一种种子促生微生物试剂及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种种子促生微生物试剂及其制备方法，该微生物试剂中含有JC

【技术实现步骤摘要】
一种种子促生微生物试剂及其制备方法


[0001]本专利技术涉及微生物试剂的
，具体涉及一种种子促生微生物试剂及其制备方法。

技术介绍

[0002]内生菌是指整个生活周期或生活史的部分阶段能够生活在宿主植物组织内，且它们的存在并未使植物组织的表型特征和功能有明显改变的菌类，主要包括内生真菌、内生细菌、内生放线菌。近年来，关于植物内生菌对提高植物次级代谢产物、促进植物生长以及增强植物抗逆性等方面作用的研究已广泛开展。
[0003]在我国传统医学中，石斛属多种植物的新鲜或干燥茎被收做药用，具有极高的药用价值，如铁皮石斛、霍山石斛、金钗石斛等。金钗石斛作为石斛属重要的成员，已列入中国药典，其内生菌种类丰富，数量众多，为研究微生物提供了较多的资源。金钗石斛内生菌是获得天然抗菌活性物质及开发绿色菌肥的又一重要资源。相对石斛内生真菌而言，石斛内生细菌资源的研宄较少。

技术实现思路

[0004]为了克服现有技术的不足，本专利技术的目的之一在于提供一种种子促生微生物试剂，含有的JC
‑
3jx菌株对种子生根和发芽有良好的促进作用，体现了非常好的抑菌促生潜力；本专利技术的目的之二在于提供一种种子促生微生物试剂的制备方法。
[0005]本专利技术的目的之一采用如下技术方案实现：
[0006]一种种子促生微生物试剂，所述微生物试剂含有金钗石斛内生皮尔瑞娥类芽孢杆菌(Paenibacillus peoriae JC
‑
3jx)，命名为JC
‑
3jx菌株，保藏号为GDMCC No:62384，保藏日期为2022年4月14日，保藏分类命名为皮尔瑞娥类芽孢杆菌，保藏单位为广东省微生物菌种保藏中心，保藏单位地址为广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
[0007]进一步，所述JC
‑
3jx菌株的rDNA序列如SEQ ID NO:1所示。
[0008]再进一步，所述微生物试剂中接种金钗石斛内生皮尔瑞娥类芽孢杆菌的悬液浓度为1.6
×
104～1.6
×
106CFU/mL。
[0009]本专利技术的目的之二采用如下技术方案实现：
[0010]上述的种子促生微生物试剂的制备方法，包括以下步骤：
[0011]将所述JC
‑
3jx菌株进行斜面活化培养，再进行摇瓶种子扩大培养，再转入发酵罐培养，喷雾干燥后，得到种子促生微生物菌剂。
[0012]进一步，所述斜面活化培养的具体步骤为：采用NA培养基斜面培养进行活化，接种甘油菌至NA培养基斜面，进行培养后，得到F1代斜面，随后取F1代斜面转接至另一NA斜面培养基，培养后得到活化后的F2代斜面。
[0013]再进一步，所述摇瓶种子扩大培养的具体步骤为：将活化培养的斜面菌种加入生理盐水洗脱制备菌悬液，转接于含有种子培养基的摇瓶中，振动混合，再进行培养12h。
[0014]具体地，所述种子培养基包括葡萄糖、玉米淀粉、豆粕粉、酵母膏、蛋白胨、氯化钠、硫酸锰、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾和水，调pH值为6.5～7.0，高压灭菌后制得。
[0015]进一步，所述发酵罐培养是将摇瓶培养好的种子液接种发酵罐；在发酵培养起始阶段，控制发酵罐通气量为200～250mL/min，搅拌控制为250～350rpm，温度控制在30
‑
37℃，初始葡萄糖的浓度控制在20～30g/L；前12h控制体系的pH为6.5～7.0，控制溶解氧为25～45％，12h以后pH和溶氧不作限定。
[0016]再进一步，发酵周期控制在36h以内，停止发酵，将发酵液升温至60℃并维持一段时间，然后再加入麦芽糊精和氯化钙保护剂，混匀后进行喷雾干燥，喷雾塔的入口温度为160～180℃，出口温度为82～85℃，即得到活菌数＞1
×
1012CFU/g的种子促生微生物试剂。
[0017]具体地，所述发酵罐中的液体培养基包括豆粕粉、麸皮、麦芽糖浆、可溶性淀粉、L
‑
谷氨酸钠、MgSO4·
7H2O、KCl、KH2PO4、FeSO4、MnSO4和轻质碳酸钙，调节初始的pH为6.8～7.0，灭菌后得到液体培养基。
[0018]相比现有技术，本专利技术的有益效果在于：
[0019]本专利技术的种子促生微生物试剂中含有JC
‑
3jx菌株，该菌株为金钗石斛内生皮尔瑞娥类芽孢杆菌。经过验证发现，JC
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3jx菌株不仅对多种植物病原真菌均表现出不同程度的抑制作用，对大豆疫霉的抑制率达到50％，而且其发酵上清液对供试的3种病原细菌也表现出明显的抑制活性，其中对革兰氏阴性的大肠杆菌抑制活性最好。同时，促生结果显示，含有JC
