一种链霉菌菌株YP1及其应用制造技术

本申请涉及一种链霉菌菌株YP1及其应用，属于微生物技术领域。本申请从土壤中分离出一种能产榴菌素的菌株，命名为YP1，并提供使用YP1产榴菌素的应用。本申请的链霉菌菌株YP1已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心进行保藏，保藏登记编号为CGMCC No.23383，保藏日期为2021年9月10日。保藏日期为2021年9月10日。保藏日期为2021年9月10日。

【技术实现步骤摘要】
一种链霉菌菌株YP1及其应用


[0001]本申请涉及一种链霉菌菌株YP1及其应用，属于微生物


技术介绍

[0002]榴菌素(granaticin，CAS号：19879
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06
‑
2)是苯并异色烷醌家族(benzoisochromanequinones，BIQs)抗生素中的一员，属于芳香聚酮类抗生素。其分子式为C22H20O10，分子量为444.38800，在一个标准大气压下沸点为748.3℃，闪点是266.8℃，熔点在223
‑
225℃之间，正常情况下密度为1.77g/cm3，折射率是1.745。榴菌素是深红色晶体，溶解性在不同的溶液中有所不同，其可溶于水、甲醇和乙醇等极性溶液，但在非极性溶液中不具有溶解性，并且在水中的溶解度受pH的影响，与pH值呈正相关，且在酸性水溶液中为红色，碱性水溶液中为蓝色。
[0003]榴菌素第一次被发现是在橄榄色链霉菌(S.olivaceus)中。之后，人们相继从粤蓝链霉菌GIMV4.0001(S.vietnamensisgIMV4.0001)、紫红链霉菌(S.violaceoruber)、砖红链霉菌(S.lateritius)中分离出了榴菌素。同时也从部分菌株中分离得到了榴菌素类似物，如榴菌素B，二氢榴菌素等。
[0004]榴菌素可作为一种极具潜力的抑菌和抗癌抗生素，但是目前发现的能产榴菌素的菌株种类有限，远远不能满足实际需要。

