一种放线菌用新型基因表达载体pJXNU及其构建方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种放线菌用新型基因表达载体pJXNU及其构建方法和应用。该载体的序列如SEQ ID NO.2所示，是在pSET152质粒基础上，加载了kanamycin和thiostrepton抗生素抗性基因，以及533bp如SEQ ID NO.1所示的含3个基因表达元件序列和2套多克隆位点(multiple cloning site/MCS)的DNA片段。该载体有2个自主表达的强效基因表达元件和1个thiostrepton诱导表达元件，可在一个载体上实现2个或2组基因的自主高效表达和(或)1个或1组基因的诱导表达，可在放线菌宿主内实现多类型的功能基因研究与应用。研究与应用。研究与应用。

【技术实现步骤摘要】
一种放线菌用新型基因表达载体pJXNU及其构建方法和应用


[0001]本专利技术属于微生物基因工程领域，具体涉及一种含有3个基因表达元件(2个自主表达和1个可诱导表达)的放线菌用工具质粒(载体)，及该载体在Beta
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咔啉生物碱marinacarboline生物合成基因簇mcb异源表达中的应用。

技术介绍

[0002]放线菌细胞含有大量的次级代谢产物生物合成基因与基因簇，可利用高效基因表达载体克隆相关的基因(簇)，原位导入菌株自身细胞内，或者导入研究基础扎实、遗传操作简便；发酵干扰较少、检测背景清晰的工程化底盘细胞中，一方面发掘相应的活性次级代谢产物，另一方面也构建了产物对应的生产菌株，可用于后续生物合成机制研究，代谢工程改造和合成生物开发。
[0003]利用优良的质粒，结合精细设计的基因表达元件构建载体，并利用报告基因及宿主菌进行验证，可创制出高效的放线菌用基因表达载体，应用于放线菌的研究和开发工作，促进放线菌资源的综合利用。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于克服目前放线菌缺乏有效的基因本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种放线菌用新型基因表达载体pJXNU的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)使用NheI处理pSET152质粒，获得线性化的质粒片段pSET152
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NheI；(2)以SuperCosI质粒为模板，扩增Kan
R
片段，利用同源重组方法，将Kan
R
克隆至pSET152
‑
NheI，获得目标质粒pSET152K；(3)使用NheI处理pSET152K，获得线性化的片段pSET152K
‑
NheI；(4)以pIJ6021质粒为模板，扩增Thio
R
片段，利用同源重组方法，将Thio
R
克隆至pSET152
‑
NheI，获得目标质粒pSET152KT；(5)合成如SEQ ID NO.1所示的基因表达元件序列，利用EcoRV和XbaI的组合分别处理基因表达元件及pSET152KT质粒，将酶切后的片段连接，得到目标载体pJXNU。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)中，扩增Kan
R
片段的引物为152KanIn
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Fr:5'
‑
ATCGGGCCCTGGCCAGCTAGCtggtaaggttgggaagccct
‑
3'和152KanIn
‑
Re:5'
‑
TGCAGGTCGACTCTAGCTAGtcagaagaactcgtcaagaag
‑
3'。3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢运昌，张志斌，陈奇，杜思瑶，朱笃，黄运红，袁涛，倪海燕，黎金祖，刘文慧，
申请(专利权)人：江西师范大学，
类型：发明
国别省市：