一株跨种属裂解型肺炎克雷伯菌噬菌体及其用途制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，特别是涉及一株跨种属裂解型噬菌体及其用途。一株跨种属裂解型肺炎克雷伯菌噬菌体，该噬菌体为肺炎克雷伯菌噬菌体RDP

【技术实现步骤摘要】
一株跨种属裂解型肺炎克雷伯菌噬菌体及其用途


[0001]本专利技术属于生物
，特别是涉及一株跨种属裂解型噬菌体及其用途。

技术介绍

[0002]肺炎克雷伯菌在自然界中广泛存在，是人类和其他哺乳动物的腐生菌，在胃肠道、皮肤和鼻咽部都有分布，为兼性厌氧菌，也是一种常驻菌群或短暂菌群(尤其是在胃肠道 内)，另外，它也广泛存在于各种环境生态位(土壤、水等)中）。它是临床上最常见的重要条件致病菌和医源性感染细菌之一，肺炎克雷伯氏菌引起的感染具有高死亡率的特点，在抗菌治疗下，死亡率仍高达 50%左右。肺炎克雷伯氏菌非常容易变异，所以抗药性比较强。
[0003]大肠杆菌是动物肠道中的正常寄居菌，其中很小一部分在一定条件下引起疾病。大肠杆菌的血清型能够引起人体或动物胃肠道感染，主要是由特定的菌毛抗原、致病性毒素等感染引起的。动物的大肠杆菌病可以发生在多种家畜、家禽、养殖经济动物以及其他陆生动物和某些水产动物，其中猪和鸡是最为易感的，而且危害十分严重。大肠杆菌病常见于新生畜及幼畜，表现为肠炎、肠毒血症、败血症或组织器官炎症等，使畜禽生长发育受阻和死亡，造成较大经济损失。
[0004]沙门氏菌是一种常见的食源性致病菌，广泛分布于自然界，常常寄居在人和动物体内，特别是家禽、家畜及宠物的肠道中。家禽家畜感染沙门氏菌可引起相应的传染病，如猪霍乱、鸡白痢等。当动物因患病、衰弱、营养不良、疲劳以致抵抗力降低时，肠道中的沙门氏菌即可经肠系膜淋巴结和淋巴组织进入血液引起全身感染，甚至死亡。沙门氏菌病属于畜禽的常见病，发病率较高，危害很大。而在自然界中，家禽构成了沙门氏菌最大的单独贮存宿主。在所有动物中，最常报道的沙门氏菌来源于家禽和禽产品。
[0005]噬菌体侵染宿主菌后，裂解时会释放出新的噬菌体，而少量的噬菌体就能起到防治的效果。噬菌体的作用靶点在原核微生物的细胞壁，而对于动植物细胞上没有相应的作用位点，由此可以保证噬菌体使用的安全性。噬菌体和病原菌可以共同进化，防止细菌耐药性的出现。因此，利用噬菌体来解决细菌是具有广阔前景的生物防治途径。
[0006]噬菌体效价高、耐高温、耐酸碱等特性的种质资源多有出现，但可跨种属对肺炎克雷伯菌、大肠杆菌和沙门氏菌均能进行裂解的种质资源却少有。肠道噬菌体的种类和数量直接影响肠道区系及其生理状态，相较只能感染单一种属细菌的噬菌体，能跨种属感染的噬菌体，在肠道中的作用更加复杂，对肠道菌群和肠道健康的影响更大。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种跨种属裂解性肺炎克雷伯菌噬菌体，以替代抗生素在防治畜禽养殖中的应用，并解决畜禽动物因致病菌耐药性而导致用药无效等问题。
[0008]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一株跨种属裂解型肺炎克雷伯菌噬菌体，该噬菌体RDP
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EC
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20056，分类名称为肺炎克雷伯氏菌噬菌体，于2022年4月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.45090。
[0009]优选地，该噬菌体对肺炎克雷伯菌、大肠杆菌或沙门氏菌均具有强裂解作用。
[0010]优选地，本专利技术还提供了该噬菌体在制备预防和/治疗由肺炎克雷伯菌、大肠杆菌和沙门氏菌中的任意一种或两种以上引起的疾病的药物中的用途。
[0011]优选地，本专利技术还提供了该噬菌体在制备预防由大肠杆菌和/或沙门氏菌引起的疾病的饲料、添加剂或保健品中的用途。
[0012]进一步地，本专利技术还提供一种肺炎克雷伯菌、大肠杆菌或沙门氏菌的杀菌组合物，该杀菌组合物包括所述的跨种属裂解型肺炎克雷伯菌噬菌体。
[0013]进一步地，本专利技术还提供一种预防和/或治疗大肠杆菌和沙门氏菌引起的疾病的药物，其包括所述的跨种属裂解型肺炎克雷伯菌噬菌体。
[0014]进一步地，本专利技术还提供一种预防由大肠杆菌和/或沙门氏菌引起的疾病的饲料、饲料添加剂或保健品，其包括所述的跨种属裂解型肺炎克雷伯菌噬菌体。
[0015]进一步地，本专利技术还提供一种畜禽养殖环境的清洁剂或消毒剂，其包括所述的跨种属裂解型肺炎克雷伯菌噬菌体。
[0016]与现有技术相比，本专利技术的有益效果具体包括：（1）本专利技术提供的噬菌体，以大肠杆菌为宿主，不仅可以裂解肺炎克雷伯菌，还可以跨种属裂解大肠杆菌和沙门氏菌，且具有较强的裂解活性，为工业化生产噬菌体提供了物质来源，在防控畜禽致病性大肠杆菌和沙门氏菌中具有良好的应用前景。
