神经丝蛋白轻链的检测试剂在制备检测颅内感染试剂中的应用制造技术

本发明专利技术属于医学技术领域，具体公开了神经丝蛋白轻链的检测试剂在制备检测颅内感染试剂中的应用。本发明专利技术提供了一种神经丝蛋白轻链的检测试剂，检测试剂在制备检测颅内感染中的应用，所述感染是细菌性引起的颅内脑脊液感染。所述检测试剂包括蛋白芯片。本发明专利技术利用蛋白芯片方法，对其脑脊液中的神经丝蛋白轻链进行检测，蛋白质芯片具有检测范围广、检测限高，蛋白芯片检测限可精确至fg/mL级别、需要的样本量少、高通量特点，可以有效的检测到脑脊液或血中神经丝蛋白轻链的浓度，降低临床取样的风险。风险。风险。

【技术实现步骤摘要】
神经丝蛋白轻链的检测试剂在制备检测颅内感染试剂中的应用


[0001]本专利技术属于医学
，具体公开了神经丝蛋白轻链的检测试剂在制备检测颅内感染试剂中的应用。

技术介绍

[0002]中枢神经系统感染是一种严重的神经系统感染性疾病，尽管与特发性脑膜炎相比，手术相关的颅内感染病情更加复杂。首先，神经系统原发性疾病可以产生神经炎症，手术同样可以产生神经炎症，且手术后患者常表现为无菌性炎症，通常与颅内感染的症状类似，如发热、头痛等。目前针对颅内感染的诊断方法主要依赖于两种：细菌培养，这种方法特异性高，但是阳性率非常低，在各实验室的数据可以看出，脑脊液细菌培养的阳性率通常低于30％；脑脊液生化指标，如脑脊液白细胞、糖、氯、总蛋白、多形核细胞，脑脊液糖与血糖的比值等。但是这种方法特异性较差。一些新型的生物标志物，如脑脊液/血乳酸、降钙素原等，会受到脑脊液性质的影响，如溶血等，影响最后的结果。
[0003]神经丝蛋白轻链是一种神经特异性标志物，其水平通常反应神经轴索损伤或脑白质损伤，在以往的报道中，针对神经丝蛋白轻链的报道大多针对阿尔兹海默症、多发性硬化、脑外伤、脑卒中、脊髓侧索硬化症等，尤其在神经退行性疾病中，发现神经丝蛋白轻链与疾病的发生、进展及影像学之间关系密切。但是在颅内感染方面，仍然缺乏相关研究。
[0004]神经外科术后细菌性颅内感染的诊断较困难，一方面是神经系统原发性疾病和手术过程都可能造成发热、头痛等类似于颅内感染的临床症状。另一方面，神经系统原发性疾病和手术过程也可能会引起脑脊液白细胞增高、总蛋白增加等现象，同样与细菌性颅内感染的脑脊液诊断具有较多的相同性。目前检测神经丝蛋白轻链的方法有传统的ELISA方法，该方法虽然技术成熟，简单易行，但是由于神经丝蛋白在脑脊液中和血中含量非常低，都仅为pg/ml数量级，超出ELISA方法的检测范围，故而市面上的ELISA试剂盒无法直接对脑脊液或血清标本进行直接检测。此外，一般ELISA试剂盒需要检测100ml的样本，对于脑脊液来说，样本非常珍贵，且脑脊液需要通过腰穿或腰大池引流获得，一般如果引流量多，会影响颅内压力，造成颅低压，甚至危及生命健康。此外，有文献对特发性细菌性脑膜炎进行了神经丝蛋白轻链检测，提示其水平会在当中升高，但是神经外科术细菌性颅内感染由于原发病灶及手术的影响，产生更加强烈的神经炎症反应及神经轴索损伤。目前尚无针对神经丝蛋白轻链在不同神经外科疾病的神经外科术后感染的报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供神经丝蛋白轻链的检测试剂在制备检测颅内感染试剂中的应用。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为：
[0007]神经丝蛋白轻链的检测试剂在制备检测颅内感染试剂中的应用，所述感染是细菌
引起的颅内脑脊液感染。
[0008]优选的，所述感染是细菌性引起的脑肿瘤患者颅内脑脊液感染。
[0009]优选的，所述肿瘤患者颅内脑脊液感染引起神经丝蛋白轻链水平升高。
[0010]优选的，所述检测试剂为用于对血液神经丝蛋白轻链进行定性检测或定量检测的检测试剂。
[0011]优选的，所述检测试剂包括蛋白芯片、基因芯片或凝集素芯片。
[0012]优选的，所述蛋白芯片的表面包覆抗神经丝蛋白轻链的多克隆抗体和单克隆抗体。
[0013]优选的，所述蛋白芯片的制备方法，包括以下步骤：
[0014]S1、以玻璃片为基底，在基底上覆盖处金箔芯片，金箔芯片的上方区域化设置带有阵列孔的TEFLON膜形成蛋白芯片；
[0015]S2、将S1得到的蛋白芯片浸入修饰液中第一次浸泡，第一浸泡结束后进行清洗，然后再次浸入混合修饰液中进行第二次浸泡，第二次浸泡结束后进行清洗得到修饰后的蛋白芯片。
[0016]优选的，S1中，所述金箔芯片的厚度为10nm，阵列的方式为8行*12列，阵列孔径为1.25mm，所述TEFLON膜的厚度为50μm。
[0017]优选的，S2中，所述修饰液为16
