一种实时校准的免疫层析检测方法技术

本发明专利技术公开了一种实时校准的免疫层析检测方法。所述方法包括以下步骤：(1)采用多联检测卡同时检测待测样品和校准品，收集试纸条上测试线和质控线处的荧光曲线峰积分面积、半峰积分面积或峰高值中任意一种；(2)根据校准品的检测结果校正标准曲线，利用校正后的标准曲线对待测样品的结果赋值；所述校正的方法包括单点校准法、两点校准法、多点校准法或直接标曲制作法中任意一种。本发明专利技术重新设计免疫层析检测方法，开发了一种实时、方便、快捷的检测与校准一体化免疫层析检测方法，使得POCT荧光免疫层析检测结果校准更加方便，结果更加精准，运用更广。运用更广。

【技术实现步骤摘要】
一种实时校准的免疫层析检测方法


[0001]本专利技术属于生物
，涉及一种实时校准的免疫层析检测方法。

技术介绍

[0002]免疫层析技术主要运用在对样本中不同病原体、小分子化合物、生物标志物的进行诊断检测。该技术的标记物早期以胶体金为主，胶体金免疫层析技术已经在妇女健康指标、微生物抗原、毒品等检测领域广泛运用。近些年发展的起来的荧光免疫层析检测技术，由于其标记采用化学共价标记的方式，且荧光信号检测更容易通过仪器准确测量。以此，使得免疫层析从定性检测技术延伸为一种定量检测技术。
[0003]虽然荧光免疫层析技术将免疫层析检测可以实现定量化，但是由于大部分荧光材料具有荧光淬灭性的特点，导致其产品在存储及运输过程中会因为环境及温度变化而导致其荧光信号也会随之变化。在化学发光检测领域，这一变化通过定期用质控品进行校准的方式来对标曲进行定期修正，以确保检测结果的准确性，以做到很好的室间差。
[0004]不过由于即时检验(point
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of
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care testing，poct)小批量包装及检测场景的特点，使得目前荧光免疫层析技术基本都是出厂前一次定标，在保质期内再无校准步骤。正因为这个原因，使得荧光免疫层析技术在需要更精准检测的项目上得到的结果总是难以让人满意。也正因为此，人们在荧光免疫层析检测的优势POCT领域选择产品时还是把目光重点转向了准确性更好的单人份化学发光免疫检测技术。虽然化学发光免疫检测增加有定期的校准程序，但其是一个独立的校准系统，在实际操作过程中，很可能会出现不能及时校准的情况发生，且不易携带、操作复杂，运用场景有限。
[0005]而一些厂家也给荧光免疫层析试剂盒配置了质控品，进行定期校验，但由于不是一体的方式，校验常常不能有效执行。另外，校验需要额外的试剂，分担采购成本。且最主要的缺陷是由于免疫层析试剂盒体积较大，因此单盒数量较少(通常10～20份之间)，虽然是同一批次，但是不同盒间由于存储条件的差异也会导致结果偏差，最好的方式是实现盒间校验，甚至条间校验。如果按照传统的独立的质控校验方案，实现条间校验操作十分繁琐，如CN108226466A公开了一种免疫层析试纸条及免疫层析检测方法所述方法。
[0006]综上所述，如何开发一种方便、快捷的检测与校准一体化免疫层析检测技术，对于免疫层析检测领域具有重要意义。

