一种腺病毒的生产方法技术

本申请属于细胞工程技术领域，具体公开一种腺病毒的生产方法，其包括以下步骤：在腺病毒侵染宿主细胞的过程中加入JAK抑制剂，所述JAK抑制剂选自JAK1特异性抑制剂、Fedratinib抑制剂、Ruxolitinib抑制剂、SAR20347抑制剂、PF

【技术实现步骤摘要】
一种腺病毒的生产方法


[0001]本申请属于细胞工程
，更具体地说，它涉及一种提高腺病毒单细胞产量的生产方法。

技术介绍

[0002]癌症是在发病率及死亡率方面仅次于心血管疾病的第二大疾病，随着经济发展水平提高，心血管类患者死亡率相对下降，癌症将成为阻碍期望寿命增长的主要疾病。中国人口基数大，其癌症发病人数位居全球第一，由于就诊普遍偏晚，后续治疗效果欠佳，导致中国癌症死亡率高于全球平均水平。提高癌症的预防、诊断以及治疗可降低癌症发病率及死亡率，提高癌症患者生存质量。
[0003]传统的癌症疗法有手术治疗、放射治疗及化学治疗，各自均有局限性，存在疗效低、死亡率高以及预后较差等缺点，随着对生命医学研究的不断深入，癌症治疗已经进入精准靶向生物治疗时代，包括肿瘤免疫疗法、基因治疗及溶瘤病毒疗法等。尤其是溶瘤病毒疗法，其具有安全性、有效性、特异性等多种优势。针对肿瘤细胞的特异性选择问题，研究人员对腺病毒载体进行改造，其一是将病毒在正常细胞中复制所必须而在肿瘤细胞中复制不需要的基因剔除，其二则是引入肿瘤特异性启动子控制病毒复制所必须的基因。为增强杀伤肿瘤效果，还可引入各种治疗基因表达框，联合基因治疗和病毒治疗的新抗癌策略更具靶向性、安全性和高效性。
[0004]干扰素被广泛用于肿瘤病人的治疗，如转移性黑色素瘤以及恶性血液肿瘤等。研究表明IFN
‑
a在体内和体外均能直接抑制肿瘤细胞的增殖，另外可间接作用于肿瘤细胞，包括下调致癌基因的表达、上调抑癌基因的表达、增加主要组织相容性复合物的表达。I型干扰素对多种宿主免疫细胞具有调节功能，在整体抗肿瘤免疫中发挥核心作用。因此，将重组干扰素表达框插入到溶瘤腺病毒中得到的靶向基因
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病毒药物具有更强的肿瘤杀伤效果。

