一种阿克曼菌后生元固体制剂的制备方法及应用技术

本发明专利技术涉及一种阿克曼菌后生元固体制剂的制备方法及其应用，所述阿克曼菌为嗜黏蛋白阿克曼氏菌Akkermansiamuciniphila，优选为Akkermansiamuciniphila ATCCBAA

【技术实现步骤摘要】
一种阿克曼菌后生元固体制剂的制备方法及应用


[0001]本专利技术涉及微生物领域，尤其涉及一种阿克曼菌后生元固体制剂的制备方法及应用。

技术介绍

[0002]阿克曼菌是最具开发潜力的新一代明星肠道有益细菌。最近发表在PNAS和NatureMedicine等期刊的研究结果显示，阿克曼菌活菌具有显著改善糖脂代谢、治疗肥胖糖尿病、血脂异常等代谢综合征的作用。但对于市场推广应用，阿克曼菌必须得在厌氧环境中维持其基础活性。此外，阿克曼菌活菌对环境温度、氧气、湿度非常敏感，主要的运输方式为低温储存液体阿克曼培养基，且需放置在特质的密闭容器中，以隔绝氧气，这种特殊的运输方式严重阻碍了阿克曼菌的应用。
[0003]为此，国内外科学家对巴氏灭活后的阿克曼菌进行了大量研究，结果发现，灭活后的阿克曼菌(阿克曼菌后生元)依旧具有改善糖脂代谢的功能，且效果较活菌更佳。该研究加速了阿克曼菌的临床转化应用进程。但是，对于阿克曼菌后生元的市场转化应具有低能耗、高效用等特点，而目前的阿克曼菌后生元大多都是以液态形式进行运输，液态运输方式较固态显著增加了运输成本和能耗，此外，液态制剂极易导致污染和霉变致使难以长期保存。为避免污染和霉变的产生，多采取无菌灌装技术以达到延长保存期的效果。该一系列操作虽然可以延长阿克曼菌后生元的保质期，但也进一步的提高了制作成本，不仅需要无菌灌装技术对液态产品进行无菌灌装，而且也提高了保存的条件，即需在低温的条件中保存。

