒发育不良，形成瘪粒畸形等。
[0003]点蜂缘蝽(Riptortus pedestris)是大豆田间常见的刺吸式害虫，主要通过其刺吸式口器持续刺吸植株和种子汁液来获取养分。点蜂缘蝽的持续取食会导致大豆植株的发育不良甚至死亡，且受到侵害的大豆种子也往往无法正常发育，最终导致大豆的减产。目前点蜂缘蝽的防控以常规农药为主，主要包括：1％甲氨基阿维菌素苯甲酸盐乳油(甲维盐)、2.5％高效氯氟氰菊酯乳油以及50％氟啶虫胺腈水分散粒剂等；然而传统农药的大面积使用不仅造成严重的环境问题，还使得点蜂缘蝽产生了抗药性，更加难以有效防控本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种点蜂缘蝽分泌蛋白RpSP4043基因,其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示或与SEQ ID NO.1具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性的核苷酸或由其组成。2.一种点蜂缘蝽分泌蛋白RpSP4043基因，其序列为SEQ ID NO.8所示的氨基酸或与SEQ ID NO.8所示的氨基酸具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性的氨基酸或由其组成。3.一种RpSP4043基因的克隆方法，步骤包括：(1)取点蜂缘蝽成虫唾液腺，Trizol法提取总RNA，反转录获得cDNA第一条链；(2)以步骤(1)中获得的点蜂缘蝽cDNA为模板，以序列SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的上下游引物进行PCR扩增；(3)将上述扩增获得的基因片段连接克隆载体pBinGFP，转化到大肠杆菌DH5α，在含有卡那霉素的LB固体培养基上培养，获得含有基因片段的单克隆菌落；(4)挑取单克隆菌落在含有卡纳霉素的LB液体培养基中扩大培养，抽提质粒，进行DNA测序，得到含有如SEQ ID NO.1所示序列的Bin
‑
RpSP4043；(5)以Bin
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RpSP4043质粒为模板，利用SEQ ID NO.6所示的上游引物SEQ ID NO.7所示的下游引物进行PCR扩增，获得含有T7启动子的RpSP4043基因片段。4.一种RpSP4043基因的dsRNA...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙宗涛，胡彪，魏中艳，张合红，李雁军，陈剑平，
申请(专利权)人：宁波大学，
类型：发明
国别省市：