本发明专利技术公开了一种检测癌症相关蛋白表达水平的试剂盒，所述蛋白为HCRP1蛋白，所述的试剂盒包括有效量的HCRP1蛋白、两株有效量的抗HCRP1蛋白单克隆抗体和配套的检测试剂，所述两株抗HCRP1蛋白单克隆抗体为单克隆抗体1和单克隆抗体2，所述的编码单克隆抗体1的重链可变区和轻链可变区序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，所述的编码单克隆抗体2的重链可变区和轻链可变区序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。本发明专利技术的试剂盒具有灵敏度高、线性范围宽、检测速度快、检测准确度高的优点。检测准确度高的优点。检测准确度高的优点。
【技术实现步骤摘要】
一种癌症相关蛋白及其抗体和应用
[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种癌症相关蛋白及其抗体和应用。
技术介绍
[0002]肝细胞癌相关蛋白1(hepatocellular carcinoma related protein 1,HCRP1)被认为是一种抑癌基因。HCRP1是ESCRT
‑
I复合体中的一个重要组成亚基。人体内多种受体是在ESCRT
‑
I复合体的结合下，并转运至MVBs，最后在溶酶体参与下进行降解。Xu等通过PCR技术提出并命名了HCRP1，并证明了它是一种抑癌基因。Bache等研究证实HCRP1是人ESCRT
‑
I复合体中的一个亚基，其功能对于表皮生长因子受体(EGFR)的降解至关重要。EGFR为跨膜受体酪氨酸激酶(RTK)，在调控多种细胞过程中起着重要作用，尤其在肿瘤细胞的生长和侵袭中起关键作用。多项研究显示，HCRP1在肝癌、卵巢癌、乳腺癌以及泌尿系肿瘤(肾癌、前列腺癌)等多种恶性肿瘤中均有低表达或缺失表达，而在正常组织或细胞中却明显高表达。但是，目前，缺少针对HCRP1的诊断试剂，尤其是免疫学诊断试剂。
技术实现思路
[0003]为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的之一，提供一种HCRP1及其单克隆抗体和制备方法；本专利技术的目的之二，提供了一种使用本专利技术制备的单克隆抗体和HCRP1制备用于HCRP1检测的试剂盒。
[0004]一方面，本专利技术提供了一种检测癌症相关蛋白表达水平的试剂盒，所述蛋白为HCRP1蛋白，所述的试剂盒包括有效量的HCRP1蛋白、两株有效量的抗HCRP1蛋白单克隆抗体和配套的检测试剂，所述两株抗HCRP1蛋白单克隆抗体为单克隆抗体1和单克隆抗体2，所述的编码单克隆抗体1的重链可变区和轻链可变区序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，所述的编码单克隆抗体2的重链可变区和轻链可变区序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。
[0005]优选地，本专利技术所述的有效量的HCRP1蛋白为使用HCRP1蛋白配制的校准品，所述校准品浓度分别为3000pg/ml、500pg/ml、100pg/ml、25pg/ml、5pg/ml、2.5pg/ml、0pg/ml。
[0006]优选地，本专利技术所述单克隆抗体1识别的抗原表位的氨基酸序列为MHSDLGKIIQSLLDEFWKNPPVLAP。
[0007]优选地，本专利技术所述单克隆抗体2识别的抗原表位的氨基酸序列为IEELARKNLLLEPSLEAKRQTVLDK。
[0008]优选地，本专利技术所述的单克隆抗体1偶联磁微粒，所述的偶联磁微粒的单克隆抗体1使用时的浓度为0.5mg/ml。
[0009]优选地，本专利技术所述的单克隆抗体2标记吖啶酯，所述标记吖啶酯的单克隆抗体2使用时的稀释倍数为500倍。
[0010]优选地，本专利技术所述的配套的检测试剂包括洗涤液和吖啶酯发光液。
[0011]优选地，本专利技术所述的洗涤液为TBST缓冲液。
[0012]再一方面，本专利技术还提供了一种所述的抗HCRP1蛋白单克隆抗体1和抗HCRP1蛋白单克隆抗体2在制备HCRP1蛋白检测试剂中的应用
[0013]本专利技术筛选的HCRP1蛋白的3条多肽(用于制备单克隆抗体)，具有较好的抗原性，为HCRP1蛋白的研究提供了重要参考。