技术实现思路

[0005]但是本申请的专利技术人发现利用细胞生产含有重组干扰素表达框的溶瘤腺病毒时，其单细胞产量明显下降（相较于不含有重组干扰素表达框的空载病毒，含有重组干扰素表达框的溶瘤腺病毒的单细胞产量下降了60%以上），显著增加了相关药物的生产成本。
[0006]基于此，为了提高腺病毒的单细胞产量，本申请提供了一种腺病毒的生产方法，该方法能够在不影响腺病毒活性的前提下，显著提高腺病毒的单细胞产量，尤其是提高插入了重组干扰素表达框的重组溶瘤腺病毒的单细胞产量，从而降低了生产腺病毒相关药物的生产成本。
[0007]本申请是通过以下方案实现的：本申请提供了一种提高腺病毒单细胞产量的生产方法，其包括以下步骤：在腺病毒侵染宿主细胞的过程中加入JAK抑制剂，所述JAK抑制剂选自JAK1特异性抑制剂、Fedratinib抑制剂、Ruxolitinib抑制剂、SAR20347抑制剂、PF
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06700841抑制剂中的一种或
uM、8.0 uM、9.0 uM、10.0 uM、11.0 uM、12.0 uM、13.0 uM、14.0 uM、15.0 uM、16.0 uM、17.0 uM、18.0 uM、19.0 uM或20.0 uM等。
[0024]在本申请的一个具体实施方式中，所述SAR20347抑制剂加入的浓度为10.0 uM。
[0025]在本申请的一个具体实施方式中，所述PF
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06700841抑制剂加入的浓度为0.5 uM~15.0 uM，例如，所述PF
‑
06700841抑制剂加入的浓度为0.5 uM、1.0 uM、1.5 uM、1.8 uM、2.0 uM、2.5 uM、3.0 uM、4.0 uM、5.0 uM、6.0 uM、7.0 uM、8.0 uM、9.0 uM、10.0 uM、11.0 uM、12.0 uM、13.0 uM、14.0 uM或15.0 uM等。
[0026]在本申请的一个具体实施方式中，所述PF
‑
06700841抑制剂加入的浓度为3.0 uM。
[0027]在本申请的一个具体实施方式中，腺病毒包括重组腺病毒或野生型腺病毒。
[0028]在本申请的一个具体实施方式中，所述重组腺病毒包括能够表达外源治疗基因的重组腺病毒。
[0029]在本申请的一个具体实施方式中，所述外源治疗基因为能够表达干扰素、IL
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2、IL
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12、IL
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15、IL
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24、GM
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CFS、TRAIL、PD
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1结合蛋白、CTLA4结合蛋白或CD47结合蛋白等的基因。
[0030]在本申请的一个具体实施方式中，所述外源基因为能够表达干扰素的基因。
[0031]在本申请的一个具体实施方式中，所述腺病毒为溶瘤腺病毒。
[0032]在本申请的一个具体实施方式中，所述腺病毒为野生型腺病毒Ad
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WT、空载病毒OncoMul
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V2或溶瘤腺病毒YSCH
‑
01。
[0033]在本申请的一个具体实施方式中，所述腺病毒对宿主细胞无特殊要求。
[0034]在本申请的一个具体实施方式中，所述宿主细胞为腺病毒生产用工程细胞。
[0035]在本申请的一个具体实施方式中，所述宿主细胞为Hela
‑
S3、HeLa、HEK293或A549。
[0036]本申请另一方面提供上述JAK抑制剂在提高单细胞腺病毒产量中的应用。
[0037]本申请提供的腺病毒的生产方法至少具有以下有益效果之一：本申请提供的腺病毒的生产方法，其通过在腺病毒侵染宿主细胞的过程中加入JAK抑制剂，例如JAK1特异性抑制剂、Fedratinib抑制剂、Ruxolitinib抑制剂、SAR20347抑制剂或PF
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06700841抑制剂等，能够在不影响腺病毒活性的前提下，显著提高单细胞腺病毒的产量，从而降低了生产腺病毒相关药物的生产成本。
附图说明
[0038]图1为本申请实施例中提供的YSCH
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01病毒与空载对照病毒的单细胞产量比较的结果图。
[0039]图2为本申请实施例中提供的不同广谱性JAK抑制剂对YSCH
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01病毒的单细胞产量的实验结果图。
[0040]图3为本申请实施例中提供的不同特异性JAK抑制剂对YSCH
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01病毒的单细胞产量的实验结果图。
[0041]图4为本申请实施例中提供的不同浓度Ruxolitinib抑制剂对YSCH
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01病毒的单细胞产量影响的实验结果图。
[0042]图5为本申请实施例中提供的Ruxolitinib抑制剂对HEK293细胞生产YSCH
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01病毒的单细胞产量影响的实验结果图。
[0043]图6为本申请实施例中提供的Ruxolitinib抑制剂对A549细胞生产YSCH
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01病毒的单细胞产量影响的实验结果图。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种腺病毒的生产方法，其特征在于，包括以下步骤：在腺病毒侵染宿主细胞的过程中加入JAK抑制剂，所述JAK抑制剂选自JAK1特异性抑制剂、Fedratinib抑制剂、Ruxolitinib抑制剂、SAR20347抑制剂、PF
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06700841抑制剂中的一种或多种。2.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，所述JAK1特异性抑制剂包括Solcitinib抑制剂和Upadactinib抑制剂。3.根据权利要求2所述的生产方法，其特征在于，所述Solcitinib抑制剂加入的浓度为1.0 uM~20.0 uM；以及任选地，所述Upadactinib抑制剂的加入浓度为1.0 uM~20.0 uM。4.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，所述Fedratinib抑制剂加入的浓度为0.5 uM~10.0 uM；以及任选地，所述Ruxolitinib抑制剂加入的浓度为0.1 uM~10.0 uM；以及任选地，所述SAR20347抑制剂加入的浓度为3.0 uM~20.0 uM；以及任...

【专利技术属性】
技术研发人员：方先龙，章康健，曹雪萍，顾锦法，陈若愚，
申请(专利权)人：上海元宋生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：