技术实现思路

[0005]为了解决能产榴菌素的菌株种类较少的技术问题、丰富能产榴菌素的菌株的种类；本申请从土壤中分离出一种能产榴菌素的菌株，命名为YP1,并提供使用YP1产榴菌素的应用。
[0006]本申请提供的菌株YP1是从中国河南省郑州市(34
°
48'00.00"N，113
°
39'00.00"E)收集的土壤中分离出来的。具体的是将从中国河南省郑州市(34
°
48'00.00"N，113
°
39'00.00"E)收集的土壤，配置为土壤悬液，然后稀释成10
‑
3，涂布于高氏培养基平板进行培养，于28℃培养。取具有产色特征的菌种并在显微镜下检查，证明为单一菌体后，通过反复分离和大量菌株重复性培养筛选，获得YP1菌株。本申请的链霉菌菌株YP1已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心进行保藏，保藏登记编号为CGMCC No.23383，保藏日期为2021年9月10日。
[0007]本申请提供的菌株YP1的形态学特征：
[0008]本菌株菌落呈乳白或淡黄色，类圆形，以不透明为主，菌落表面平滑或略向上凸起。孢子丝直、柔曲、螺旋；孢子表面光滑，呈粉末状
[0009]另外，本申请的菌株YP1是一种革兰氏阳性菌好氧菌；培养条件为：pH 5
‑
8、20
‑
40℃；其中，最佳pH为7.0，最佳温度为28℃；NaCl耐受性0
‑
5％(w/v)。
[0010]本申请提供的菌株YP1的生理生化学特征：
[0011]本菌株具有接触酶、氧化酶、β半乳糖苷酶、精氨酸双水解酶活性，不具有赖氨酸、
鸟氨酸脱羧酶和脲酶活性。能够水解明胶、还原硝酸盐，不能水解吐温40，不能产生H2S和吲哚，VP反应和甲基红实验为阴性，不能利用柠檬酸。能够利用糊精、麦芽糖、海藻糖、蔗糖、水苏糖、棉子糖、乳糖等碳源，不能利用岩藻糖糖、山梨醇、甘露醇、阿糖醇、肌醇作为碳源。不能利用水样苷、丝氨酸、丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸，能够利用果胶，半乳糖醛酸、L
‑
半乳糖内酯、葡糖酸、奎宁酸、γ
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氨基丁酸、α
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羟丁酸、β
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羟基
‑
D,L
‑
丁酸，不能利用D
‑
葡糖
‑6‑
磷酸、葡糖醛酰胺、D
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果糖
‑6‑
磷酸、粘酸、p
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羟基苯乙酸、丙酮酸甲酯、D
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乳酸甲酯、L
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乳酸、柠檬酸、α
‑
酮戊二酸、D
‑
苹果酸、L
‑
苹果酸。对醋竹桃霉素、利福霉素SV、二甲胺四环素、万古霉素敏感。
[0012]本申请提供的菌株YP1的基因特征：
[0013]与近型菌株沙阿链霉菌(Streptomyces zaomyceticus)、近型菌株砖红链霉菌(Streptomyces lateritius)的dDH值分别为28.5％和33.9％；远低于细菌物种的70％的阈值；
[0014]与近型菌株沙阿链霉菌(Streptomyces zaomyceticus)、近型菌株砖红链霉菌(Streptomyces lateritius)的ANI值分别为83.95％和87.56％，远低于建议划界物种的95
‑
96％的阈值；是一种新的链霉菌菌种。
[0015]通过形态学特征、生理生化特征和基因特征分析，YP1菌株符合链霉菌的特征，属于链霉菌，是一种新的链霉菌(拉丁文Streptomyces vilmorinianum)菌种。
[0016]本申请还提供的链霉菌菌株YP1在产榴菌素中的应用。
[0017]本申请的链霉菌菌株YP1产榴菌素，包括以下步骤：
[0018](1)平板培养：将菌株YP1划线于平板固体培养基上，于36
‑
38℃恒温中培养1
‑
3天；
[0019](2)种子液培养：从平板培养基上挑取生长良好的YP1菌体，接入高温灭菌好的增殖培养基中，放入恒温摇床中培养1
‑
3天，摇床转速为170
‑
190r/min，培养温度为36
‑
38℃；获得菌株YP1种子液；
[0020](3)发酵培养：将菌株YP1种子液以4
‑
6％v/v的接种量接入经高温灭菌的发酵培养基中，将发酵培养基置入恒温摇床中培养3
‑
5天，摇床转速为170
‑
190r/min，培养温度为36
‑
38℃；获得蓝色的菌株YP1发酵液；
[0021](4)对株YP1发酵液进行离心、旋蒸浓缩、纯化即得榴菌素；
[0022]平板培养基：琼脂20g、乳糖10g、胰蛋白胨5g、酵母浸粉10g、NacL 4g和蒸馏水1000ml，pH＝7.0，121℃灭菌20min；
[0023]增殖培养基：乳糖10g、胰蛋白胨5g、酵母浸粉10g、NacL 4g和蒸馏水1000ml，pH＝7.0，121℃灭菌20min；
[0024]发酵培养基：乳糖10g、胰蛋白胨5g、酵母浸粉10g、NacL 4g和蒸馏水1000ml，pH＝7.0，121℃灭菌20min。
[0025]在一些实施方本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.在一种链霉菌菌株YP1，其保藏号为CGMCC.23383。2.根据权利要求1所述的链霉菌菌株YP1，其16S rRNA基因序列如SEQ ID NO .1所示。3.根据权利要求2所述的链霉菌菌株YP1，扩增16S rRNA基因序列的PCR引物如SEQ ID NO .2和SEQ ID NO .3所示。4.根据权利要求1、2或3所述的链霉菌菌株YP1，耐受0
‑
5% w/v的NaCl。5.一种权利要求1
‑
4任意一项所述链霉菌菌株YP1在产榴菌素中的应用。6.根据权利要求5所述的应用，包括以下步骤：（1）平板培养：将菌株YP1划线于平板固体培养基上，于36
‑
38℃恒温中培养1
‑
3天；（2）种子液培养：从平板培养基上挑取生长良好的YP1菌体，接入高温灭菌好的增殖培养基中，放入恒温摇床中培养1
‑
3天，摇床转速为170
‑
190r/min，培养温度为36
‑
38℃；获得菌株YP1种子液；（3）发酵培养：将菌株YP1种子液以4
‑
6%v/v的接种量接入经高温灭菌的发酵培养基中，将发酵培养基置入恒温摇床中培养3
‑
5天，摇床转速为170
‑
190r/m...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱运平，赵炳钰，司雪晨，李宗显，赵红玲，
申请(专利权)人：北京工商大学，
类型：发明
国别省市：