HSP70调控塞尼卡病毒复制中的应用制造技术

本发明专利技术属于分子生物学和兽医药领域，提供了HSP70及其抑制剂在调控塞尼卡病毒复制中的应用。HSP70抑制剂可用于制备抑制塞尼卡病毒药剂，HSP70及其编码基因可用于筛选治疗或预防塞尼卡病毒药剂。本发明专利技术提供的HSP70及其抑制剂能够调控塞尼卡病毒的复制过程，对塞尼卡病毒的致病机理、疫苗研发具有重要意义。疫苗研发具有重要意义。疫苗研发具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
HSP70调控塞尼卡病毒复制中的应用


[0001]本专利技术属于分子生物学和兽医药领域，具体涉及HSP70促进塞尼卡病毒复制中的应用。

技术介绍

[0002]猪塞尼卡病毒（Senecavirus A, SVA）也称塞尼卡谷病毒（seneca Valley virus, SVV），可导致猪的口吻部、口腔黏膜、蹄冠部出现水疱样病变，其临床症状与其他水疱型疫病所导致的症状难以区分。该病毒属于小RNA病毒科（Picornaviridae）、塞尼卡病毒属（Senecavirus）成员。SVA目前是塞尼卡病毒属的唯一成员。该病毒最初作为人胚胎视网膜细胞的污染物被发现，2007年首次在加拿大的猪场发现该病毒感染的猪群。该病毒可导致猪的口吻部、蹄冠部出现水疱样病变，其临床症状与其他水疱型疫病（如口蹄疫、猪水疱病）所引起的症状难以区分。除此之外，SVA可导致流行性新生仔猪暂时性死亡。目前，SVA感染已在全球多个国家有所报道，如美国、巴西、泰国等。我国于2015年在广东省发现该病，目前全国已有多个省份暴发了该病，给养猪业造成较大的经济损失。
[0003]热休克蛋白（Heat shock proteins, HSPs）最先在果蝇唾液腺中被发现，广泛存在于细胞中，作为细胞内伴侣分子在蛋白质折叠、装配、蛋白酶体降解等多种生物学活动中发挥作用。根据其分子量和等电点分为HSP110、HSP90、HSP70、HSP60、HSP40、HSP27和泛素等7大家族。HSPs主要由高度保守的氨基端（N
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末端区)和具有多变性的羧基端（C
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末端区）两部分构成，氨基端为ATP的结合位点，羧基端可结合未折叠的多肽。当细胞暴露于病原体、创伤或其它刺激时，HSPs可维持细胞稳态，同时在细胞内物质运输、细胞自噬及凋亡、在抗原呈递中扮演着重要角色，HSPs也是帮助蛋白质折叠和聚集的重要分子伴侣。
[0004]HSP70作为细胞分子伴侣的核心成分网络之一，对维持细胞稳态至关重要，可在有ATP的条件下结合或解离蛋白质复合物，其结构主要包含ATP酶区和多肽结合区两部分，前者接近于HSP70蛋白紧凑型氨基端的385个氨基酸残基，参与ATP释放；后者为相对保守的氨基酸序列，能与主要组织相容性复合物（major histocompatibility complex, MHC）抗原结合，通过参与抗原呈递发挥作用。HSP70有许多底物，包括新合成的蛋白和变性蛋白等，在蛋白质的稳态中起关键作用，通过结合部分蛋白质以及多肽的合成来保护细胞结构，并帮助蛋白质折叠到其稳定的四级结构，从而保护蛋白质免于错误聚集并协助其折叠。此外，有研究表明许多病毒可利用HSP70的功能特性来促进病毒粒子在宿主细胞内的折叠、成熟或组装。研究发现，HSP70在口蹄疫病毒感染诱导的羔羊心肌炎实验中，在心肌组织中表达上调；在登革热病毒感染的细胞中HSP70的诱导形式显著升高等，此类研究说明HSP70可能作为细胞因子参与病毒复制。
[0005]塞尼卡病毒作为一种新出现的感染猪并可导致仔猪死亡的病毒，在病毒基础研究和疫苗研发过程中需要对塞尼卡病毒的感染和复制进行调控，但目前尚无SVA与宿主因子如HSP70之间关系的相关研究。