[0017]（2）本专利技术提供的噬菌体，在温度为50℃的水浴锅中作用 30min 仍可保持效价稳定，其效价较高，可在10^8pfu/mL之上，可见该噬菌体的有一定的高温耐受性，效价较高，安全有效。该噬菌体RDP
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EC
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20056的最适温度为37℃，效价最高达到8*10^9pfu/mL。
[0018]（3）本专利技术所提供的噬菌体是从自然界中分离的烈性噬菌体供试噬菌体不含毒力基因或不良基因；本专利技术未对供试噬菌体进行任何遗传修饰。
附图说明
[0019]图1为本专利技术实施例中噬菌体RDP
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20056的电镜图；图2为本专利技术实施例中噬菌体RDP
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20056对宿主菌BE
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20055 RTD裂解实验结果；图3为本专利技术实施例中噬菌体RDP
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20056热稳定性示意图；图4为本专利技术实施例中噬菌体RDP
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20056遗传稳定示意图。
具体实施方式
[0020]下面结合附图和实施例对本专利技术做进一步说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本专利技术，但不以任何形式限制本专利技术。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本专利技术的保护范围。
[0021]本专利技术从中慧集团养殖场的禽粪便中分离大肠杆菌BE
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20055，并通过实验确定了该大肠杆菌BE
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20055的致病性和耐药性，以大肠杆菌BE
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20055为宿主，从禽粪便中分离得到一株裂解性肺炎克雷伯菌噬菌体，并通过全基因组序列确定了该噬菌体的基因型。
[0022]实施例1 病原菌及噬菌体的分离及鉴定
（1）宿主大肠杆菌BE
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20055的分离及其鉴定从禽粪便中，采用无菌操作的方法，在科马嘉大肠显色培养基上划线分离，37℃培养18
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24h后，在大肠显色平板上呈现边缘整齐的蓝色或蓝绿色菌落，直径约1~2 mm；然后挑取典型菌落在麦康凯培养基上划线，37℃培养18
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24h后，在麦康凯培养基上呈现粉色菌落且周围会有胆碱盐沉淀，挑取典型菌落继续划线纯化3次，然后挑取单菌落接种于5mL的LB肉汤培养基中，37℃，200rpm振荡本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株跨种属裂解型肺炎克雷伯菌噬菌体，其特征在于：该噬菌体RDP
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20056，分类名称为肺炎克雷伯氏菌噬菌体，于2022年4月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.45090。2.根据权利要求1所述的跨种属裂解型肺炎克雷伯菌噬菌体，其特征在于：该噬菌体对肺炎克雷伯菌、大肠杆菌或沙门氏菌均具有强裂解作用。3.如权利要求1或2所述的跨种属裂解型肺炎克雷伯菌噬菌体的用途，其特征在于：该噬菌体用于制备预防和/或治疗由肺炎克雷伯菌、大肠杆菌和沙门氏菌中的任意一种或两种以上引起的疾病的药物。4.如权利要求1或2所述的跨种属裂解型肺炎克雷伯...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜新永，刘长太，崔耐，马如霞，李先胜，
申请(专利权)人：青岛润达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：