一种多肽-金属团簇探针及在制备分选耐药细胞和/或定量检测细胞膜蛋白试剂盒中的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种多肽

【技术实现步骤摘要】
一种多肽
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金属团簇探针及在制备分选耐药细胞和/或定量检测细胞膜蛋白试剂盒中的应用


[0001]本专利技术属于生物医学
，具体涉及一种多肽
‑
金属团簇探针及在制备分选耐药细胞和/或定量检测细胞膜蛋白试剂盒中的应用。

技术介绍

[0002]目前，化疗是癌症临床治疗中应用最广泛的治疗方法，多药耐药是肿瘤患者化疗失败的最重要原因之一。阿霉素(Adriamycin,ADR)是目前治疗乳腺癌的一线化疗药物，野生型乳腺癌细胞(MCF
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7)经长期ADR处理，将获得多药耐药表型的乳腺癌细胞(MCF
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7/ADR)，P
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gp蛋白表达量上调。达沙替尼(Dasatinib,DAS)作为一种具有临床潜力的多药耐药逆转剂，其针对乳腺癌多药耐药的逆转研究也被广泛报道，并已进入临床实验阶段。利用DAS降低耐药乳腺癌细胞P
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gp的表达，获得逆转耐药乳腺癌细胞模型(MCF
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7/ADR/DAS)。
[0003]细胞表面P
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糖蛋白(P
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gp)具有细胞外排泵的作用，是多药耐药最重要的生物标志物之一。因此，精准定量P
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gp蛋白对研究肿瘤细胞的多药耐药表型具有重要意义。目前，P
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糖蛋白定量方法主要有两类，流式细胞术和基于抗体的检测技术。但二者都有一定的不足之处，流式细胞术通过P
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gp的竞争性荧光底物间接研究其参与药物外排机制，受限于明确要求分析悬浮活细胞。而基于抗体检测技术(酶联免疫吸附分析与蛋白免疫印迹)分析细胞或组织裂解液中的P
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gp蛋白将裂解生物样本，不可避免导致蛋白损失，或丢失耐药细胞的详细信息。另一方面，在发生耐药的复杂肿瘤微环境中，存在各种耐药程度不同的肿瘤细胞。目前还未有关于不同耐药程度的肿瘤细胞的快速分选方法，也没有精准分析特定耐药表型的细胞亚群表达膜蛋白P
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gp表达量的方法，这无疑阻碍了肿瘤耐药进程及耐药逆转剂药效的评估。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种多肽
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金属团簇探针，具备特异性靶向P
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gp的特点，用于对不同耐药程度的细胞亚群进行快速准确分选目的。
[0005]本专利技术的目的还在于提供一种多肽
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金属团簇探针，建立一种基于团簇探针的光学与质谱联用技术分选耐药程度不同的肿瘤细胞，并定量细胞膜蛋白表达量的分析新方法，也可为逆转耐药的药物筛选奠定分析基础。
[0006]本专利技术提供了一种多肽
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金属团簇探针，包括通过共价键连接金属原子簇和靶向多肽；
[0007]所述靶向多肽包括氨基酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示的多肽。
[0008]优选的，在合成过程中，所述金属原子簇前驱体和靶向多肽的摩尔比为1:0.7～1.33。
[0009]优选的，所述金属原子簇的金属元素种类包括金、银、铂或钯。
[0010]本专利技术提供了所述多肽
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金属团簇探针在制备分选或评估耐药细胞的试剂盒中的
应用。
[0011]本专利技术提供了所述多肽
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金属团簇探针在制备定量检测细胞膜蛋白表达量的试剂盒中的应用。
[0012]本专利技术提供了一种基于所述多肽
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金属团簇探针的光学与质谱联用技术非诊断目的的快速分选耐药细胞及定量细胞膜蛋白表达量的方法，包括以下步骤：
[0013]1)建立单细胞金属含量分析标准曲线；
[0014]2)利用所述多肽
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金属团簇探针标记肿瘤细胞，对标记肿瘤细胞进行分选，收集不同表型的肿瘤细胞亚群；
[0015]3)采用激光烧蚀电感耦合等离子体质谱定量检测步骤2)中收集的各个肿瘤细胞亚群中单细胞的金属含量，将单细胞中金属含量换算成P
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gp蛋白表达量，得到肿瘤细胞的耐药程度。
[0016]优选的，步骤1)中所述分析耐药程度不同的肿瘤细胞中P
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gp表达量的方法，包括以下步骤：
[0017]A.利用“喷墨打印机”打印出一系列金质量梯度的金标准点，通过烧蚀包含不同质量的金标准点，统计金含量对应质谱强度信号，建立分析标准曲线；
[0018]B.以三种P
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gp蛋白表达量不同的乳腺癌模型细胞系为材料，制备系列比例混合的细胞系混合物；