技术实现思路

[0006]针对缺乏调控塞尼卡病毒复制药剂的问题，本专利技术提供HSP70在促进塞尼卡病毒复制中的应用，HSP70及HSP70抑制剂能够调控塞尼卡病毒在宿主细胞内的复制，可应用于疫苗生产中。
[0007]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案。
[0008]HSP70在提高塞尼卡病毒在宿主细胞内复制中的应用。
[0009]所述宿主细胞为仓鼠肾细胞BHK
‑
21细胞。
[0010]HSP70抑制剂在制备抑制塞尼卡病毒药剂中的应用。
[0011]所述HSP70抑制剂为MKT
‑
077。
[0012]HSP70及其编码基因在筛选治疗或预防塞尼卡病毒药剂中的应用。
[0013]所述应用包括以HSP70作为靶标，检测：a）HSP70蛋白的活性、表达水平、修饰水平或蛋白的定位；或，b）HSP70基因的mRNA表达水平、转录或转录后修饰水平。
[0014]本专利技术具有以下优点：本专利技术提供的HSP70及其抑制剂能够调控塞尼卡病毒的复制过程，对塞尼卡病毒的致病机理、疫苗研发具有重要意义。
附图说明
[0015]图1为SVA亚基因组复制子rSVA
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Rluc构建结构示意图；图2为rSVA
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Rluc转染BHK
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21细胞后不同时间点Rluc表达情况；图3为MKT
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077对BHK
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21细胞活性的影响；图4为MKT
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077预处理BHK
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21转染rSVA
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Rluc后Rluc表达情况；图5为HSP70处理后不同SVA IRES结构域的相对表达水平；图6为SVA感染BHK
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21细胞后HSP70的表达量；图7为SVA感染BHK
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21细胞和感染过表达HSP70 BHK
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21细胞后的滴度；图8为SVA感染过表达HSP70 BHK
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21细胞后病毒衣壳蛋白表达量；图9为HSP70与SVA蛋白各亚基的Co
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ip产物的蛋白印迹图；图10为HSP70与SVA蛋白各亚基的免疫荧光图。
具体实施方式
[0016]下面结合实施例和附图对本专利技术做进一步说明，但本专利技术不受下述实施例的限制。
[0017]实施例1
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HSP70对塞内卡病毒翻译起始活性的影响为探讨HSP70在SVA病毒蛋白翻译过程中的作用，利用融合PCR的方法，以2017年山东分离毒株SVA
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CH
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SDGT
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2017（Genbank No. MZ818785）为骨架，用Rluc报告基因替换SVA结构蛋白P1的编码基因，保留SVA基因组与复制相关的非结构蛋白编码区以及5
′
UTR和3
′
UTR序列，构建了含有Rluc报告基因的SVA（图1）亚基因组复制子rSVA
‑
Rluc。rSVA
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Rluc转染BHK
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21细胞后，在不同时间点对Rluc活性进行检测，结果如图2所示：该复制子RNA在转染BHK
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21细胞后持续表达Rluc，在转染后4
‑
8h Rluc活性呈线性增强，在8h达到最高点，之后
缓慢下降。结果表明，构建的亚基因组复制子rSVA
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Rluc可高效表达Rluc，且在4
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8h时段内进行Rluc的实时检测可反应复制子的复制和翻译水平的动态变化。
[0018]为了获得HSP70是否影响病毒蛋白翻译过本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.HSP70在提高塞尼卡病毒在宿主细胞内复制中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述宿主细胞为仓鼠肾细胞BHK
‑
21细胞。3.HSP70抑制剂在制备抑制塞尼卡病毒药剂中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述HSP70抑制剂为MKT
...

【专利技术属性】
技术研发人员：李琛，李俊，时建立，刘畅，马英茹，吴晓燕，徐绍建，韩红，郑理美，
申请(专利权)人：山东省农业科学院畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：