一种脆弱拟杆菌灭活菌粉及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种脆弱拟杆菌灭活菌粉及其制备方法。本发明专利技术的灭活菌粉包括脆弱拟杆菌灭活菌；所述脆弱拟杆菌灭活菌的菌体包括完整的细胞形态结构；菌数达到1

【技术实现步骤摘要】
一种脆弱拟杆菌灭活菌粉及其制备方法


[0001]本专利技术涉及脆弱拟杆菌灭活菌粉的制备和应用技术，特别是一种脆弱拟杆菌灭活菌粉及其制备方法。

技术介绍

[0002]脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)是革兰氏阴性厌氧细菌中拟杆菌属的成员，属于拟杆菌门，完全不同于厚壁菌门的双歧杆菌、乳酸菌等。拟杆菌属有25个菌种，仅来自人类的有10个菌种，仅来自动物的有10个菌种，来自人和动物的有5个菌种。脆弱拟杆菌是一种专性厌氧细菌，依据能否合成、分泌脆弱拟杆菌肠毒素(BFT)可将其分为产肠毒素型脆弱拟杆菌(Enterotoxigenic Bacteroides fragilis,ETBF)和非产肠毒素型脆弱拟杆菌(Nontoxigenic Bacteroides fragilis，NTBF)。脆弱拟杆菌作为人及动物肠道正常菌群的一部分，主要存在于结肠中。此外，呼吸道、胃肠道及泌尿生殖道粘膜也可定植生长。
[0003]已有文献报道了NTBF作为益生菌的可能性(Sun F,Zhang Q,Zhao J,Zhang H,Zhai Q,Chen W.A potential species of next
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generation probiotics？The dark and light sides of Bacteroides fragilis in health.Food Res Int.2019Dec；126:108590.doi:10.1016/j.foodres.2019.108590.Epub 2019 Jul 27.PMID:31732047.)。但是，由于益生菌的活菌特性，在它的使用中，存在以下副作用：1)在危重病人、老人及新生儿，特别是早产儿中存在易位到局部组织和血液的风险；2)活菌可能获得/转移抗生素抗性基因和/或毒力基因；3)活菌对环境条件要求严格，易在提取、运输和储存中失活，且不易标准化；4)产品质地随活菌状态改变，稳定性和适口性波动。
[0004]针对上述问题，副益生菌(Paraprobiotic)应运而生。副益生菌被定义为“无活力的微生物细胞，如果口服或局部使用足够的数量，即可为使用者带来好处”。该定义包括形态不完整的微生物细胞和形态完整的微生物细胞，主流研究观点认为，破碎的微生物细胞能够更好地释放功能分子，因此具有更好的效果；但对于完整的灭活微生物细胞，没有统一的观点能够说明其在某些应用中优于活菌的原因。目前针对副益生菌的研究集中在乳杆菌、双歧杆菌等一代益生菌上，研究方向相对固定。因此，有必要开发新型副益生菌，扩展副益生菌的适应症范围。