‑
氨基
‑1‑
十六烷硫醇的乙醇溶液，浓度为0.8
‑
1.2mM，第一次浸泡的时间为8
‑
12h。
[0018]优选的，S2中，所述混合修饰液为4
‑
(N
‑
马来酰亚胺基甲基)环己烷
‑1‑
羧酸琥珀酰亚胺酯和4
‑
(二甲氨基)吡啶溶于N,N
‑
二甲基甲酰胺形成，4
‑
(N
‑
马来酰亚胺基甲基)环己烷
‑1‑
羧酸琥珀酰亚胺酯、4
‑
(二甲氨基)吡啶和N,N
‑
二甲基甲酰胺的质量体积比为100mg：50mg：10mL，第二次浸泡的时间为6
‑
8h。
[0019]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0020](1)本专利技术对脑肿瘤患者的脑脊液糖、脑脊液总蛋白、脑脊液白细胞、脑脊液多形核细胞、脑脊液氯含量、脑脊液红细胞、脑脊液潘氏反应、脑脊液糖/血糖比值和脑脊液神经丝蛋白轻链在神经外科术后颅内感染和非感染的患者脑脊液中进行测定并进行多因素分析，发现脑脊液神经丝蛋白轻链可以作为神经外科术后颅内感染的独立性诊断性标志物，可以增加对神经外科术后细菌性颅内感染诊断的敏感性和特异性。
[0021](2)相比于传统ELISA方法无法对其进行准确的测量，且由于脑脊液抽取过程存在一定的医疗风险，抽取过多将导致低颅压等症状，本专利技术利用蛋白芯片方法，对其脑脊液中的神经丝蛋白轻链进行检测，蛋白质芯片具有检测范围广、检测限高，蛋白芯片检测限可精确至fg/mL级别、需要的样本量少、高通量等特点，可以有效的检测到脑脊液或血中神经丝蛋白轻链的浓度；其次，该方法每次仅需要1μl样本量，降低临床取样的风险。
附图说明
[0022]图1为脑脊液中神经丝蛋白轻链水平分析图；
[0023]图2为肿瘤患者脑脊液中神经丝蛋白轻链水平分析图；
[0024]图3为其他的神经外科疾病患者脑脊液中神经丝蛋白轻链水平分析图。
具体实施方式
[0025]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0026]需要说明的是，本专利技术中所使用的专业术语只是为了描述具体实施例的目的，并不是旨在限制本专利技术的保护范围，除非另有特别说明，本专利技术以下各实施例中用到的各种原料、试剂、仪器和设备均可通过市场购买得到或者通过现有方法制备得到。
[0027]实施例1
[0028]神经丝蛋白轻链的检测试剂在制备检测颅内感染试剂中的应用，所述感染是细菌引起的颅内脑脊液感染。
[0029]所述感染是细本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.神经丝蛋白轻链的检测试剂在制备检测颅内感染试剂中的应用，其特征在于，所述感染是细菌引起的颅内脑脊液感染。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述感染是细菌性引起的脑肿瘤患者颅内脑脊液感染。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述肿瘤患者颅内脑脊液感染引起神经丝蛋白轻链水平升高。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测试剂为用于对血液神经丝蛋白轻链进行定性检测或定量检测的检测试剂。5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测试剂包括蛋白芯片、基因芯片或凝集素芯片。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述蛋白芯片的表面包覆抗神经丝蛋白轻链的多克隆抗体。7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述蛋白芯片的制备方法，包括以下步骤：S1、以玻璃片为基底，在基底上覆盖处金箔芯片，金箔芯片的上方区域化设置带有阵列孔的TEFLON膜形成蛋白芯片；S2、将S1得到的蛋白芯片浸入修饰液中第一次浸泡，第一浸泡结束后进行清洗，然后再次浸入混合修饰液中进行第二次浸泡，第二次浸泡结束后进行清洗得到修饰后的蛋白芯片。8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，S1中，所述金箔芯片的厚度为10nm，...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶雷，杜卫东，程宏伟，赵亮，李平平，季学飞，管辽，
申请(专利权)人：安徽医科大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：