技术实现思路

[0007]针对现有技术的不足和实际需求，本专利技术提供一种实时校准的免疫层析检测方法，本专利技术重新设计免疫层析检测方法，开发了一种实时、方便、快捷的检测与校准一体化免疫层析检测方法，使得POCT荧光免疫层析检测结果校准更加方便，结果更加精准，运用更广。
[0008]为达上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0009]第一方面，本专利技术提供一种实时校准的免疫层析检测方法，所述方法包括以下步
骤：
[0010](1)采用多联检测卡同时检测待测样品和校准品，所述多联检测卡由至少两个独立的单相检测卡拼接而成；所述单相检测卡包括试纸条，所述试纸条包括依次相连接的样品垫、标记垫、分析膜和吸水垫；所述分析膜上设置有测试线和质控线；收集试纸条上测试线和质控线处的荧光曲线峰积分面积、半峰积分面积或峰高值中任意一种；
[0011](2)根据校准品的检测结果校正标准曲线，利用校正后的标准曲线对待测样品的结果赋值；
[0012]所述校正的方法包括单点校准法、两点校准法、多点校准法或直接标曲制作法中任意一种。
[0013]本专利技术中，设计全新免疫层析检测方法，利用多联检测多联检测卡同时检测待测样品和校准品，真正意义实现校准品检测和样品检测在同一检测试纸、同一实验内进行，利用校准品的检测结果对事先标定的标准曲线进行校正，能够有效规避试纸条间差异及操作误差影响，解决了免疫层析检测试纸由于长期保存(距离标定时间较久)、条间差异(不同分装试纸条质量差异或保存差异)引起的检测失真的问题，以及常规独立校准方法校准、检测使用同一批次不同试纸条，在独立实验中进行，并非真正意义对实际检测试纸条进行校准，较难规避批间差异以及操作误差的问题，且操作简便，实现了实时、方便、快捷的检测与校准一体化检测。
[0014]可以理解，本专利技术中所述单点校准法、两点校准法、多点校准法或直接现做标曲法，具体方法分别包括：
[0015]单点校准法：a.原标曲主曲线确定b.通过单点定标检测定义浓度校准点，与主曲线上对应校准浓度的检测信号进行比较，c.计算检测信号与主曲线上校准点检测信号的不同，利用重新计算的检测信号轴(Y轴)和浓度轴(X轴)进行线性推断，确定补偿曲线；计算方法：X轴坐标值与主曲线对应，即对应浓度的值，Y轴坐标值＝(测量点Y轴值
‑
主曲线上对应点的Y轴值)/测量点Y轴值(公式)；d:对于主曲线上的点，借助补偿曲线计算其他的点，拟合出一条新的工作曲线；
[0016]两点或多点校准法：a.原标曲主曲线确定b.通过两点(或多点)定标检测两个(或多个)定义浓度校准点，与主曲线上对应校准浓度的检测信号进行比较，c.计算检测信号与主曲线上校准点检测信号的不同，利用重新计算的检测信号轴(Y轴)和浓度轴(X轴)进行线性推断，确定补偿曲线；计算方法：X轴坐标值与主曲线对应，即对应浓度的值，Y轴坐标值＝(测量点Y轴值
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主曲线上对应点的Y轴值)/测量点Y轴值(公式)；d:对于主曲线上的点，借助补偿曲线计算其他的点，拟合出一条新的工作曲线；
[0017]直接标曲法：直接在多联孔检测标曲梯度的标准曲线，然后将样本检测值带入到该标曲中直接计算得出样本浓度值。
[0018]可以理解，本专利技术中所述标准曲线为检测产品出厂前或使用前已使用标准品标定的标准曲线，统一用于后续检测定量。
[0019]优选地，所述标准曲线的构建方法包括：
[0020]利用多联检测卡检测梯度浓度的待测样品的标准品，计算每个标准品测试线和质控线处的荧光曲线峰积分面积、半峰积分面积或峰高值中任意一种的比值，以所述比值为纵坐标，以标准品浓度为横坐标，按照分段线性的方式构建标准曲线。
[0021]可以理解，本专利技术中，对标准曲线的校准可采用具有校准功能的荧光免疫分析仪，直接在荧光免疫分析仪中设定如单点校准法、两点校准法、多点校准法及直接标曲制作法程序。
[0022]可以理解，本专利技术中所述多联检测卡中独立的单相检测卡的个数可根据实际需求进行选择，如采用两点校准法，则至少采用三个独立的单相检测卡，也可继续增加单相检测卡用于平行测试，甚至直接用多个单相检测卡制作标曲后使用。
[0023]优选地，所述标记垫上含有荧光标记的抗体或抗原；所述T线上包被有另一个抗体或抗原；所述校准品包括已知浓度的能够捕获所述荧光标记的抗体或抗原的物质。
[0024]优选地，所述多联检测卡采用的检测方法原理为免疫双抗体夹心法、免疫双抗原夹心法、免疫竞争法或免疫间接法中任意一种。
[0025]优选地，所述样品垫和标本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种实时校准的免疫层析检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)采用多联检测卡同时检测待测样品和校准品，所述多联检测卡由至少两个独立的单相检测卡拼接而成；所述单相检测卡包括试纸条，所述试纸条包括依次相连接的样品垫、标记垫、分析膜和吸水垫；所述分析膜上设置有测试线和质控线；收集试纸条上测试线和质控线处的荧光曲线峰积分面积、半峰积分面积或峰高值中任意一种；(2)根据校准品的检测结果校正标准曲线，利用校正后的标准曲线对待测样品的结果赋值；所述校正的方法包括单点校准法、两点校准法、多点校准法或直接标曲制作法中任意一种。2.根据权利要求1所述的实时校准的免疫层析检测方法，其特征在于，所述标准曲线的构建方法包括：利用多联检测卡检测梯度浓度的待测样品的标准品，计算每个标准品测试线和质控线处的荧光曲线峰积分面积、半峰积分面积或峰高值中任意一种的比值，以所述比值为纵坐标，以标准品浓度为横坐标，按照分段线性的方式构建标准曲线。3.根据权利要求1所述的实时校准的免疫层析检测方法，其特征在于，所述标记垫上含有荧光标记的抗体或抗原；所述T线上包被有另一抗体或抗原；所述校准品包括已知浓度的能够捕获所述荧光标记的抗体或抗原的物质。4.根据权利要求1所述的实时校准的免疫层析检测方法，其特征在于，所述多联检测卡采用的检测方法原理为免疫双抗体夹心法、免疫双抗原夹心法、免疫竞争法或免疫间接法中任意一种。5.根据权利要求1所述的实时校准的免疫层析检测方法，其特征在于，所述样品垫和标记垫的材料包括玻璃纤维、聚酯膜、无纺布或滤纸，所述分析膜的材料包括硝酸纤维素膜，所述吸水垫的材料包括滤纸。6.根据权利要求1所述的实时校准的免疫层析检测方法，其特征在于，所述单相检测卡还包括扣合连接的上壳体、下壳体，所述试纸条设置在两个壳体内。...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑磊，费建枫，杨仁杰，
申请(专利权)人：杭州纽太生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：