一种葡萄糖酸钙中草酸盐的检测方法技术

本发明专利技术属于药物分析领域，具体涉及一种葡萄糖酸钙溶液中草酸盐的检测方法。采用高效液相色谱法，使用反相液相色谱柱，以含酸的水溶液为流动相A，甲醇为流动相B，设置流动相比例、检测波长、柱温、流速以及进样体积，按外标法以峰面积计算即得。本发明专利技术所公开的检测方法成本低、工艺步骤简单、准确度高，专属性好、灵敏度高、重复性好、中间精密度好；草酸盐与相邻峰之间的分离度大于1.5；定量限、检测限符合验证要求；6份加标供试品草酸盐含量RSD小于15.0%；12份加标供试品草酸盐含量RSD小于15.0%。份加标供试品草酸盐含量RSD小于15.0%。份加标供试品草酸盐含量RSD小于15.0%。

【技术实现步骤摘要】
一种葡萄糖酸钙中草酸盐的检测方法


[0001]本专利技术属于药物分析领域，具体涉及一种葡萄糖酸钙中草酸盐的检测方法。

技术介绍

[0002]葡萄糖酸钙（Calcium Gluconate）可用于预防和治疗钙缺乏症，如骨质疏松、手足抽搐症、骨发育不全、佝偻病以及儿童、妊娠和哺乳期妇女、绝经期妇女、老年人钙的补充。本品在用于治疗缺钙症时，可供口服和注射用，中国药典有明确规定注射品的澄清度，而草酸盐是影响此项指标的重要因素。为充分保障本品的安全性，美国药典（USP43）和葡萄糖酸钙公示稿均对可能污染本品的草酸盐进行了严格的控制（限度0.01%）。
[0003]因草酸盐极性较大，在一般色谱柱上无保留；紫外响应低，且本品限度控制严格，较难开发出常规的液相方法对其进行控制。美国药典和葡萄糖酸钙公示稿均采用阴离子交换色谱分离模式、电导检测器进行检测来提高草酸盐的响应。
[0004]鉴于电导检测器的特殊性，一般很少有该类型的检测器，常规检测需委外检测，会增加检测成本，浪费大量的时间。

