一种重组抗EGFR单克隆抗体的纯化方法技术

本发明专利技术提供了一种重组抗EGFR单克隆抗体的纯化方法，属于医药领域。所述纯化方法包括以下步骤：(1)将表达重组抗EGFR单克隆抗体的细胞发酵培养，收集发酵液，过滤或离心，收集清液；(2)亲和层析；(3)低pH孵育；(4)阳离子交换层析；(5)阴离子交换层析；(6)超滤，除病毒，加入辅料，除菌，得到重组抗EGFR单克隆抗体原液。本发明专利技术的纯化方法能够有效去除重组抗EGFR单克隆抗体中生物活性低的酸性组分，使重组抗EGFR单克隆抗体中的HPLC

【技术实现步骤摘要】
一种重组抗EGFR单克隆抗体的纯化方法


[0001]本专利技术属于医药领域，具体涉及一种重组抗EGFR单克隆抗体的纯化方法。

技术介绍

[0002]单克隆抗体(monoclonal antibody，mAb)是由单一B细胞克隆产生的具有高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体，具有特异靶向性，适应症主要集中在肿瘤、自身免疫性疾病、感染性疾病等方面。自1997年全球第一个治疗性单克隆抗体Rituxin由FDA批准上市以来，单克隆抗体迅速在全球的生物医药领域迅猛发展，成为近年来研究热点之一。
[0003]表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)是一种跨膜糖蛋白，在实体瘤中呈现高表达。EGFR表达阳性的肿瘤具有恶性度高、侵袭力强的特点，且EGFR表达水平的高低与预后相关，因而成为当前肿瘤分子靶向治疗的一个重要靶点。以EGFR为靶标的单克隆抗体药物，能与内源性配体竞争结合EGFR，通过抑制酪氨酸激酶的激活、促进EGFR内化等作用产生抗肿瘤效应。
[0004]目前国内外已有3种抗EGFR本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组抗EGFR单克隆抗体的纯化方法，其特征在于：所述纯化方法包括以下步骤：(1)将表达重组抗EGFR单克隆抗体的细胞发酵培养，收集发酵液，过滤或离心，收集清液；(2)将步骤(1)所得滤液进行亲和层析，收集洗脱液；(3)将步骤(2)所得洗脱液进行低pH孵育，过滤，收集滤液；(4)将步骤(3)所得滤液进行阳离子交换层析，收集洗脱液；所述阳离子交换层析采用的洗脱液为由A相和B相组成的梯度洗脱液，其中B相的体积分数为5％
‑
65％；A相为含10
‑
40mM磷酸盐的溶液，pH值为5.5
‑
6.2；B相为含10
‑
40mM磷酸盐和0.05
‑
0.2M氯化钠的溶液，pH值为5.5
‑
6.2。2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于：步骤(1)中，所述细胞为CHO细胞；和/或，所述过滤为深层过滤。3.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于：步骤(2)中，所述亲和层析中，填料为Protein A、MabSelect、Prosep、POROS或TOSOH，所述Protein A优选为AF
‑
rProtein A，更优选为AF
‑
rProtein A Hc
‑
650F；所述亲和层析包括以下步骤：(2.1)淋洗：依次用淋洗液1和淋洗液2淋洗亲和层析柱，淋洗液1为含0.05
‑
0.2M柠檬酸和0.25
‑
1.0M氯化钠的溶液，pH为5.5
‑
6.2；淋洗液2为0.02
‑
0.10M醋酸钠溶液，pH为5.5
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6.2；优选地，淋洗液1为含0.1M柠檬酸和0.5M氯化钠的溶液，pH为6.0；淋洗液2为0.05M醋酸钠溶液，pH为6.0；(2.2)洗脱：用洗脱液进行洗脱，洗脱液为含0.05
‑
0.2M甘氨酸和0.01
‑
0.04M氯化钠的溶液，pH为2.8
‑
3.2；优选地，洗脱液为含0.1M甘氨酸和0.02M氯化钠的溶液，pH为3.0
±
0.1；(2.3)收集：收集洗脱液。4.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于：步骤(3)中，所述低pH孵育的温度为20
‑
25℃，时间为1.5h以上，pH值为3.2
‑
3.6。5.根据权利要求1
‑
4任一项所述的纯化方法，其特征在于：步骤(4)中，所述阳离子交换层析包括以下步骤：(4.1)前平衡：用平衡液冲洗阳离子交换层析柱；所述平衡液为含10
‑
40mM磷酸盐的溶液，pH值为5.5
‑
6.2；(4.2)上样...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭红卫，唐德芳，郭红，李婷玉，
申请(专利权)人：上海景泽生物技术有限公司成都景泽生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：