[0019]C.用所述多肽
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金属团簇探针标记所述系列比例混合的细胞系混合物，对标记的系列比例混合的细胞系进行流式细胞分选，收集耐药程度不同的细胞亚群；
[0020]D.将所述耐药程度不同的细胞亚群分别经激光烧蚀电感耦合等离子体质谱技术分析得到单细胞金信号强度；
[0021]E.根据耐药程度不同的细胞亚群的单细胞金信号强度和分析标准曲线，及根据团簇中包含的金属原子的个数，得到耐药程度不同的细胞亚群中P
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gp蛋白表达量。
[0022]优选的，三种P
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gp蛋白表达量不同的乳腺癌模型细胞系包括MCF
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7、MCF
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7/ADR和MCF
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7/ADR/DAS。
[0023]优选的，步骤2)中所述细胞系的数量比为1：1。
[0024]优选的，步骤3)中肿瘤细胞的耐药程度低是指单个肿瘤细胞中P
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gp蛋白表达量达到80～90amol；
[0025]肿瘤细胞的耐药程度中等是指单个肿瘤细胞中P
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gp蛋白表达量为361～371amol；
[0026]肿瘤细胞的耐药程度高是指单个肿瘤细胞中P
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gp蛋白表达量为900～904amol。
[0027]本专利技术提供了一种多肽
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金属团簇探针，包括金属原子簇和靶向多肽通过共价键连接；所述靶向多肽包括氨基酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示的多肽。由于P
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gp蛋白为肿瘤耐药性标志物，本专利技术通过筛选特异性靶向P
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gp蛋白的多肽，以所述多肽为模板生物矿化合成所述的金属团簇探针，具有靶向性、荧光性及金属含量精确性高的特点，为分选耐药性细胞提供了有力工具。
[0028]本专利技术提供了一种基于所述多肽
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金属团簇探针的光学与质谱联用技术非诊断目的的快速分选耐药细胞及定量细胞膜蛋白表达量的方法，通过建立P
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gp蛋白表达量从低到高的三种乳腺癌细胞模型分别为MCF
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7、MCF
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7/ADR/DAS、MCF
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7/ADR，利用多肽
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金属团簇探针的靶向性、荧光性及精确分子组成，发展本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多肽
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金属团簇探针，其特征在于，包括通过共价键连接的金属原子簇和靶向多肽；所述靶向多肽包括氨基酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示的多肽。2.根据多肽
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金属团簇探针，其特征在于，在合成过程中，金属原子簇的前驱体和靶向多肽的摩尔比为1:0.7～1.33。3.根据多肽
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金属团簇探针，其特征在于，所述金属原子簇的金属元素种类包括金、银、铂或钯。4.权利要求1～3任意一项所述多肽
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金属团簇探针在制备分选或评估耐药细胞的试剂盒中的应用。5.权利要求1～3任意一项所述多肽
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金属团簇探针在制备定量检测细胞膜蛋白表达量的试剂盒中的应用。6.一种基于权利要求1～3任意一项所述多肽
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金属团簇探针的光学与质谱联用技术非诊断目的的快速分选耐药细胞及定量细胞膜蛋白表达量的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)建立单细胞金属含量分析标准曲线；2)利用所述多肽
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金属团簇探针标记肿瘤细胞，对标记肿瘤细胞进行分选，收集不同表型的肿瘤细胞亚群；3)采用激光烧蚀电感耦合等离子体质谱定量检测步骤2)中收集的各个肿瘤细胞亚群中单细胞的金属含量，将单细胞中金属含量换算成P
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gp蛋白表达量，得到肿瘤细胞的耐药程度。7.根据权利要求6所述方法，其特征在于，根据肿瘤细胞中P
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gp表达量分析耐药程度的方法，包括以下步骤：A.利用“喷墨打印机”打印出一系...

【专利技术属性】
技术研发人员：高靓，来紫荆，高学云，李函，
申请(专利权)人：北京工业大学，
类型：发明
国别省市：