[0014]本专利技术在HCRP1蛋白抗原多肽2、抗原多肽6和抗原多肽7的基础上筛选了3株特异性的单克隆抗体，为建立HCRP1蛋白的检测提供了良好的工具。其中单克隆抗体1和单克隆抗体2均具有良好的特异性和敏感性以及配对检测的适配性，适用于HCRP1蛋白的检测。
[0015]本专利技术在研究的HCRP1蛋白和单克隆抗体的基础上，开发了用于HCRP1蛋白检测的试剂盒。本专利技术的试剂盒具有灵敏度高、线性范围宽、检测速度快、检测准确度高的优点。
附图说明
[0016]图1HCRP1蛋白蛋白无序区分析结果，分值越高代表该位置为无序区的概率越大，0.5作为是否为无序区的分界线。
[0017]图2三株单克隆抗体SDS
‑
PAGE检测图，其中1是单克隆抗体2，2是单克隆抗体2，3是单克隆抗体3。
[0018]图3本试剂盒标准曲线。
[0019]图4本试剂盒与ELISA检测结果比较。
具体实施方式
[0020]除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
[0021]除非特别说明，本专利技术采用的试剂、方法和设备为本
常规试剂、方法和设备。除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
[0022]实施例1：抗HCRP1单克隆抗体的制备
[0023]1.1抗原多肽的设计
[0024]首先对HCRP1蛋白的氨基酸序列进行分析。选择NP_001350100.1作为本研究的目的蛋白，对其无序区进行分析。结果显示(图1)，其中aa70～aa100、aa120～aa160、aa210～aa260的无序区的概率比较大，选择剩余的序列设计抗原多肽，具体如表1所示。
[0025]表1抗原多肽设计结果
[0026][0027]1.2单克隆抗体的制备
[0028](1)动物免疫将上述制备的抗原多肽与BSA偶联后作为抗原，分别对6周龄的BALB/c雌性小鼠进行免疫。
[0029]1)初次免疫，抗原均为50μg/只，加弗氏完全佐剂皮下多点注射，1ml/只。
[0030]2)间隔2周后进行第二次免疫，剂量途径与初次免疫一致，但佐剂更换为弗氏不完全佐剂。
[0031]3)间隔1周后进行第三次免疫，剂量同上，不加佐剂，腹腔注射，7天后采血测其效价，检测免疫效果，如果效价较高，3～5天后取脾进行细胞融合。
[0032](2)细胞融合
[0033]1)饲养细胞的制备在细胞融合后选择性培养过程中，由于大量骨髓瘤细胞和脾细胞相继死亡，此时单个或少数分散的杂交瘤细胞多半不易存活，通常必须加入其他活细胞使之繁殖，这种被加入的活细胞称为饲养细胞。
[0034]2)小鼠腹腔巨噬细胞的准备：用6
‑
10周龄的BALB/c小鼠。拉颈处死，浸泡于75％的酒精，消毒3min，用无菌剪刀剪开皮肤，暴露腹膜。用吸管注入6ml培养液，反复冲洗，吸出冲洗液。放入10ml离心管，1200rpm离心5min。用20％小牛血清的培养液混悬，调整细胞数为1*105/ml.加入96孔板，100ul/孔。放入37度孵箱培养。
[0035]3)骨髓瘤细胞的准备于融合前48
‑
36小时，将骨髓瘤细胞扩大培养。融合当天，将细胞从瓶壁轻轻吹下，收集于50ml离心管内。1本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种检测癌症相关蛋白表达水平的试剂盒，所述蛋白为HCRP1蛋白，其特征在于，所述的试剂盒包括有效量的HCRP1蛋白、两株有效量的抗HCRP1蛋白单克隆抗体和配套的检测试剂，所述两株抗HCRP1蛋白单克隆抗体为单克隆抗体1和单克隆抗体2，所述的编码单克隆抗体1的重链可变区和轻链可变区序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，所述的编码单克隆抗体2的重链可变区和轻链可变区序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的有效量的HCRP1蛋白为使用HCRP1蛋白配制的校准品，所述校准品浓度分别为3000pg/ml、500pg/ml、100pg/ml、25pg/ml、5pg/ml、2.5pg/ml、0pg/ml。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述单克隆抗体1识别的抗原表位的...
【专利技术属性】
技术研发人员：惠展，
申请(专利权)人：广州顺泰生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。