技术实现思路

[0005]鉴于以上
技术介绍
，本专利技术提供如下技术方案：
[0006]在第一方面，本专利技术提供了一种脆弱拟杆菌灭活菌粉，其中包括脆弱拟杆菌灭活菌(脆弱拟杆菌的保藏号为CGMCC NO.10685的脆弱拟杆菌ZY
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312)；所述脆弱拟杆菌灭活菌的菌体包括完整的细胞形态结构；菌数达到1
×
10
11
Cell/g以上。
[0007]根据本专利技术的实施方案，所述脆弱拟杆菌灭活菌粉还包括辅料。
[0008]根据本专利技术的实施方案，所述脆弱拟杆菌灭活菌粉中，所述脆弱拟杆菌灭活菌与所述辅料的质量比为1:(0.05
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4)。
[0009]根据本专利技术的实施方案，所述辅料包括赋形剂。优选地，所述辅料在室温下为固体。
[0010]优选地，所述赋形剂包括甘露醇、山梨醇、麦芽糊精、乳糖、氯化钠、麦芽糖、蔗糖、葡萄糖、海藻糖、右旋糖酐、脯氨酸、赖氨酸、丙氨酸、酪蛋白、脱脂乳中的至少一种或两种以上的组合。
[0011]根据本专利技术的实施方案，所述赋形剂中包括氯化钠。优选地，所述赋形剂中，氯化钠的质量分数为0
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25wt％。
[0012]在第二方面，本专利技术还提供脆弱拟杆菌灭活菌粉的制备方法，特别地，通过所述制备方法制得的脆弱拟杆菌灭活菌粉，其菌体细胞结构完整，所述制备方法包括以下步骤：
[0013](1)取脆弱拟杆菌发酵培养；
[0014](2)发酵培养结束后，对发酵液进行离心，收集菌体，按菌体与氯化钠水溶液的重量体积比为1g:(10～30)mL加入氯化钠水溶液洗涤、离心，得到洗涤后菌体；
[0015](3)向洗涤后菌体中加入第一赋形剂溶液混合重悬得到菌体溶液，再进行灭活处理，离心，收集灭活菌泥；
[0016](4)向步骤(3)获得的灭活菌泥中加入第二赋形剂溶液，得灭活菌原液；
[0017](5)将步骤(4)获得的灭活菌原液干燥至残留水分低于5wt％，即得脆弱拟杆菌灭活菌粉。
[0018]根据本专利技术的实施方案，步骤(2)中，发酵液的菌数达到108CFU/mL以上。
[0019]根据本专利技术的实施方案，步骤(2)中，所述氯化钠水溶液的质量浓度为0.6
‑
1.5wt％，优选为0.65
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1.2wt％，更优选为0.8
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1.0wt％，最优选0.85
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0.95wt％，例如为0.9wt％的氯化钠水溶液。
[0020]根据本专利技术的实施方案，步骤(3)中，所述菌体与第一赋形剂溶液的重量体积比为1g:(5～40)mL。
[0021]根据本专利技术的实施方案，步骤(3)中，所述第一赋形剂溶液中，赋形剂的质量分数为4～30wt％，所述赋形剂具有如上所述含义。
[0022]根据本专利技术的实施方案，步骤(3)中，所述第一赋形剂溶液的溶剂选自氯化钠水溶液，其中，所述氯化钠水溶液具有如上所述含义。进一步优选地，所述第一赋形剂溶液的溶剂选自生理盐水，例如0.9wt％氯化钠水溶液。
[0023]根据本专利技术的实施方案，步骤(3)中，所述灭活处理的方法选自热灭活、冷冻灭活或者化学灭活中的至少一种，优选为热灭活。
[0024]优选地，所述热灭活的温度为60～100℃，热灭活的时间为10～60min。
[0025]根据本专利技术的实施方案，步骤(4)中，加入第二赋形剂溶液使灭活菌原液的总重量与步骤(3)灭活前的菌体溶液重量一致。优选地，所述第二赋形剂溶液与所述第一赋形剂溶液相同或不相同。
[0026]根据本专利技术的实施方案，所述第二赋形剂溶液中，赋形剂的质量分数为4～30wt％，所述赋形剂具有如上所述含义。
[0027]优选地，所述第二赋形剂溶液的溶剂选自氯化钠水溶液，其中，所述氯化钠水溶液具有如上所述含义。进一步优选地，所述第一赋形剂溶液的溶剂选自生理盐水，例如0.9wt％氯化钠水溶液。
[0028]示例性地，所述第二赋形剂溶液与所述第一赋形剂溶液相同。
[0029]根据本专利技术的实施方案，步骤(5)中，所述干燥的方式选自真空冷冻干燥和/或喷雾干燥，优选为真空冷冻干燥。
[0030]优选地，所述真空冷冻干燥的条件包括：冷冻温度为
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20～
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种脆弱拟杆菌灭活菌粉，其特征在于，其中包括脆弱拟杆菌灭活菌；所述脆弱拟杆菌灭活菌的菌体包括完整的细胞形态结构；菌数达到1
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11
Cell/g以上。2.根据权利要求1所述的脆弱拟杆菌灭活菌粉，其特征在于，所述脆弱拟杆菌灭活菌粉还包括辅料。优选地，所述脆弱拟杆菌灭活菌粉中，所述脆弱拟杆菌灭活菌与所述辅料的质量比为1:(0.05
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4)。3.根据权利要求1或2所述的脆弱拟杆菌灭活菌粉，其特征在于，所述辅料包括赋形剂。优选地，所述辅料在室温下为固体。优选地，所述赋形剂包括甘露醇、山梨醇、麦芽糊精、乳糖、氯化钠、麦芽糖、蔗糖、葡萄糖、海藻糖、右旋糖酐、脯氨酸、赖氨酸、丙氨酸、酪蛋白、脱脂乳中的至少一种或两种以上的组合。优选地，所述赋形剂中包括氯化钠。优选地，所述赋形剂中，氯化钠的质量分数为0
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25wt％。4.权利要求1
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3任一项所述的脆弱拟杆菌灭活菌粉的制备方法，其特征在于，特别地，通过所述制备方法制得的脆弱拟杆菌灭活菌粉，其菌体细胞结构完整，所述制备方法包括以下步骤：(1)取脆弱拟杆菌发酵培养；(2)发酵培养结束后，对发酵液进行离心，收集菌体，按菌体与氯化钠水溶液的重量体积比为1g:(10～30)mL加入氯化钠水溶液洗涤、离心，得到洗涤后菌体；(3)向洗涤后菌体中加入第一赋形剂溶液混合重悬得到菌体溶液，再进行灭活处理，离心，收集灭活菌泥；(4)向步骤(3)获得的灭活菌泥中加入第二赋形剂溶液，得灭活菌原液；(5)将步骤(4)获得的灭活菌原液干燥至残留水分低于5wt％，即得脆弱拟杆菌灭活菌粉。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，发酵液的菌数达到108CFU/mL以上。优选地，步骤(2)中，所述氯化钠水溶液的质量浓度为0.6
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1.5wt％，优选为0.65
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1.2wt％，更优选为0.8
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【专利技术属性】
技术研发人员：李平，邝高波，吴嘉棋，倪赛，陈佳，
申请(专利权)人：广州知易生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：