技术实现思路

[0004]为了解决上述现有技术存在的问题，本专利技术的目的在于提供阿克曼菌后生元固体制剂的制备方法及应用，以解决阿克曼菌的液态运输与保存及污染的问题。
[0005]本专利技术的目的通过下述技术方案实现：
[0006]本专利技术的一个目的是提供一种阿克曼菌后生元固体制剂的制备方法，包括以下步骤：
[0007]步骤一：将阿克曼菌原菌液接种至培养基得到A液；
[0008]步骤二：将A液放置在厌氧培养箱培养，将制备好的含阿克曼菌的培养基进行离心，去掉上清，得到A菌泥，将所得的A菌泥放在离心管中，加入含20％甘油的PBS溶液重悬成悬浊液称为B液；
[0009]步骤三：将B液置于65℃
‑
70℃中灭活20分钟
‑
30分钟，待液体冷却后得到C液；
[0010]步骤四：将冷冻保护剂加入C液中彻底混匀得到D液；
[0011]步骤五：将D液放置于培养皿中，摇晃均匀后放入冰箱冷冻得到E液；
[0012]步骤六：将E液放入冷冻干燥机中，得到所述阿克曼菌后生元固体制剂。
[0013]进一步的，所述步骤二中，A液放置在厌氧培养箱培养48小时，待OD600大于0.8时取出；设置离心机转速为6000转/分钟，将制备好的含阿克曼菌的培养基进行离心，去掉上
清，得到A菌泥。
[0014]进一步的，所述步骤四中，按质量百分数计，所述冷冻保护剂为20％脂乳粉，5％甘油和75％PBS溶液组成。
[0015]进一步的，所述步骤五中，所述D液放入
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80℃冰箱冷冻30分钟，得到所述E液。
[0016]进一步的，所述步骤六中，所述冷冻干燥机的程序设置为：在
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40℃至
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50℃，1pa至10pa压力运行48小时
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60小时，然后温度升至20℃运行2小时
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5小时。
[0017]进一步的，所述阿克曼菌为嗜黏蛋白阿克曼氏菌AkkermansiamuciniphilaATCC BAA
‑
835和/或其亚株。
[0018]本专利技术的另一个目的是提供一种根据上述的制备方法得到的阿克曼菌后生元固体制剂在制备预防或治疗代谢性疾病的药物或保健品中的应用。
[0019]进一步的，所述阿克曼菌后生元固体制剂的药物或保健品制成制剂学上可接受的剂型。
[0020]进一步的，所述阿克曼菌后生元固体制剂的药物或保健品还包括药学上可接受的辅料。
[0021]进一步的，所述阿克曼菌后生元固体制剂的药物或保健品的给药方式，包括口服、含服、外敷和/或涂抹。
[0022]本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果：
[0023]本专利技术提供一种阿克曼菌后生元固体制剂的制备方法，通过此法制备的固态产品具有与阿克曼后生元液体制剂和阿克曼新鲜活菌类似的治疗糖代谢疾病的功效，可以显著提高胰岛素敏感性和改善糖耐量等代谢性指标。此外，阿克曼后生元固体制剂以固态形式运输，相较与液态制剂更为便捷与经济，简化了运输方式，同时可以不需要无菌灌装，依旧可以长久保持药物活性和疗效，保质期至少可持续3个月以上。本专利技术方法制备的阿克曼菌后生元固体制剂改变了阿克曼菌保存的物理学状态，同时还保留了其有效成分，为阿克曼菌商品化和临床应用提供基础。
附图说明
[0024]图1是本专利技术实施例1的阿克曼菌后生元固体制剂的成品图；
[0025]图2是本专利技术实施例1阿克曼菌活菌及阿克曼菌后生元固体制剂的细菌计数图；
[0026]图3是本专利技术实施例2的PBS组/AKK活菌组/AKK后生元固体制剂组的三组小鼠的体重参数比较图；
[0027]图4是本专利技术实施例2的PBS组/AKK活菌组/AKK后生元固体制剂组的三组小鼠的糖耐量测试结果图；
[0028]图5是本专利技术实施例2的PBS组/AKK活菌组/AKK后生元固体制剂组的三组小鼠的胰岛素敏感性试验结果图；
[0029]图6是本专利技术实施例2的糖耐量试验曲线下面积图；
[0030]图7是本专利技术实施例2的胰岛素敏感性试验曲线下面积。
具体实施方式
[0031]下面结合实施例对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。
以下实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件、实验室手册中所述的条件或按照制造厂商所建议的条件。除非特别说明，本专利技术所用原材料、试剂等均可通过市售获得。
[0032]实施例1阿克曼菌后生元固体制剂的制备
[0033]使用阿克曼菌特殊培养基对阿克曼菌进行扩大培养。该培养基的组成成分如下：将大豆蛋白胨13g，胰蛋白胨5g，脑心浸出粉17.5g，葡萄糖1g，氯化钠2.8g，磷酸氢二钠1.4g，N
‑
乙酰基葡糖胺5.5g，L
‑
苏氨酸4g，L
‑
半胱氨酸盐0.05g溶于1L超纯水，简单摇晃混匀至无可见物质后，使用0.22μm的除菌滤筛过滤即可得阿克曼菌特殊培养基。按原菌液1:40比例接种至1L的阿克曼菌特殊培养基称为A液，将A液放置在厌氧培养箱培养48小时，待OD600大于0.8时取出。设置离心机转速为6000转/分钟，将制备好的含阿克曼菌的培养基进行离心，去掉上清，得到A菌泥，将1L培养基所得的A菌泥放在同一个离心管，加入4mlPBS溶液(含20％的甘油)重悬成悬浊液称为B液。将B液置于65℃
‑
70℃中灭活2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种阿克曼菌后生元固体制剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：步骤一：将阿克曼菌原菌液接种至培养基得到A液；步骤二：将A液放置在厌氧培养箱培养，将制备好的含阿克曼菌的培养基进行离心，去掉上清，得到A菌泥，将所得的A菌泥放在离心管中，加入含20％甘油的PBS溶液重悬成悬浊液称为B液；步骤三：将B液置于65℃
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70℃中灭活20分钟
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30分钟，待液体冷却后得到C液；步骤四：将冷冻保护剂加入C液中彻底混匀得到D液；步骤五：将D液放置于培养皿中，摇晃均匀后放入冰箱冷冻得到E液；步骤六：将E液放入冷冻干燥机中，得到所述阿克曼菌后生元固体制剂。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤二中，A液放置在厌氧培养箱培养48小时，待OD600大于0.8时取出；设置离心机转速为6000转/分钟，将制备好的含阿克曼菌的培养基进行离心，去掉上清，得到A菌泥。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤四中，按质量百分数计，所述冷冻保护剂为20％脂乳粉，5％甘油和75％PBS溶液组成。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤五中，所述D液放...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾世奇，马启明，余国兴，
申请(专利权)人：暨南大学附属第一医院广州华侨医院，
类型：发明
国别省市：