‑
3jx菌株的微生物试剂对玉米种子生根和绿豆发芽有良好的促进作用，体现了非常好的抑菌促生潜力。
附图说明
[0020]图1为不同浓度的微生物试剂对玉米的促生示意图；
[0021]图2为特定浓度的微生物试剂对绿豆的促生示意图；
[0022]图3为部分单菌落分离的培养示意图；
[0023]图4为不同菌落与指示菌的对峙培养的示意图；
[0024]图5为JC
‑
3jx菌落的培养示意图；
[0025]图6为JC
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3jx菌落的显微镜图；
[0026]图7为PCR扩增菌株JC
‑
3jx菌株的电泳结果图；
[0027]图8为JC
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3jx菌株基于16S rDNA序列的系统进化树；
[0028]图9为JC
‑
3jx菌株对拟盘多毛孢霉的平板对峙图；
[0029]图10为JC
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3jx菌株对尖孢镰刀菌的平板对峙图；
[0030]图11为JC
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3jx菌株对辣椒疫霉的平板对峙图；
[0031]图12为JC
‑
3jx菌株对大豆疫霉的平板对峙图；
[0032]图13为JC
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3jx菌株对茄链格孢菌的平板对峙图；
[0033]图14为JC
‑
3jx菌株发酵上清液对不同病原细菌的抑菌活性。
具体实施方式
[0034]下面，结合附图以及具体实施方式，对本专利技术做进一步描述，需要说明的是，在不相冲突的前提下，以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施
例。
[0035]本实施例的种子促生微生物试剂含有金钗石斛内生皮尔瑞娥类芽孢杆菌，命名为JC
‑
3jx菌株，保藏号为GDMCC No:62384，保藏日期为2022年4月14日，保藏分类命名为枯草芽孢杆菌，保藏单位为广东省微生物菌种保藏中心，保藏单位地址为广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。其中，所述JC
‑
3jx菌株的rDNA序列如SEQ ID NO本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种种子促生微生物试剂，其特征在于，所述微生物试剂含有金钗石斛内生皮尔瑞娥类芽孢杆菌，命名为JC
‑
3jx菌株，保藏号为GDMCC No:62384，保藏日期为2022年4月14日，保藏分类命名为皮尔瑞娥类芽孢杆菌，保藏单位为广东省微生物菌种保藏中心，保藏单位地址为广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。2.如权利要求1所述的种子促生微生物试剂，其特征在于，所述JC
‑
3jx菌株的rDNA序列如SEQ ID NO:1所示。3.如权利要求1所述的种子促生微生物试剂，其特征在于，所述微生物试剂中接种金钗石斛内生皮尔瑞娥类芽孢杆菌的悬液浓度为1.6
×
104～1.6
×
106CFU/mL。4.权利要求1～3任一项所述的种子促生微生物试剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将所述JC
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3jx菌株进行斜面活化培养，再进行摇瓶种子扩大培养，再转入发酵罐培养，喷雾干燥后，得到种子促生微生物菌剂。5.如权利要求4所述的种子促生微生物试剂的制备方法，其特征在于，所述斜面活化培养的具体步骤为：采用NA培养基斜面培养进行活化，接种甘油菌至NA培养基斜面，进行培养后，得到F1代斜面，随后取F1代斜面转接至另一NA斜面培养基，培养后得到活化后的F2代斜面。6.如权利要求4所述的种子促生微生物试剂的制备方法，其特征在于，所述摇瓶种子扩大培养的具体步骤为：将活化培养的斜面菌种加入生理盐水洗脱制备菌悬液，转接于含有种子...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄钦耿，林万华，张文，黄炜乾，王珍珍，谭文俊，
申请(专利权)人：清远一生自然生物研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：