抗体鉴定方法、多肽组合物、试剂盒及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种抗体鉴定方法、多肽组合物、试剂盒及其制备方法和应用，涉及生物技术的技术领域。该抗体鉴定方法主要包括鉴定抗体是否特异性识别目标磷酸化位点，通过将待测抗体分别与四条鉴定多肽反应，依据检测结果判定待鉴定的抗体能否特异性识别目标磷酸化位点。其中四条鉴定多肽以基本多肽为基础，通过目标磷酸化位点和潜在的磷酸化位点的磷酸化差异来判别待鉴定的抗体对目标磷酸化位点的特异性识别能力，缓解了现有技术中存在的识别磷酸化位点的抗体的筛选鉴定方法复杂的问题。化位点的抗体的筛选鉴定方法复杂的问题。

【技术实现步骤摘要】
抗体鉴定方法、多肽组合物、试剂盒及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物技术
，尤其是涉及一种抗体鉴定方法、多肽组合物、试剂盒及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]异常过度磷酸化Tau蛋白(p
‑
Tau)形成的神经细胞内神经原纤维缠结是阿尔兹海默病(Alzheimer
’
s disease,AD)的病理特征之一。免疫学检测p
‑
Tau是目前辅助诊断AD应用较为广泛的一种方法，其中使用的p
‑
Tau抗体对磷酸化位点的特异性至关重要。
[0003]目前针对识别磷酸化位点的抗体(如p
‑
Tau181)的筛选鉴定方法中，需要根据推测的潜在的磷酸化位点，合成该位点定点磷酸化的多肽，以及其相应的该位点未磷酸化的多肽，两类多肽分别与待鉴定抗体反应，再降低有交叉反应的多肽浓度，得到反应性最强的多肽，判断为该抗体识别的磷酸化主要位点。
[0004]例如，在一个p
‑
Tau181的商业化抗体的位点鉴定中，使用了22条定点本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.抗体鉴定方法，其特征在于，所述鉴定包括鉴定抗体是否特异性识别目标磷酸化位点，所述抗体鉴定方法包括：将待鉴定的抗体分别与四条鉴定多肽反应，检测结果同时满足(Ⅰ)～(Ⅲ)，则判定待鉴定的抗体是特异性识别目标磷酸化位点的抗体：(Ⅰ)待鉴定的抗体与第一鉴定多肽和第三鉴定多肽反应为阳性；(Ⅱ)待鉴定的抗体与第二鉴定多肽反应为阴性；(Ⅲ)待鉴定的抗体与第四鉴定多肽反应为阴性或弱阳性；所述四条鉴定多肽分别为：第一鉴定多肽为基本多肽中只有目标磷酸化位点磷酸化的多肽；第二鉴定多肽为基本多肽中无任何位点磷酸化的多肽；第三鉴定多肽为基本多肽中目标磷酸化位点和潜在的磷酸化位点均磷酸化的多肽；第四鉴定多肽为基本多肽中目标磷酸化位点未磷酸化，同时潜在的磷酸化位点磷酸化的多肽；所述基本多肽由目标磷酸化位点氮端侧相邻的第5～7个氨基酸残基为起始，碳端侧相邻的第5～7个氨基酸残基为终点，以及之间的氨基酸残基组成的多肽；所述潜在的磷酸化位点为：目标磷酸化位点的氮端侧和碳端侧，分别与所述目标磷酸化位点相邻的第一个苏氨酸残基、丝氨酸残基或酪氨酸残基。2.根据权利要求1所述的抗体鉴定方法，其特征在于，所述基本多肽由目标磷酸化位点氮端侧相邻的第5个氨基酸残基为起始，碳端侧相邻的第5个氨基酸残基为终点，以及之间的氨基酸残基组成的多肽；或，所述基本多肽由目标磷酸化位点氮端侧相邻的第6个氨基酸残基为起始，碳端侧相邻的第6个氨基酸残基为终点，以及之间的氨基酸残基组成的多肽；或，所述基本多肽由目标磷酸化位点氮端侧相邻的第7个氨基酸残基为起始，碳端侧相邻的第7个氨基酸残基为终点，以及之间的氨基酸残基组成的多肽。3.根据权利要求1所述的抗体鉴定方法，其特征在于，检测结果的值大于等于第一阈值为阳性，大于等于第二阈值且小于第一阈值为弱阳性，小于第二阈值为阴性。4.根据权利要求3所述的抗体鉴定方法，其特征在于，所述第一阈值为1，所述第二阈值为0.5。5.根据权利要求1所述的抗体鉴定方法，其特征在于，四条鉴定多肽的工作浓度分别独立的为0.03125～0.0625μg/mL。6.根据权利要求5所述的抗体鉴定方法，其特征在于，四条鉴定多肽的工作浓度分别独立的为0.03125μg/mL。7.根据权利要求1所述的抗体鉴定方法，其特征在于，所述鉴定包括鉴定抗体是否特异性识别Tau蛋白目标磷酸化位点；所述目标磷酸化位点为Tau蛋白中的目标磷酸化位点；所述四条鉴定多肽的氨基酸序列来源于Tau蛋白。8.根据权利要求1

【专利技术属性】
技术研发人员：黄聪，孙超，张鹏飞，陈文君，曾敏霞，
申请(专利权)人：珠海丽珠试剂股份有限公司，
类型：发明
国别省市：