表达ORFVF1L蛋白的重组山羊痘病毒及其构建方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种表达ORFV F1L蛋白的重组山羊痘病毒及其构建方法。该病毒构建方法如下：(1)根据山羊痘病毒基因组序列、羊口疮病毒F1L基因开放阅读框序列，以135基因编码区两侧区域DNA片段为左右重组臂，中间插入羊口疮病毒F1L基因编码区以及标记基因gpt、EGFP、早晚期启动子，并且含有loxp位点，构建同源重组供体质粒；(2)利用步骤(1)所得同源重组供体质粒转染细胞，制得表达ORFV F1L蛋白的重组山羊痘病毒。本发明专利技术提供的重组山羊痘病毒不影响山羊痘病毒的体外复制能力，该重组山羊痘病毒所插入的F1L外源基因在机体内随载体病毒的复制而表达，可作为羊痘、羊口疮弱毒疫苗的新方案。疮弱毒疫苗的新方案。疮弱毒疫苗的新方案。

【技术实现步骤摘要】
表达ORFVF1L蛋白的重组山羊痘病毒及其构建方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种表达ORFVF1L蛋白的重组山羊痘病毒及其构建方法。

技术介绍

[0002]羊口疮是由羊口疮病毒(Orf virμs,ORFV)引起的羊急性、热性、接触性传染病，羊口疮病毒对羊群的感染目前尚无针对性药物用于治疗，通常使用抗生素防止进一步的继发或混合感染。因此疫苗接种被认为是预防和控制该病可靠且有效的手段，但当前国内外用于预防羊口疮的疫苗是弱毒疫苗。由于各种原因，目前在我国市场上无口疮弱毒疫苗供应，而弱毒疫苗本身存在毒力返强等缺陷，并且羊口疮病毒基因组广泛的容纳性所造成的同源或非同源基因重组和非必需基因缺失的特殊性，使得羊口疮的临床防控极其困难，研制高效的基因工程疫苗已成为防控羊口疮的必然趋势。
[0003]现有研究报道，通过羊痘病毒全基因测序结合生物信息学分析135基因，该基因与痘病毒属其他病毒的NIL基因的同源性为20
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42％，而N1L基因是痘病毒重要的免疫调节相关因子；羊口疮病毒免疫优势蛋白F1L，具有与肝素结本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.表达ORFV F1L蛋白的重组山羊痘病毒，其特征在于，所述重组山羊痘病毒的135基因位点插入ORFV F1L基因。2.根据权利要求1所述的重组山羊痘病毒，其特征在于，所述重组山羊痘病毒的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。3.用于构建表达ORFV F1L蛋白的重组山羊痘病毒的重组载体，其特征在于，所述重组载体包含左右重组臂、羊口疮病毒F1L基因、标记基因gpt、EGFP、早晚期启动子和loxp位点；所述左右重组臂为135基因编码区两侧区域的DNA片段。4.根据权利要求3所述的重组载体，其特征在于，所述重组载体的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。5.根据权利要求3所述的重组载体，其特征在于，所述135基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述左重组臂的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.4所示，所述右重组臂的核苷酸序列SEQ ID NO.5所示；所述羊口疮病毒F1L基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；所述标记基因gpt的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，所述EGFP的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示，所述早晚期启动子包括如SEQ ID NO.9所示的P7.5早期启动子和如SEQ ID NO.10所示的P11晚期启动子；所述loxp位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示。6.用权利要求3所述的重组载体转染的细胞，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：余远迪，牟豪，许国洋，杨柳，郑华，张素辉，
申请(专利权)人：重庆市畜牧科学院，
类型：发明
国别省市：