技术实现思路

[0005]为了克服上述现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供了一种成本低、重复性好、专属性好、准确度高、灵敏度好、工艺步骤简单的葡萄糖酸钙中草酸盐的检测方法。
[0006]为实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案是：本专利技术公开了一种葡萄糖酸钙中草酸盐的检测方法，采用高效液相色谱法，检测方法包括以下步骤：（1）供试品溶液配制取葡萄糖酸钙溶液，加水微温使溶解，用水稀释制成每1ml含2mg葡萄糖酸钙的溶液；（2）对照品溶液配制取草酸钠，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml含草酸钠1.5μg（相当于每1ml中含草酸根（C2O
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）1μg）的溶液；（3）样品测定量取上述溶液注入液相色谱仪，色谱条件：采用反相液相色谱柱，以含酸的水溶液为流动相A，甲醇为流动相B，设置流动相比例、检测波长、柱温、流速以及进样体积，记录色谱峰，按外标法以峰面积计算即得。
[0007]根据本专利技术的实施方式，上述检测方法步骤（3）中，采用常规C18（如Kromasil 100
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C18，4.6*250mm，5μm）色谱柱，葡萄糖酸钙与草酸盐保留弱，且葡萄糖酸钙峰干扰草酸盐。专利技术人经过研究发现，因本专利技术是检测葡萄糖酸钙溶液中的有机酸，分子中由于酸性基团的存在使得有机酸分子的极性较大，给反相色谱的保留造成困难；检测有机酸往往流动相的水相比例较高，因此常规的反相C18色谱柱易发生相塌陷的现象，选择通过独特键合
工艺改进的Ultimate OAA柱或其性能相当的反相色谱柱，葡萄糖酸钙中草酸盐与相邻峰之间的分离度符合要求。本专利技术中的反相液相色谱柱优选Ultimate OAA柱，规格4.6
×
300mm，5μm。
[0008]根据本专利技术的实施方式，上述检测方法步骤（3）中，专利技术人研究发现，当选择水作流动相A时，葡萄糖酸钙峰峰形异常且干扰草酸盐峰；当使用酸性水溶液作为流动相时，能有效抑制有机酸解离，进而在色谱柱上达到有效分离效果，有机相A选自含酸的水溶液，优选磷酸溶液，更优选地，选自0.08%~0.1%磷酸溶液，进一步优选地，选自0.1%磷酸溶液。
[0009]根据本专利技术的实施方式，有机相的比例对有机酸的分离影响较大，当有机相比例低（低于20%），有未知峰干扰草酸盐，分离度不满足要求。专利技术人经研究发现，当水相流动相A相与有机相B相体积比选自65~75:25~35时，葡萄糖酸钙中草酸盐与相邻峰之间的分离度符合要求，体积比优选70:30。
[0010]根据本专利技术的实施方式，检测波长对于本专利技术所公开的检测方法灵敏度及峰干扰影响较大，当波长选择短（小于200nm），葡萄糖酸钙峰干扰草酸盐，波长选择长（大于230nm），方法灵敏度下降。本专利技术公开的检测方法中检测波长选自218~222nm，优选220nm。
[0011]根据本专利技术的实施方式，当进样体积选自10μl，流速选自0.8~1.2ml/min，柱温选自25~35℃时，草酸盐与相邻峰之间分离度均符合规定，不同色谱条件测定的加标供试品草酸盐含量与标准条件极差为0.006%。优选地，流速选自1.0ml/min，柱温选自30℃。
[0012]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术所公开的葡萄糖酸钙中草酸盐的检测方法成本低、工艺步骤简单、准确度高，专属性好、灵敏度高、重复性好、中间精密度好；草酸盐与相邻峰之间的分离度大于1.5；定量限、检测限符合验证要求；6份加标供试品草酸盐含量RSD小于15.0%；12份加标供试品草酸盐含量RSD小于15.0%。
附图说明
[0013]图1为草酸盐分析方法验证专属性
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空白液；图2为草酸盐分析方法验证专属性
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对照品溶液，草酸盐的保留时间为4.125min；图3为草酸盐分析方法验证专属性
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供试品溶液；图4为草酸盐分析方法验证线性图；图5为草酸盐分析方法验证定量限
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LOQ
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1；图6为草酸盐分析方法验证定量限
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LOQ
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2；图7为草酸盐分析方法验证定量限
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LOQ
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3；图8为草酸盐分析方法验证定量限
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LOQ
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4；图9为草酸盐分析方法验证定量限
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LOQ
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5；图10为草酸盐分析方法验证定量限
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LOQ
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6；图11为草酸盐分析方法验证检测限
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LOD；图12为草酸盐分析方法验证耐用性
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样品测定
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对照品溶液；图13为草酸盐分析方法验证耐用性
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样品测定
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供试品溶液（批号2）；图14为草酸盐分析方法验证耐用性
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样品测定
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供试品溶液（批号3）；图15为草酸盐分析方法验证耐用性
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样品测定
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供试品溶液（批号4）。
具体实施方式
[0014] 仪器与试药表1 仪器信息表2 对照品信息表3 样品信息 分析方法表4 草酸盐测定方法实施例1 专属性试验杂质定位与分离试验溶剂：水对照品贮备液：取草酸钠适量，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml含草酸根（C2O
42
‑
）1μg 的溶液。
[0015]对照品溶液：精密量取对照品贮备液适量，用水稀释制成每1ml含草酸根0.1μg 的
溶液。
[0016]供试品溶液：取本品适量，加适量水微温使溶解，用水稀释制成每1ml含2mg葡萄糖酸钙的溶液。
[0017]精密量取上述溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，色谱图见图1~图3。
[0018]结果表明：空白溶剂与葡萄糖酸钙不干扰草酸盐的测定；对照品溶液中草酸盐和相邻峰本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种葡萄糖酸钙中草酸盐的检测方法，其特征在于：采用高效液相色谱法，检测方法包括以下步骤：（1）供试品溶液配制取葡萄糖酸钙溶液，加水微温使溶解，用水稀释制成每1ml含2mg葡萄糖酸钙的溶液；（2）对照品溶液配制取草酸钠，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml含草酸钠1.5μg；（3）样品测定量取上述溶液注入液相色谱仪，色谱条件：采用反相液相色谱柱，以含酸的水溶液为流动相A，甲醇为流动相B，设置流动相比例、检测波长、柱温、流速以及进样体积，记录色谱峰，按外标法以峰面积计算即得。2.根据权利要求1所述的一种葡萄糖酸钙中草酸盐的检测方法，其特征在于：步骤（3）中所述的反相液相色谱柱选自Ultimate OAA柱，规格4.6
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300mm，5μm。3.根据权利要求1所述的一种葡萄糖酸钙中草酸盐的检测方法，其特征在于：步骤（3）中所述的含酸的水溶液选自磷酸溶液。4.根据权利要求3所述的一种葡萄糖酸钙中草酸盐的检测方法，其特征在于：步骤（3）中所述的含酸的水溶液选自0.08%~0...

【专利技术属性】
技术研发人员：余世兵，姜春雪，李龙霞，姚书扬，汤怀松，
申请(专利权)人：南京安杰新生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：